一、大鼠脑梗死早期活性MMP-9表达的实验研究（论文文献综述）
宋扬扬[1]（2021）在《针刺提高脑梗死溶栓安全性的RhoA/ROCK信号通路机制及临床效应观察》文中进行了进一步梳理目的:（1）在脑梗死模型大鼠中明确针刺提高脑梗死rt-PA静脉溶栓安全性的效应并探讨针刺调控RhoA/ROCK信号通路的机制。（2）在临床验证和观察针刺提高脑梗死患者rt-PA静脉溶栓安全性的效应,以期为广大脑梗死患者赢得更多的救治机会,为提高脑梗死溶栓安全性这一难题提供新思路、新方法。方法:一、实验研究:实验一、针刺提高脑梗死模型大鼠rt-PA静脉溶栓安全性的效应研究:将SD大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组。采用改良自体血栓栓塞法制备脑梗死大鼠模型,4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组在脑梗死模型成功后的4.5h予rt-PA静脉溶栓;针刺+4.5h溶栓组在4.5h rt-PA静脉溶栓治疗后立刻予醒脑开窍针法进行针刺干预,留针30min,每日1次,7次为1疗程,治疗1个疗程;假手术组、模型组在脑梗死模型成功后的4.5h注射生理盐水;假手术组、模型组和4.5h溶栓组只给予相同的固定。观察针刺对各组大鼠神经行为学评分、脑梗死体积百分比、血红蛋白含量、EB含量和脑含水量百分比的影响。实验二、针刺提高脑梗死模型大鼠溶栓安全性的RhoA/ROCK信号通路机制研究:采采用和实验一相同的模型、分组及干预方法,用Western blot检测RhoA/ROCK信号通路指标（RhoA、ROCK2、MLC）及BBB结构相关蛋白（Claudin5、ZO-1、Occludin）的表达,用 Real-time PCR 检测 RhoA、ROCK2 mRNA表达,用免疫荧光检测ZO-1、Claudin5以及MMP9蛋白的表达。二、临床观察:将脑梗死予rt-PA静脉溶栓的80例患者随机分为观察组和对照组,每组40例。对照组仅予4.5h溶栓时间窗内rt-PA静脉溶栓治疗,观察组在rt-PA静脉溶栓之后立刻给予醒脑开窍针刺法治疗,留针30min,每日针刺1次,7次为1疗程,连续治疗2个疗程,两个疗程之间间隔1天。比较两组患者的总有效率,NIHSS评分,sICH发生率,不良事件发生率,sICH相关指标（TC、LDL-C、MPV、PLT、D-二聚体、纤维蛋白原、CRP）,依从性。结果:一、实验研究1.针刺提高脑梗死模型大鼠rt-PA静脉溶栓安全性的效应研究（1）神经行为学评分:与模型组相比,4.5h溶栓组和针刺+4.5h溶栓组神经行为学评分均降低（P<0.05）。与4.5h溶栓组相比,针刺+4.5h溶栓组神经行为学评分降低（P<0.01）。（2）脑梗死体积百分比:与模型组相比,4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组脑梗死体积百分比均减小（P<0.01）。与4.5h溶栓组相比,针刺+4.5h溶栓组梗死体积百分比减小（P<0.05）。（3）BBB通透性:与模型组相比,4.5h溶栓组EB含量升高（P<0.01）,针刺+4.5h溶栓组EB含量降低（P<0.01）。与4.5h溶栓组相比,针刺+4.5h溶栓组EB含量降低（P<0.01）。（4）脑含水量百分比:与模型组相比,4.5h溶栓组和针刺+4.5h溶栓组脑含水量百分比均降低（P<0.01）。与4.5h溶栓组相比,针刺+4.5h溶栓组脑含水量百分比降低（P<0.05）。（5）脑出血性转化:与模型组相比,4.5h溶栓组血红蛋白含量升高（P<0.01）,针刺+4.5h溶栓组血红蛋白含量差异无统计学意义（P>0.05）。与4.5h溶栓组相比,针刺+4.5h溶栓组血红蛋白含量降低（P<0.01）。2.针刺提高脑梗死模型大鼠溶栓安全性的RhoA/ROCK信号通路机制研究（1）RhoA/ROCK信号通路指标:与模型组相比,4.5h溶栓组RhoA、ROCK2蛋白及mRNA表达均升高（P<0.01）;针刺+4.5h溶栓组RhoA、ROCK2蛋白及mRNA表达均降低（P<0.01）。与4.5h溶栓组相比,针刺+4.5h溶栓组RhoA、ROCK2蛋白及mRNA表达均降低（P<0.01）。与模型组相比,4.5h溶栓组MLC蛋白表达升高（P<0.05）,针刺+4.5h溶栓组MLC蛋白表达降低（P<0.05）;与4.5h溶栓组相比,针刺+4.5h溶栓组MLC蛋白表达降低（P<0.01）。（2）MMP9蛋白表达:与模型组相比,4.5h溶栓组MMP9蛋白表达升高（P<0.05）,针刺+4.5h溶栓组MMP9蛋白表达降低（P<0.05）。与4.5h溶栓组相比,针刺+4.5h溶栓组MMP9蛋白表达降低（P<0.01）。（3）ZO-1、Claudin5、Occludin蛋白表达:与模型组相比,4.5h溶栓组ZO-1、Claudin5、Occludin 蛋白表达均降低（P<0.05,P<0.05,P<0.01）,针刺+4.5h溶栓组ZO-1、Claudin5、Occludin蛋白表达均升高（P<0.05,P<0.05,P<0.01）。与 4.5h 溶栓组相比,针刺+4.5h 溶栓组 ZO-1、Claudin5、Occludin蛋白表达均升高（P<0.01）。二、临床观察1.两组治疗后总有效率的比较观察组总有效率为95%,对照组为88.57%,观察组高于对照组（P<0.05）。2.两组治疗后NIHSS评分的比较治疗后观察组和对照组NIHSS评分均较本组治疗前降低（P<0.05）,且观察组低于对照组（P<0.05）。3.两组sICH发生率的比较观察组sICH发生率为0%,对照组为10%,观察组低于对照组（P<0.05）。4.