一、陈旧性骨骼DNA提取技术的研究（论文文献综述）
彭微,王建勋,王丽娜,张博,王建,葛晨阳,穆豪放[1]（2020）在《混合陈旧断骨的尸源鉴定1例》文中研究说明1案例1.1简要案情2017年7月,本鉴定中心受某地委托,要求帮助赵某（男）和朱某（男）从40余块混合的陈旧断骨检材中找到亲属的遗骨。通过沟通了解到,在某湖的施工过程中,误挖出40余块陈旧骨骼,其中有赵某父亲（死于1967年）和朱某爷爷（死于1949年）的尸骨。
张科,周小强[2]（2019）在《试剂盒联合硅胶膜法提取陈旧性骨骼和牙齿DNA》文中提出目的探讨PrepFiler Express BTATM试剂盒联合硅胶膜法提取人体陈旧性骨骼和牙齿DNA检材的方法。方法选取陈旧性骨骼、牙齿类生物检材各10份,预处理后进行取样,利用PrepFiler Express BTATM试剂盒进行裂解,按照QIAcube全自动化核酸纯化仪操作手册提取检材DNA,用Golbal Filer试剂盒进行扩增,3500XL型基因分析仪进行电泳分离和激光扫描分析,然后对20个研究样本的DNA检验结果进行初步分析。结果骨骼牙齿DNA检材经检验获得了相对满意的效果,检出13个完整基因分型的占80%。同对照样本相比,30个扩增循环数相同的条件下,经检验获得的峰值普遍较低。结论本方法对于陈旧性骨骼、牙齿的DNA提取效率有较明显提高,对于日常检案中的尸源认定有进一步的帮助,加快了案件侦破速度,是DNA实验室常规检案方法的有效补充。
徐曲毅[3]（2018）在《溺死相关浮游生物DNA检测技术研究》文中提出目前,在世界各地,溺水死亡是仅次于交通事故的第二大非正常死亡原因,其中多数溺水死亡为意外造成,但也有个别为自杀或他杀案件,因此,科学和准确地对水中尸体的死因进行法医学鉴定,对于解决案事件,缓解社会冲击与消除社会影响,具有积极意义。但是,溺死诊断还存在取材工具较为粗放易于污染,诊断技术过于单一和评价方法较少等影响诊断稳定性的的问题,亟需通过科学研究加以解决。本研究整合电路设计,机械制作,现代分子生物DNA技术与扫描电镜观察等系列技术,着重从溺死诊断取材工具、检验方法到结果评价等多个方面进行科学实用溺死诊断技术的研究,旨在尝试发明更为适用于快速准确诊断溺死的骨骼取样工具和提供更为科学准确的诊断溺死的分子生物学方法。一、以机械夹具及电动控制相关部件的构思,借助立式机械钻床的工作原理,设计制作了一种骨骼前处理的专业设备,共包含4个功能模块:1、供电电源,提供4路工作电路回路,分别对照明、紫外消毒、上下运动的钻头电机、水平移动的夹具电机进行控制;2、样品取样腔,以金属机械夹具,步进电机,可拆卸钻头配合形成取样工具替代手工取样;3、样品收集腔,大于30°的收集漏斗和连续切换的档位机构配合组成,支持样本的连续收集;4、整体采用304不锈钢材料,加上大于50千克的承重单元,确保设备运行中的稳定。选取了检案积累的尸体白骨20例,作为取样工具研究的材料。设备与手工取样所得的样本对DNA检验结果无显着影响（p>0.05）。设备取样过程未检测到发生污染现象。而对照的手工取样过程则检测到3例样本疑被污染。本设备取样过程耗时仅约为是手工取样的1/2。在一次检验成功率上,手工取样与设备取样则无显着性差异。分别使用骨骼设备和手工取样法对溺死尸体骨骼取样,结果表明检测到的硅藻种类和数量没有显着性差异,尸体的骨髓含有溺死相关硅藻,能满足溺死诊断要求。二、以建立溺死诊断的PCR-CE技术为主要目标,设计和筛选获得高特异性和灵敏度的引物,在筛选与溺死过程可能涉及的生物物种的标准株基础上,构建PCR-CE检测方法对溺死尸体进行初步验证,以便为后续的复合扩增检测体系奠定研究基础。1.通过Primer premier 5.0软件,Oligo7.0软件对引物进行设计和评价,PAGE方法验证,成功地筛选得到高特异性、强灵敏度和可靠稳定的3对引物（rbcL197,UPA159,A457）,3对引物分别针对硅藻的rbcL基因,UPA基因,18SrDNA基因,具有特异性。以16种藻类标准株、3种水生细菌、3种人体共生细菌和人的DNA进行特异性实验,研究结果表明,rbcL197和UPA159同为叶绿体上的基因片段,对针杆藻、直链藻、舟形藻、菱形藻、小环藻、脆杆藻均具有特异性;A457可对多个种类的藻类具有特异性,如念珠藻、针杆藻、舟形藻、直链藻、蛋白核小球藻、普通小球藻、斜生栅藻、镰形纤维藻、小环藻、菱形藻、脆杆藻等。扩增产物长度分别为197bp,159bp,655bp。