两组不良事件发生率的比较观察组不良事件发生率为0%,对照组为12.5%,观察组低于对照组（P<0.05）。5.两组sICH相关指标的比较治疗后观察组和对照组LDL-C水平、MPV和CRP水平与本组治疗前相比均降低（P<0.05）。治疗后观察组D-二聚体水平低于本组治疗前（P<0.05）。治疗后观察组PLT与纤维蛋白原水平均高于对照组（.P<0.05）,观察组D-二聚体、CRP水平低于对照组（P<0.05）。6.两组依从性的比较两组均完成临床观察,依从性均为100%（P>0.05）。结论:1.针刺可改善脑梗死大鼠溶栓后神经功能,减小脑梗死体积,减轻脑水肿程度,减轻溶栓后BBB破坏的加重和减少HT的发生,达到提高溶栓疗效和安全性的效应。2.针刺可通过抑制RhoA/ROCK信号通路途径、有效保护BBB,以提高脑梗死大鼠rt-PA静脉溶栓安全性。3.针刺及时介入可提高脑梗死患者rt-PA静脉溶栓的疗效,降低sICH的发生率,提高溶栓安全性。为临床提高脑梗死溶栓安全性的难题提供了新的思路和方法。
吴琼[2]（2021）在《基于数据挖掘和网络药理学探讨中药治疗TON的用药规律及机制》文中指出第一部分基于数据挖掘探讨中药治疗外伤性视神经病变的用药规律目的:整理近20年以中药治疗外伤性视神经病变（Trauma optic neuropathy,TON）的临床研究类文献,运用数据挖掘技术对文献中涉及的中药处方进行系统分析,探究中药治疗TON的用药规律,为临床提供参考和指导。方法:通过计算机检索中国知识资源总库（China national knowledge infrastructure,CNKI）、万方数据库、维普数据库自2000年1月至2020年9月关于中药治疗TON的临床文献,按照纳入、排除标准筛选文献、提取数据,使用Excel 2016进行中药频次频率、四气五味、归经、功效特点分析,使用SPSS Modeler 18.0软件对频次≥7的高频中药进行关联规则分析,使用IBM SPSS25.0对频次≥5的高频中药进行聚类分析。结果:（1）本研究共纳入文献38篇,获得处方38个,共涉及74味中药,中药累及使用频次为392次,使用频次最多的前五位中药为:当归、川芎、赤芍、红花、柴胡。最常用的基础方为血府逐瘀汤和除风益损汤。（2）药物归经上,归于足厥阴肝经的中药频次最高,其次为手少阴心经、足太阴脾经;药性方面,温性药与寒性药使用频次最高;药味方面,使用频次在前三位的是苦味药、甘味药和辛味药。（3）中药功效类别上,使用频次位于前两位的是活血化瘀药和补虚药。（4）根据关联规则分析,置信度为100%时,支持度位于前三位的关联规则是川芎-桃仁、川芎-桃仁-红花、川芎-赤芍-红花。（5）根据聚类分析,可将中药聚为四类:藁本、前胡、防风聚为一类;熟地、白芍、当归聚为一类;红花、桃仁、牛膝、川芎聚为一类;柴胡、枳壳、桔梗聚为一类。结论:（1）中医治疗TON的高频次中药为当归、川芎、赤芍、红花、柴胡,功效类别以活血化瘀药和补虚药为主,支持度前三位的关联规则为川芎-桃仁、川芎-桃仁-红花、川芎-赤芍-红花,均体现中医治疗TON的治疗原则为活血化瘀、补虚行气;（2）治疗TON的中药多归于肝、心二经,且以苦味药和甘味药为主,寒温属性药物均有,符合活血化瘀药和补虚药的性味归经特点;（3）治疗TON最常用的处方为血府逐瘀汤和除风益损汤,聚类分析展现了治疗TON常用处方的组方配伍特点,即以活血化瘀药（红花、桃仁、川芎等）和补虚药（白芍、当归等）为主,辅以祛风解表药（藁本、前胡、防风）与行气药（柴胡、枳壳、桔梗）。第二部分基于网络药理学探究红花治疗外伤性视神经病变的机制目的:基于网络药理学及生物信息学的研究思路,探究红花治疗TON视神经损伤的潜在分子网络调控机制。方法:（1）通过中医药系统药理学数据库分析平台（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP）筛选红花的活性成分及作用靶点,利用Uniprot数据库查询靶点蛋白对应的基因名称,并通过Cytoscape软件构建红花有效成分-基因靶点的调控网络;（2）在基因表达数据库（Gene Expression Omnibus,GEO）中筛选TON相关芯片,使用GEO2R筛选疾病差异基因,使用韦恩分析得到红花有效成分治疗TON的核心靶点;（3）使用Cytoscape 3.7.2软件构建红花对TON基因靶点的蛋白质相互作用网络（protein-protein interaction network,PPI）,使用 BisoGenet、CytoNCA 软件包提取核心互作网络;（4）使用DAVID数据平台对筛选出的红花治疗TON的核心靶点进行基因本体论（geneontology,GO）功能注释和日本京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析。结果:（1）本研究共获得红花17种活性成分,作用靶点共205个;筛选出GSE17117芯片中TON的差异表达基因共617个,其中上调基因429个,下调基因188个;（2）经过韦恩分析,筛选出红花治疗TON的核心靶点11个;（3）通过PPI网络构建和网络拓扑分析,共筛选出红花治疗TON的14个核心靶点蛋白;（4）GO富集分析结果显示,红花作用于TON的靶点主要富集于胞外间隙、细胞质基质、顶端细胞;所涉及的生物学过程包括凋亡过程的负调控、对有机物质的应答、凋亡过程中的正调控等;相关的分子功能主要为结合核激素受体、结合蛋白质复合物。（5）KEGG调控通路富集分析结果显示,红花调控TON的通路主要有肿瘤坏死因子（tumornecrosisfactor,TNF）信号通路、癌症信号通路、雌激素信号通路、Toll样受体信号通路。结论:通过对红花有效成分治疗TON的网络药理学分析,我们推断出红花可能通过调节Caspase-3、基质金属蛋白酶-9（Matrix Metallopeptidas 9,MMP9）等靶点调控TNF等相关信号通路,干预视网膜神经节细胞（Retinal Ganglion Cells,RGCs）凋亡等生物学过程,从而在TON的治疗中起到视神经保护的作用。第三部分红花注射液对L-谷氨酸钠诱导的RGC-5细胞TNF凋亡信号通路的影响目的:在前两部分研究的基础上,运用体外实验验证红花注射液对视神经损伤后RGCs凋亡的调控机制。方法:（1）实验采用星孢菌素（Staurosporine,STSN）诱导RGC-5神经元性分化;采用CCK-8法,筛选RGC-5谷氨酸损伤模型中L-谷氨酸钠最佳损伤浓度和损伤时间,以及红花注射液干预RGC-5细胞的最佳浓度。（2）根据检测目标的需要,将RGC-5细胞按照1×105/ml的浓度接种至相应培养板中;经STSN诱导后的,分别标记为5个实验组:细胞对照组（A组）、L-谷氨酸钠模型组（B组）、红花注射液组（C组）、抑制剂Ac-DEVD-CHO组（D组）、红花注射液联合抑制剂组（E组）。A组添加DMEM-H培养基,B-E组加入所筛选的最佳L-谷氨酸钠损伤浓度培养基。根据筛选出的L-谷氨酸钠损伤时间孵育后,按照分组进行加样:A组加入DMEM-H培养基,B组加入同浓度的L-谷氨酸钠培养基,C组加入筛选出最佳浓度的红花注射液培养基,D组加入10μmol/L的Ac-DEVD-CHO培养基,E组加入最佳浓度的红花注射液联合Ac-DEVD-CHO培养基。培养24h后进行检测。（3）实验指标检测:采用免疫荧光法检测RGC-5细胞中Brn3a的表达;采用CCK-8法检测各实验组RGC-5细胞的存活率;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Western-blot检测各组细胞I型TNF受体（tumor necrosis factor receptorI,TNFR1）、死亡结构域相关蛋白（Fas-associated protein with death domain,FADD）、Caspase-8、Caspase-3 蛋白的表达水平。结果:（1）经筛选,浓度为0.5 μmol/L的STSN培养基孵育1 h可诱导RGC-5发生神经元形态改变。浓度为8mmol/L的L-谷氨酸钠干预18h所建立的RGC-5损伤模型,细胞凋亡率能够达到43.98%,最接近细胞半数凋亡剂量（half maximal inhibitory concentration,IC50）。60%的红花注射液干预 RGC-5 细胞 24h,细胞抑制率为41.34%,最接近IC50。最终选择0.5 μmol/LSTSN诱导RGC-5细胞1h促进RGC-5的分化,10 mmol/L的L-谷氨酸钠干预18 h建立RGC-5损伤模型,70%红花注射液作为本次实验的干预浓度。（2）免疫荧光结果显示,RGC-5细胞可以表达鼠类视网膜神经节细胞中的特异性转录因子Pou结构域转录因子3A（POU domain transcription factor 3A,Brn3A）。（3）细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测结果显示:与A组相比,B组细胞存活率仅为68.35%;C组细胞存活率为77.51%,D组81.13%,E组为86.88%;与B组光密度（optical density,OD）值相比,C、D、E组的OD值均显着增高,差异均有统计学意义（P<0.01）。（4）流式细胞凋亡检测结果显示:各组RGC-5细胞凋亡率分别为:A 组 3.43%,B 组 25.75%,C 组 15.88%,D 组 14.21%,E 组 11.56%。与 B 组相比,C、D、E组的凋亡率显着降低,差异均有统计学意义（P<0.01）。（5）TNFR1/FADD/Caspase-8/Caspase-3凋亡信号通路相关蛋白表达水平:与B组比较,C、D、E组的TNFR1、FADD、Caspase-8、Caspase-3蛋白表达水平显着降低,差异均具有统计学意义（P<0.05）。在TNFR1、FADD、Caspase-8蛋白表达水平上,C组与D组间无显着统计学差异（P>0.05）,说明红花注射液与抑制剂Ac-DEVD-CHO 在调控 TNFR1、FADD、Caspase-8 蛋白上效力相当;在 Caspase-3蛋白表达水平上,C组与D组间有显着统计学差异（P<0.05）,说明在降低Caspase-3蛋白水平上,特异性Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO较红花注射液效果更显着。此外,E组在降低Caspase-8、Caspase-3蛋白水平上,较C组、D组更显着（P<0.05）,说明红花注射液联合抑制剂可以起到协同抑制细胞凋亡的作用。结论:（1）红花注射液能够有效抑制L-谷氨酸钠对RGC-5细胞的凋亡损伤,提高其存活率;（2）70%红花注射液能够发挥明显的抗凋亡作用,该作用可能通过抑制RGC-5细胞中TNFR1、FADD、Caspase 8、Caspase 3蛋白的表达水平,调控TNFR1信号通路实现的。