应用引物PCR-CE建立的方法对案件检材样本（30例溺死尸体,3例陆地死亡空白,2例死后入水）进行初步研究和应用验证,引物rbcL197、UPA159和A457构建的PCR-CE方法的总检测阳性率分别为85.9%,83.7%,52.8%。引物rbcL197和UPA159所构建的PCR-CE检验方法的检出率及阳性率均比引物A457高,而利用引物rbcL197和UPA159建立的PCR-CE检验方法,两者对溺死尸体各种脏器及水样中藻类DNA检验阳性率,无统计学差异（p>0.05）。2.通过Primer premier 5.0软件和Oligo7.0软件对引物设计和评价,PAGE方法验证,成功地筛选得到高特异性、强灵敏度和可靠稳定的4对引物（AH,Ah,AHH,AER）,分别针对嗜水气单胞菌的gyrB基因、16SrDNA基因、hly基因、aer基因,具有特异性。以16种藻类标准株、1种水生细菌、1种人体共生细菌和人的DNA进行特异性实验,仅嗜水气单胞菌显示有阳性PCR结果,扩增产物长度分别为195bp,350bp,127bp,175bp。应用这4对引物建立PCR-CE检测方法,对案件检材样本（36例溺死尸体,4例陆地死亡空白,1例死后入水）进行初步研究和应用验证,引物AH,Ah,AHH,AER构建的PCR-CE方法的总检测阳性率分别为86.1%、52.8%、83.3%、44.4%。比较引物AH,AHH构建的检验体系的检验阳性率,两者间无统计学差异（p>0.05）。三、比较目时诊断溺死的硅藻形态学检验的主要分离富集方法,以确认形态学分离富集的最佳选择。并使用该方法对建立的PCR-CE检测技术进行比较评价。1.通过60例溺死的实验兔,比较目前法医实验室3种主要应用的硅藻检验方法:（A）强酸微波消化-尼龙膜抽滤-电镜检测法,（B）强酸微波消化-PES膜抽滤-电镜检测法,（C）强酸消化-离心富集-电镜检测法（传统的强酸消化离心富集方式）,结果证明:（A）方法在硅藻的总回收率（76.9±20.2%）和回收过程对硅藻的破坏率（0.9±1.1%）,及酸液耐受性上等多个方面指标为最优;（B）方法的硅藻总回收率与（A）没有显着性差异,在抗酸耐久能力上不如（A）,但PES膜可透明化,可应用于成本较低的光镜检验,更有推广的可行性。2.以（A）方法,评价构建的浮游藻类和浮游细菌（嗜水气生单胞菌）DNA的PCR-CE检测方法。浮游藻类DNA的引物UPA159和rbcL197构建的PCR-CE检测方法（总阳性率分别为85.9%,83.7%）和MD-VF-AutoSEM法诊断溺死的阳性率（总阳性率为97.2%）之间无统计学差异,而引物A457则具有统计学差异。利用引物AH和AHH建立的PCR-CE检测方法,对嗜水气生单胞菌进行检测,总阳性率分别为86.1%,83.3%。和MD-VF-Auto SEM方法检测硅藻的总阳性率为97.2%比较,两者对诊断溺死的阳性率之间无统计学差异,而引物Ah和AER（52.8%,44.4%）的方法则具存在统计学差异。
宋振,宋三平,凃政,赵杰,贺永锋[4]（2018）在《两种提取骨骼、牙齿DNA的方法》文中提出目的建立提取骨骼、牙齿DNA的新方法。方法收集380例骨骼、牙齿检材,其中347份为常规骨骼、牙齿（常规组）,33份为陈旧骨骼、牙齿（疑难组）。常规组检材以Handy-Eco仪器、疑难组则用冷冻研磨仪研磨成粉,以Kingfisher自动化系统提取DNA,用Identifiler Plus进行STR分型检测。结果用HandyEco Kingfisher法（H-K法）成功提取345例常规骨骼、牙齿检材的DNA,成功率99.42%;用Freeze-mill Kingfisher法（FM-K法）成功获取32例疑难骨骼、牙齿检材的DNA,成功率96.97%。结论采用H-K法和FM-K法对骨骼和牙齿DNA的检验成功率较高,可选择应用于工作实践中。
王传海,李湘秦,吴勇,徐程,杜舟[5]（2017）在《骨骼及牙齿DNA快速提取方法在DVI中的应用》文中研究表明目的探讨骨骼及牙齿DNA快速提取方法在灾难受害者身源鉴定中的应用可行性。方法将滑坡事故中需鉴定身份的43份骨骼、47份牙齿研磨成粉,以King Fisher Duo Prime微量提取系统提取DNA,仅用约3 h即可对单份骨骼或牙齿完成DNA提取。进行STR分型检验。结果测试的90份检材均成功获得STR分型。结论使用King Fisher Duo Prime微量提取系统可以对骨骼及牙齿进行快速DNA提取,适用于灾难受害者的身源鉴定。