张伟[3]（2021）在《“三焦次第治疗”对脑缺血再灌注损伤大鼠模型血管神经单元的保护及机制研究》文中提出基于“三焦次第治疗”论治中风的理论探讨及临床运用从中医经典着作以及历代医家经典对中风的描述,主要阐述了中医对中风病名及病因病机的认识。基于“阳虚为本”论治中风病的“三焦次第治疗”的理论基础,立足于内阳外阴本体结构理论解读中风的病机,依据三焦次第进行治疗,并附临床医案一则。第二部分实验研究通过构建Sprague-Dawley（SD）大鼠脑缺血再灌注损伤模型,由此观察“三焦次第治疗”对大鼠一过性脑缺血再灌注损伤神经血管单元的保护作用,并通过探讨Wnt/β-catenin信号通路在“三焦次第治疗”对大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及机制研究,丰富脑缺血性损伤辨病和辨证相结合的论治新思路及新方法,并为该治法更好地应用于临床打下夯实的基础,同时为脑缺血性损伤的中医治疗和合理用药提供科学依据,研究从以下四个方面展开:实验一SD大鼠脑缺血再灌注损伤模型构建及分期目的:通过复制构建脑缺血再灌注损伤模型,观察评估模型的稳定性及脑缺血损伤急慢性期可能的分期节点。方法:30只SPF级雄性SD大鼠随机分为3组,分别为正常组（Normal）,假手术组（Sham）,脑缺血再灌注损伤组（I/R）。采用右侧大脑中动脉阻塞（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）法建立局灶性脑缺血再灌注损伤模型。脑缺血再灌注24h后进行2,3,5-triphenyltetrazolium chloride（TTC）染色,根据TTC染色计算脑梗死面积;实验各组脑缺血病理性损害变化通过再灌注24h及3d后hematoxylin-eosin（HE）染色进行评估;于不同时间点观察各组大鼠一般状况、体重、生存率及神经功能缺损评分变化。结果:与正常组及假手术组相比,脑缺血再灌注损伤组大鼠一般状况、体重、生存率、神经功能缺损评分、脑梗死面积及缺血性病理改变明显。与再灌注缺血24h相比,再灌注3d后,毛细血管增生明显。结论:采用Longa线栓法成功建立大鼠右侧大脑中动脉梗阻缺血再灌注损伤模型,并初步推测出大鼠脑缺血再灌注损伤的急性期时间节点可能为再灌注损伤后3d。实验二不同剂量阳化汤对急性期脑缺血再灌注损伤的保护作用目的:通过建立脑缺血再灌注损伤模型,探讨阳化汤对急性期脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:62只SPF级雄性SD大鼠随机分为5组,分别为假手术组（Sham）,脑缺血再灌注损伤组（I/R）,低剂量阳化汤组（L组）,中剂量阳化汤组（M组）,高剂量阳化汤组（H组）。采用右侧大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型。脑缺血2h再灌注3d后进行脑指数评估,TTC染色及HE染色,根据TTC染色计算脑梗死面积,于不同时间点观察各组大鼠的神经功能缺损评分的变化。结果:与脑缺血再灌注损伤组相比,中、高剂量阳化汤组干预可显着缩小急性脑缺血再灌注损伤导致的脑梗死面积及降低脑指数,明显减轻缺血性病理改变,显着改变模型动物神经功能缺损评分。结论:阳化汤对急性期脑缺血再灌注损伤有一定保护作用,高剂量（24g/kg/d）为治疗脑缺血再灌注损伤的最佳疗效剂量。实验三“三焦次第治疗”对急性期脑缺血再灌注损伤神经血管单元的保护作用及机制研究目的:本实验通过建立脑缺血再灌注损伤动物模型,探讨“三焦次第治疗”对大鼠急性期脑缺血再灌注损伤神经血管单元的保护作用,观察Wnt/β-catenin信号通路在大鼠急性期脑缺血再灌注损伤中的变化,并观察“三焦次第治疗”对Wnt/β-catenin信号通路的调节作用。方法:150只SPF级雄性SD大鼠随机分为6组,分别为假手术组（Sham）,脑缺血再灌注损伤组（I/R）,阳化汤治疗组（YHT）,扶阳方治疗组（FYF）,次第治疗组（CDZ）,阳性对照组（PCG）。采用右侧大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注损伤,脑缺血2h再灌注3d后进行TTC染色评价实验各组脑梗死面积。再灌注3d后TUNEL染色评估实验各组缺血皮层半暗带区细胞凋亡的情况;Nissl染色评估实验各组缺血皮层半暗带区的完整细胞数;透射电镜观察各组脑缺血皮层病灶区亚显微结构的变化;免疫组织化学染色IgG评估血脑屏障通透性改变。Western blot和qPCR检测各组急性脑缺血再灌注后MMP-3、MMP-9、BDNF、VEGF及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白和基因的表达。结果:与I/R组比较,“次第治疗”可显着缩小急性期脑缺血再灌注损伤模型大鼠的脑梗死面积,减少缺血半暗带区细胞凋亡,同时促进该区神经细胞的存活。透射电镜和免疫组化IgG结果显示“次第治疗”可在结构和功能上改善血脑屏障通透性。Western blot和qPCR结果显示“次第治疗”能显着下调MMP-3、MMP-9并上调VEGF、BDNF蛋白及基因的表达,同时可激活Wnt/β-catenin信号通路。结论:“次第治疗”对急性期脑缺血再灌注损伤模型的神经血管单元具有保护作用,该保护作用可能与下调MMP-3与MMP-9,上调VEGF与BDNF的表达,及Wnt/β-catenin通路的活化相关。实验四“三焦次第治疗”对恢复期脑缺血再灌注损伤神经血管单元的保护作用及机制研究目的:本实验通过建立脑缺血再灌注损伤动物模型,探讨“三焦次第治疗”对大鼠恢复期脑缺血再灌注损伤神经血管单元的保护作用,观察Wnt/β-catenin信号通路在大鼠恢复期脑缺血再灌注损伤中的变化,并观察“三焦次第治疗”对Wnt/β-catenin信号通路的调节作用。方法:150只SPF级雄性SD大鼠随机分为6组,分别为假手术组（Sham）,脑缺血再灌注损伤组（I/R）,阳化汤治疗组（YHT）,扶阳方治疗组（FYF）,次第治疗组（CDZ）,阳性对照组（PCG）。采用右侧大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注损伤,脑缺血2h再灌注7d后进行TTC染色评价实验各组脑梗死面积。再灌注7d后TUNEL染色评估实验各组缺血皮层半暗带区细胞凋亡情况;Nissl染色评估实验各组缺血皮层半暗带区的完整细胞数;透射电镜观察各组脑缺血皮层病灶区亚显微结构的变化;免疫组织化学染色IgG评估血脑屏障通透性改变。Western blot和qPCR检测各组恢复期脑缺血再灌注后MMP-3、MMP-9、BDNF、VEGF及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白和基因的表达。结果:与I/R组比较,“次第治疗”能显着缩小恢复性期脑缺血再灌注损伤模型大鼠的脑梗死面积,减少缺血半暗带区细胞凋亡,同时促进该区神经细胞的存活。透射电镜和免疫组化IgG结果显示“次第治疗”可在结构和功能上改善血脑屏障通透性。Western blot和qPCR结果显示“次第治疗”显着下调MMP-3、MMP-9,并上调VEGF、BDNF蛋白及基因的表达,同时可激活Wnt/β-catenin信号通路。结论:“次第治疗”对恢复期脑缺血再灌注损伤模型的神经血管单元具有保护作用,该保护作用可能与下调MMP-3与MMP-9,上调VEGF与BDNF的表达,及Wnt/β-catenin通路的活化相关。
欧阳波[4]（2021）在《冰片配伍黄芪甲苷和三七总皂苷对脑缺血/再灌注损伤后神经血管单元保护作用的研究》文中认为目的:研究冰片配伍黄芪甲苷（Astragaloside Ⅳ,AST Ⅳ）和三七总皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）对大鼠脑缺血/再灌注损伤（Cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI）后脑组织损伤、神经血管单元主要组分（神经元、星形胶质细胞和微血管）的结构、主要组分特异蛋白--胶质纤维酸性蛋白（Glialfibrillary acidic protein,GFAP）、神经元特异性核蛋白（Neuron specific nuclear,Neu N）、层黏连蛋白（Laminin,LN）、内皮屏障抗原蛋白（Endothelial barrier antigen,EBA）及相关功能蛋白--αII-血影蛋白（αII-Spectrin,αII-SP）、水通道蛋白4（Aquaporin 4,AQP-4）、基质金属蛋白酶9（Matrix metalloproteinase-9,MMP-9）、血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响,探讨其通过Notch信号通路对神经血管单元的保护机制。方法:成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为假手术组（Sham Operation Group,SOG）、模型组（Model Group,MG）、冰片组（Borneol Group,BG）、AST Ⅳ组（AST Ⅳ Group,AG）、PNS组（PNS Group,PG）、AST Ⅳ+PNS组（AST Ⅳ+PNS Group,APG）、冰片+AST Ⅳ+PNS低剂量组（Borneol+AST Ⅳ+PNS Low-dose Group,LDG）、冰片+AST Ⅳ+PNS高剂量组（Borneol+AST Ⅳ+PNS High-dose Group,HDG）、依达拉奉组（Edaravone Group,EG）。EG腹腔注射给药,其他组灌胃给药,2次/d。采用线栓法阻断右侧大脑中动脉（Middle cerebral artery,MCA）,建立大鼠CIRI模型。缺血2h,再灌注后22h,行神经功能缺损评分,TTC染色测定脑梗死体积,HE染色观察大脑缺血皮质区病理形态;免疫组化法检测大脑缺血皮质区GFAP、Neu N、LN、EBA的表达;免疫荧光三标法检测大脑缺血皮质区GFAP、神经丝蛋白200（neurofilament-200,NF-200）、LN的蛋白表达;Westrn blot检测大脑缺血皮质区αII SP、AQP-4、MMP-9、VEGF、Notch1、Notch胞内域（Intracellular domain of Notch,NICD）、Hes1、Delta-like ligand 4（DLL4）蛋白的表达。结果:缺血2h,再灌注22h后,MG出现神经功能缺损、右侧局灶性脑梗死、神经细胞损伤。各药物组神经功能缺损评分、脑梗死体积和神经细胞损伤率显着降低（P<0.05、0.01）,且冰片+AST Ⅳ+PNS的效应强于各药物单用及AST Ⅳ+PNS（P<0.05、0.01）。缺血2h,再灌注22h后,免疫组化结果显示,MG的Neu N、LN、EBA阳性细胞显着减少（P<0.01）,GFAP阳性细胞显着增加（P<0.01）;冰片、PNS、AST Ⅳ、AST Ⅳ+PNS与冰片+AST Ⅳ+PNS能显着增强Neu N、LN、EBA蛋白表达（P<0.05、0.01）,显着降低GFAP蛋白表达（P<0.05、0.01）,且冰片+AST Ⅳ+PNS的作用强于各药物单用及AST Ⅳ+PNS（P<0.05、0.01）。免疫荧光三标结果显示,MG的NF-200、LN阳性细胞显着减少（P<0.01）,GFAP阳性细胞显着增加（P<0.01）;冰片、AST Ⅳ、PNS、AST Ⅳ+PNS与冰片+AST Ⅳ+PNS能显着降低GFAP蛋白表达（P<0.05、0.01）,且冰片+AST Ⅳ+PNS的作用强于各药物单用及AST Ⅳ+PNS（P<0.05、0.01）。冰片、AST Ⅳ+PNS与冰片+AST Ⅳ+PNS能显着增强LN蛋白表达（P<0.05、0.01）,且冰片+AST Ⅳ+PNS的作用强于各药物单用及AST Ⅳ+PNS（P<0.05、0.01）。