丁少成,张怀才,高林林[6]（2017）在《PrepFiler Express BTATM裂解液联合硅珠法快速提取骨骼DNA》文中研究说明目的建立方便、快捷的提取骨骼DNA的方法。方法对15份长骨样本清洗消毒后,采用电钻钻取骨屑,使用PrepFiler Express BTATM裂解液进行裂解消化后,应用手工硅珠吸附纯化进行DNA提取检验。结果有14份样本获得满意的STR分型,仅1份样本未获得STR分型,检出率为93.33%。结论本研究建立的骨骼DNA快速提取方法操作简单、便捷、有效,适应性强,值得推广应用。
李斌,吕政[7]（2017）在《利用AutoMate ExpressTM系统提取陈旧性骨骼DNA》文中指出目的建立利用AutoMate ExpressTM系统提取陈旧性骨骼DNA的方法。方法将骨骼用冷冻研磨机研磨成骨粉,经AutoMate ExpressTM系统提取后,用IdentifilerPlus、MiniFilerTM试剂盒扩增分型。结果10例保存在不同环境中、死亡时间在1020年的骨骼样本利用AutoMate ExpressTM系统3 h内完成DNA提取,有8例获得完整STR分型。结论 AutoMate ExpressTM系统能快速、高效地提取陈旧性骨骼DNA,可应用于法医实际案件检验。
苟春宝,郝晓明,樊哲仁,张武强[8]（2016）在《陈旧性骨骼DNA两种扩增试剂盒的扩增效果比较1例》文中进行了进一步梳理骨骼是白骨化尸体检验中常见的生物检材,且由于陈旧性骨骼组织高度降解,DNA含量少,造成DNA检验较为困难,故针对陈旧性骨骼的DNA提取方法,有较多的报道[1-3]。但作者注意到,对于提取的陈旧性骨骼DNA,大多采用Identifiler-Plus扩增试剂盒进行复合扩增,采用GlobalFiler扩增试剂盒
骆继怀,孙红兵,杨鑫,张子龙,王涛[9]（2016）在《不同前处理方法提取牙齿DNA的比较》文中研究表明目的对三种不同前处理方法提取的牙齿DNA浓度进行比较,建立一种操作简便、经济适用、浓度较高的牙齿DNA提取的前处理方法。方法选择源自7具尸体的共21颗磨牙,每具尸体的3颗磨牙随机按牙屑法、球磨法、液氮研磨法进行前处理,并分别称取50 mg,采用Auto Mate ExpressTM法医DNA提取系统提取DNA,对三种方法提取的DNA浓度和STR分型结果进行比较。结果牙屑法、球磨法和液氮研磨法提取的DNA质量浓度分别为0.055 61.989 1、0.036 61.175 6和0.037 81.249 0 ng/μL,牙屑法提取的DNA质量浓度较高（P<0.05）,且STR分型成功率高。结论牙屑法结合Auto Mate ExpressTM法医DNA提取系统是提取牙齿DNA的一种切实可行的方法,可应用于法医学鉴定实践中。
罗亚,黄江,梁芹,戴佳琳,王启燕,张红玲,王杰[10]（2016）在《陈旧性骨骼DNA提取方法的探索》文中认为目的探索陈旧性骨骼DNA的提取方法。方法收集415年陈旧骨骼样本,去除表面污染物,经脱钙、裂解提取各样本DNA,使用QIAquickPCR Purification试剂盒进行纯化,检测DNA纯度和浓度,应用Power PlexFusion荧光标记复合扩增系统进行扩增,AB-3500型遗传分析仪检测STR分型。结果 15例陈旧性骨骼经提取、纯化,提取的DNA模板浓度较高,在42.9176.4ng/μL之间,A260/A280值较稳定,在1.061.40之间;所有样本均获得完整STR分型。结论该方法简便快速,提取效果好,能够适用于法医学实际检案。
二、陈旧性骨骼DNA提取技术的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、陈旧性骨骼DNA提取技术的研究（论文提纲范文）
（1）混合陈旧断骨的尸源鉴定1例（论文提纲范文）
| 1 案例 |
| 1.1 简要案情 |
| 1.2 DNA检验 |
| 1.2.1 DNA提取 |
| 1.2.2 PCR扩增与STR分型 |
| 1.2.3 检验结果 |
| 2 讨论 |
（2）试剂盒联合硅胶膜法提取陈旧性骨骼和牙齿DNA（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 样本来源 |
| 1.2 主要仪器与试剂 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 样本处理 |