冰片+AST Ⅳ+PNS能显着增强NF-200蛋白表达（P<0.01）,且冰片+AST Ⅳ+PNS的作用强于AST Ⅳ+PNS（P<0.05）。Westrn blot结果显示,MG大鼠缺血皮质区AQP-4、MMP-9蛋白表达显着增加（P<0.05）,αII SP蛋白表达水平显着降低（P<0.05）,而VEGF、NICD、Notch1、Hes1、DLL4蛋白表达无显着变化（P>0.05）,冰片+AST Ⅳ+PNS能显着上调αII SP、VEGF、NICD、Notch1、Hes1、DLL4蛋白的表达（P<0.01）,且冰片+AST Ⅳ+PNS的效应强于各药物单用及AST Ⅳ+PNS（P<0.05、0.01）。冰片+AST Ⅳ+PNS能显着下调AQP-4、MMP-9蛋白的表达（P<0.01）,且冰片+AST Ⅳ+PNS的效应强于各药物单用及AST Ⅳ+PNS（P<0.05、0.01）。结论:1.冰片配伍AST Ⅳ和PNS对大鼠CIRI后具有脑保护作用,能改善神经功能缺损、降低神经细胞损伤率、减少脑梗死体积,且冰片+AST Ⅳ+PNS的作用强于各药物单用及AST Ⅳ+PNS。2.冰片配伍AST Ⅳ和PNS对大鼠CIRI后神经血管单元具有保护作用,可减轻神经元和微血管基底膜损伤、抑制星形胶质细胞过度活化、减轻脑水肿,且冰片+AST Ⅳ+PNS的作用强于各药物单用及AST Ⅳ+PNS。维持神经血管单元结构完整性,且冰片+AST Ⅳ+PNS的作用强于AST Ⅳ+PNS。3.冰片配伍AST Ⅳ和PNS对大鼠CIRI后的脑保护作用机制可能与激活Notch信号通路,上调NICD、Notch1、Hes1、VEGF、DLL4表达,从而发挥对缺血脑组织的保护作用有关。
杜欣[5]（2021）在《牛黄及其有效成分对神经血管单元的保护作用研究》文中进行了进一步梳理目的:观察牛黄及其有效成分对体外脑神经血管单元的保护作用,阐明牛黄及其有效成分治疗缺血性中风的内在生物学机制。方法:1.体外脑神经血管单元模型的建立以及缺氧/复氧模型的建立（1）利用体外原代细胞培养技术,提取大脑皮质神经元、星形胶质细胞和微血管内皮细胞,进行细胞鉴定;（2）利用transwell板将三种细胞共培养,构建体外脑神经血管单元的模型,利用TEER值,判定模型是否成功;（3）采用缺氧1h,复氧24h,构建OGD/R模型,利用TEER值、荧光素钠渗透系数判定模型是否成功。2.牛黄及其有效成分对三种细胞的毒性利用不同浓度的牛黄（Bezoar）、牛磺酸（Taurine）、牛黄熊去氧胆酸（TUDCA）和熊去氧胆酸（UDCA）,作用于神经元、星形胶质细胞和内皮细胞,分别干预24h和48 h,利用CCK8检测细胞活力,检测每种不同浓度的药物对细胞的毒性。3.牛黄及其有效成分对脑神经血管单元的保护作用（1）通过OGD/R模型,检测牛黄、牛磺酸、TUDCA和UDCA的不同剂量对细胞的作用,利用CCK8法检测细胞活力,确定每种药物的最佳剂量;（2）利用药物的最佳剂量进行干预,通过检测血脑屏障的通透性:TEER值、荧光素钠渗透系数和γ-GT;炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β;氧化应激指标SOD、NO、MDA以及神经元凋亡率。（3）牛黄对脑神经血管单元的保护机制研究加入抑制剂LY294002,检测牛黄对细胞的干预是通过PI3K/AKT通路实现的;检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3,金属蛋白酶MMP2、MMP9,紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-5 以及 HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT、p-AKT。4.不同配伍组分对脑神经血管单元的保护作用（1）利用OGD/R模型,筛选牛磺酸+牛磺熊去氧胆酸（T+T）,牛磺酸+熊去氧胆酸（T+U）的最佳剂量;（2）利用药物的最佳剂量进行干预,通过检测血脑屏障的通透性:TEER值、荧光素钠渗透系数和γ-GT;炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β;氧化应激指标SOD、NO、MDA以及神经元凋亡率。5.配伍组分牛磺酸和熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制利用T+U的最佳剂量,进行OGD/R的造模,检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3,金属蛋白酶 MMP2、MMP9,紧密连接蛋白 ZO-1、Occludin、Claudin-5 以及 NF-κBp65,p-P65,IKBα,p-IKBα 蛋白表达。6.配伍组分牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制利用T+T的最佳剂量,进行OGD/R的造模,检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3,金属蛋白酶MMP2、MMP9,紧密连接蛋白 ZO-1、Occludin、Claudin-5,CA43、AQP4以及 P38MAPK,P-P38MAPK。结果1.获得了纯度较高的神经元、星形胶质细胞和内皮细胞（1）神经元培养7d后成熟,经MAP2免疫荧光鉴定,纯度大于95%;（2）星形胶质细胞培养7d后成熟,经GFAP免疫荧光鉴定,纯度大于95%;（3）内皮细胞培养7d后成熟,经Ⅷ因子免疫荧光鉴定,纯度大于95%。2.利用transwell,建立了脑神经血管单元的模型（1）该模型的电阻值在3-5天趋于平稳;（2）三细胞共培养,三种细胞的状态和单细胞相比,更佳。3.成功复制OGD/R模型利用缺氧1h,复氧24h,能够成功复制OGD/R模型,和正常组相比,模型组电阻值降低,荧光素钠渗透系数升高,能够进行下一步的实验研究。4.筛选药物毒性利用不用浓度的牛黄、牛磺酸、牛磺熊去氧胆酸和熊去氧胆酸分别干预24h和48h,筛选药物的毒性。5.筛选药物的保护剂量利用无毒性的各种药物浓度,通过OGD/R造模方法,检测细胞活力,筛选出保护作用的最佳剂量。6.牛黄及其有效成分对体外脑神经血管单元的保护作用（1）牛黄及其有效成分降低LDH,升高γ-GT,提高TEER值和降低荧光素钠渗透系数;（2）牛黄及其有效成分减少炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1 β的水平;（3）牛黄及其有效成分降低NO、MDA的水平,升高SOD的水平;（3）牛黄及其有效成分抑制神经元的凋亡;（4）牛黄降低MMP2、MMP9的蛋白表达;（5）牛黄能升高紧密连接蛋白的表达,提高ZO-1、Occludin、Claudin-5的蛋白表达;（6）牛黄通过HIF-α/VEGF,PI3K/AKT通路,发挥保护NVU的作用,牛黄降低HIF-1α、VEGF的蛋白表达水平,升高PI3K、AKT的蛋白表达水平。7.不同配伍组分对脑神经血管单元的保护作用（1）筛选了配伍组分的最佳剂量,T+T的最佳剂量1mM Taurine和1μM TUDCA,T+U的最佳剂量1mM Taurine和1μM UDCA;（2）T+T、T+U有效保护血脑屏障,降低TEER值,降低荧光素钠渗透系数,升高γ-GT;（3）T+T、T+U有效减轻细胞损伤,降低LDH的水平;（4）T+T、T+U有效减轻炎症反正,降低TNF-α、IL-6、IL-1β的值;（5）T+T、T+U有效抑制氧化反应,降低NO、MDA的水平,升高SOD的活力;（6）T+T、T+U抑制神经元的凋亡率。8.配伍组分牛磺酸和熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制（1）T+U抑制神经元的凋亡率;（2）T+U 提高 ZO-1、Occludin、Claudin-5 的蛋白表达;（3）T+U降低MMP2、MMP9的蛋白表达;（4）T+U降低Bax、Caspase-3蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达;（5）T+U降低MyD88、P-P65、P-IKB α的蛋白表达,通过MyD88/NF-κB信号通路发挥脑保护作用。9.配伍组分牛磺酸和牛黄熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制（1）T+T抑制神经元的凋亡率;（2）T+T 提高 ZO-1、Occludin、Claudin-5 的蛋白表达;（3）T+T降低MMP2、MMP9的蛋白表达;（4）T+T降低Bax、Caspase-3蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达;（5）T+U降低AQP4、P38MAPK,升高CX43的蛋白表达。结论（1）牛黄、牛磺酸、TUDCA和UDCA能够减轻炎症反应,降低氧化应激的水平,抑制神经元的凋亡发挥神经保护的作用;（2）牛黄通过HIF-1α/VEGF和PI3K/AKT通路发挥脑保护作用;（3）牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸,牛磺酸和熊去氧胆酸配伍,发挥协同作用,比单独使用牛磺酸药效更好;（4）牛磺酸和熊去氧胆酸1000:1的配伍能够抑制炎症反应,降低氧化应激的水平,保护血脑屏障,抑制神经元的凋亡,能够抑制通路MyD88/NF-κB通路发挥脑保护作用（5）牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸1000:1的配伍能够抑制炎症反应,降低氧化应激,保护血脑屏障,能够抑制P38MAPK通路,发挥脑保护作用;
侯慧敏[6]（2021）在《中风膏预适应对脑缺血再灌注损伤后CD34、VEGF、MMP-9的影响研究》文中进行了进一步梳理目的:基于中医治未病理论,观察研究中风膏预适应对脑缺血再灌注损伤后血管的保护作用及作用机制,为中医药治疗脑血管病提供新的思路和方法。方法:SPF级雄性SD大鼠64只,体重280±20g。随机分为假手术组（S）、脑缺血再灌注模型组（I/R）、脑缺血预适应模型组3天（BDP 3d）、5天（BDP 5d）、7天（BD P 7d）,中风膏预适应模型组3天（ZFG+I/R 3d）、5天（ZFG+I/R 5d）、7天（ZFG+I/R 7d）,每组各8只。S组仅暴露CCA、ECA及ICA,但不阻断MCA,灌服生理盐水;I/R组参照Longa等改进的大脑中动脉二次线栓法制备缺血再灌注损伤模型;BDP组制备脑缺血预适应模型;ZFG+I/R组予中风膏悬浊液预先灌胃,再建立缺血再灌注损伤模型。观察在麻醉清醒前后实验大鼠的一般情况、精神状况及神经功能缺损评分;将各组大鼠进行脑组织常规HE染色观察;采用免疫组化法检测组织中CD34蛋白表达;E LISA法进行脑组织血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白含量测定;RT-PCR技术检测缺血脑组织内VEGF、MMP-9基因表达情况。结果:（1）通过观察脑缺血大鼠的精神、饮食及体重等情况,说明中风膏能够促进脑缺血大鼠一般情况的恢复;（2）中风膏预适应与脑缺血预适应对脑缺血后大鼠神经功能缺损评分均降低,对神经功能缺损症状有改善作用,中风膏预适应的保护作用更显着。（3）通过免疫组化法检测实验大鼠脑组织切片发现脑缺血区CD34蛋白表达增加,说明中风膏对缺血区脑组织具有血管重塑作用;（4）通过ELISA法检测出缺血区脑组织VEGF的蛋白含量增高、MMP-9的蛋白含量降低,RT-PCR技术检测出缺血脑组织内VEGF基因表达增加、MMP-9基因表达减少,说明中风膏具有诱导缺血区脑组织血管再生的作用。结论:中风膏预适应能够诱导脑组织产生缺血耐受机制,而这种机制对脑组织具有延迟保护效应,能够减轻缺血再灌注造成的损伤;而这种保护效应可能是通过增加了缺血损伤区域CD34蛋白的表达,增加了VEGF的含量及基因表达、降低了MMP-9的含量及基因表达而实现的。