| 1.3.2 DNA的提取 |
| 1.3.3 DNA的扩增及电泳检测 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
（3）溺死相关浮游生物DNA检测技术研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 第1节 溺死与相关浮游生物的研究概述 |
| 1.1 溺死的现状与诊断方法的研究意义 |
| 1.2 溺死诊断的检验方法研究进展 |
| 第2节 溺死诊断尸体骨骼取样设备的研究进展 |
| 第3节 溺死相关的硅藻形态学检验方法的研究进展 |
| 3.1 硅藻的分离富集方法 |
| 3.2 硅藻检验的形态学检测前处理措施 |
| 3.3 硅藻形态学检验检测方法 |
| 第4节 溺死诊断的相关浮游生物的基因检测 |
| 4.1 溺死诊断的相关藻类及靶基因 |
| 4.2 溺死诊断的相关细菌及靶基因 |
| 第5节 研究意义、目的、内容与思路 |
| 5.1 研究意义与目的 |
| 5.2 研究内容与思路 |
| 5.3 课题来源 |
| 第二章 溺死尸体骨骼取样设备的研究 |
| 第1节 溺死尸体骨骼取样设备的总体规划与设计 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 结果与讨论 |
| 第2节 溺死尸体的骨骼取样工具在尸源鉴定应用研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第3节 溺死尸体骨骼取样工具在溺死诊断的应用研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 结果 |
| 本章小结 |
| 第三章 PCR检验溺死检测相关浮游藻类的方法建立的研究 |
| 第1节 PAGE方法筛选溺死相关硅藻引物研究 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 第2节 溺死检测相关硅藻的PCR-CE检验方法建立的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 本章小结 |
| 第四章 PCR检验嗜水气生单胞菌的方法建立的研究 |
| 第1节 PCR-PAGE方法筛选嗜水气生单胞菌特异性引物的研究 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 第2节 嗜水气生单胞菌PCR-CE检验方法建立的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 本章小结 |
| 第五章 硅藻分离富集方法优化及溺死相关的浮游生物PCR-CE检测方法的评估 |
| 第1节 硅藻分离富集方法优化 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 第2节 硅藻抽滤电镜法对溺死相关的浮游藻类与浮游细菌的PCR检测方法的评估 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 本章小结 |
| 结论、创新点与展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的论文与成果 |
| 致谢 |
| 附录 |
（4）两种提取骨骼、牙齿DNA的方法（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 检材来源 |
| 1.2 主要仪器与试剂 |
| 1.3 检材预处理 |
| 1.3.1 常规组骨骼、牙齿预处理 (保存2年以内) |
| 1.3.2 疑难组骨骼 (牙齿) 预处理 (保存2年~46年) |
| 1.4 检材DNA提取 |
| 1.4.1 Handy-Eco Kingfisher法 (H-K法) |
| 1.4.2 H-K法优化比较 |
| 1.4.3 Freeze-mill Kingfisher法 (FM-K法) |
| 1.5 STR分型检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 H-K法提取常规组骨骼、牙齿DNA的结果 |
| 2.2 H-K法优化后提取DNA的结果 |
| 2.3 FM-K法提取疑难组骨骼牙齿DNA的结果 |
| 2.4 案例应用 |
| 3 讨论 |
（5）骨骼及牙齿DNA快速提取方法在DVI中的应用（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 仪器和试剂 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 样本预处理 |
| 1.3.2 DNA提取 |
| 1.3.3 DNA定量 |
| 1.3.4 扩增及电泳 |
| 2 结果 |
| 2.1 DNA定量检测 |
| 2.2 STR分型检测 |
| 3 讨论 |
（6）PrepFiler Express BTATM裂解液联合硅珠法快速提取骨骼DNA（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 主要试剂和仪器 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 样本准备与提取 |
| 1.3.2 扩增与检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 样本结果 |
| 2.2 案例应用 |
| 3 讨论 |
（7）利用AutoMate ExpressTM系统提取陈旧性骨骼DNA（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样本材料 |
| 1.2 仪器与试剂 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 骨骼前处理 |
| 1.3.2 DNA提取 |
| 1.3.3 DNA定量 |
| 1.3.4 STR扩增及其电泳分型 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
（9）不同前处理方法提取牙齿DNA的比较（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样本来源 |
| 1.2 样本前处理 |
| 1.3 DNA提取 |
| 1.4 DNA定量及STR分型 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
（10）陈旧性骨骼DNA提取方法的探索（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1. 1 样本来源及预处理 |
| 1. 2 DNA提取及定量 |
| 脱钙 |
| 裂解 |
| 纯化 |
| 1. 3 PCR复合扩增及电泳检测 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
四、陈旧性骨骼DNA提取技术的研究（论文参考文献）
- [1]混合陈旧断骨的尸源鉴定1例[J]. 彭微,王建勋,王丽娜,张博,王建,葛晨阳,穆豪放. 法医学杂志, 2020(06)
- [2]试剂盒联合硅胶膜法提取陈旧性骨骼和牙齿DNA[J]. 张科,周小强. 河南科技大学学报(医学版), 2019(03)
- [3]溺死相关浮游生物DNA检测技术研究[D]. 徐曲毅. 广东工业大学, 2018(09)
- [4]两种提取骨骼、牙齿DNA的方法[J]. 宋振,宋三平,凃政,赵杰,贺永锋. 刑事技术, 2018(01)
- [5]骨骼及牙齿DNA快速提取方法在DVI中的应用[J]. 王传海,李湘秦,吴勇,徐程,杜舟. 刑事技术, 2017(06)
- [6]PrepFiler Express BTATM裂解液联合硅珠法快速提取骨骼DNA[J]. 丁少成,张怀才,高林林. 法医学杂志, 2017(05)
- [7]利用AutoMate ExpressTM系统提取陈旧性骨骼DNA[J]. 李斌,吕政. 法医学杂志, 2017(04)
- [8]陈旧性骨骼DNA两种扩增试剂盒的扩增效果比较1例[A]. 苟春宝,郝晓明,樊哲仁,张武强. 法医临床学专业理论与实践——中国法医学会·全国第十九届法医临床学学术研讨会论文集, 2016
- [9]不同前处理方法提取牙齿DNA的比较[J]. 骆继怀,孙红兵,杨鑫,张子龙,王涛. 法医学杂志, 2016(02)
- [10]陈旧性骨骼DNA提取方法的探索[J]. 罗亚,黄江,梁芹,戴佳琳,王启燕,张红玲,王杰. 中国法医学杂志, 2016(01)