康晓文[7]（2021）在《“醒脑开窍”针法对脑缺血损伤血脑屏障通透性的调控作用及对ICAM-1、MMPs-9表达的影响》文中研究表明目的:观察“醒脑开窍”针法对脑缺血损伤后血脑屏障通透性的调控作用,并探讨其作用机制,为“醒脑开窍”针法治疗脑血管病提供理论依据。方法:SPF级雄性SD大鼠88只,按体重随机分为空白组（N=8）,假手术组（N=8）,模型组（N=24）,中风膏组（N=24）,针刺+中风膏组（N=24）,除空白组和假手术组外,其它3组每组组内再进一步分为4h,3d和15d三个亚组,每个亚组8只。空白组不予处理,假手术组予以生理盐水灌胃,2次/日,中风膏组予以中风膏混悬液灌胃,2次/日,针刺+中风膏组在中风膏灌胃的基础上予以“醒脑开窍”针法,1次/日。干预后通过Zea-longa评分方法检测各组实验大鼠的神经功能缺损评分;采用伊文斯蓝测定法评价各组实验大鼠的血脑屏障通透性;用实时定量聚合酶链反应检测缺血脑组织ICAM-1、MMPs-9的基因相对表达。结果:1.大鼠神经功能缺损评分缺血再灌注4h:与空白组和假手术组比较,模型组、中风膏组和针刺+中风膏组神经功能缺损评分均上升（P<0.05）;缺血再灌注3d:与模型组相比,中风膏组神经功能缺损评分几乎无变化,针刺+中风膏组神经功能缺损评分降低（P>0.05）;缺血再灌注15d:与模型组相比,中风膏组和针刺+中风膏组神经功能缺损评分均降低（P<0.05）。其中,针刺+中风膏组比中风膏组下降更显着（P>0.05）。与4 h、3d相比:针刺+中风膏组15d神经功能缺损评分显着降低（P<0.05）。2.大鼠EB含量测定缺血再灌注4h:与空白组和假手术组比较,模型组、中风膏组和针刺+中风膏组EB含量均上升（P<0.05）;缺血再灌注3d:与模型组相比,中风膏组、针刺+中风膏组的EB含量均降低（P<0.05）,中风膏组与针刺+中风膏组相比较,差异无统计学意义（P>0.05）;缺血再灌注15d:与模型组相比,中风膏组、针刺+中风膏组EB含量均降低（P<0.05）。其中,针刺+中风膏组的EB含量高于中风膏组（P<0.05）。与4h相比:针刺+中风膏组3d时EB含量增高,15d时EB含量降低。3.大鼠脑组织ICAM-1mRNA的含量测定缺血再灌注4h:与空白组和假手术组比较,模型组、中风膏组和针刺+中风膏组的ICAM-1mRNA含量均上升（P<0.05）;缺血再灌注3d:与模型组相比,中风膏组、针刺+中风膏组的ICAM-1mRNA含量均降低（P>0.05）,中风膏组与针刺+中风膏组相比较无统计学差异（P>0.05）;缺血再灌注15d:与模型组相比,中风膏组和针刺+中风膏组ICAM-1mRNA含量均降低（P<0.05）。其中,针刺+中风膏组比中风膏组ICAM-1mRNA含量下降更显着（P<0.05）。针刺+中风膏组ICAM-1mRNA含量在4h、3d、15d各个时相依次降低。4.大鼠脑组织MMPs-9含量检测缺血再灌注4h:与空白组和假手术组比较,模型组、中风膏组和针刺+中风膏组MMPs-9含量均上升（P<0.05）;缺血再灌注3d:与模型组相比,中风膏组、针刺+中风膏组MMPs-9含量均下降（P<0.05）,中风膏组与针刺+中风膏组比较差异无统计学差异（P>0.05）;缺血再灌注15d:与模型组相比,中风膏组和针刺+中风膏组MMPs-9含量均降低（P<0.05）。其中,针刺+中风膏组比中风膏组下降更显着（P<0.05）。与4h相比:针刺+中风膏组3d时MMPs-9含量增高,15d时MMPs-9含量降低。结论:1.“醒脑开窍”针法对脑缺血损伤血脑屏障通透性具有双向调控作用。在脑缺血再灌注3d时“醒脑开窍”针法可以降低血脑屏障的通透性,在15d时“醒脑开窍”针法可以增加血脑屏障的通透性。2.此种双向调控作用可能是通过针刺调节缺血再灌注大鼠脑组织中ICAM-1含量和MMPs-9含量来实现的。
康蕾[8]（2020）在《基于GEO数据库筛选脑梗死大鼠血清生物标志物及活血荣络方干预作用研究》文中研究指明目的:本实验从生物信息学角度分析,基于GEO数据库筛选脑梗死大鼠血清生物标志物,并通过动物实验探讨活血荣络方对MCAO再灌注损伤大鼠血清BDNF、b FGF的影响。方法:第一部分,基于GEO数据库筛选脑梗死大鼠血清生物标志物:（1）利用GEO数据库下载GSE119121大鼠血液芯片,采用R语言分析得到差异基因。（2）利用String功能蛋白关联数据库,进行脑梗死差异基因蛋白共表达网络（PPI）构建及聚焦,利用Degree、Closeness、Betweenness算法拓扑分析。（3）利用Web Gestalt、DAVID数据库,进行脑梗死差异基因的GO功能富集和KEGG通路富集。第二部分,探讨活血荣络方对MCAO再灌注损伤大鼠血清BDNF、b FGF的影响:将120只SD雄性大鼠随机分成4组:假手术组（sham组,n=30）、模型组（MCAO组,n=30）、活血荣络方组（MCAO+活血荣络方组,n=30）、丁苯酞组（MCAO+丁苯酞组,n=30）,每组分为3d、7d、14d三个亚组,每个亚组10只大鼠。制备MCAO再灌注损伤模型,术后进行神经功能缺损评分筛选。麻醉清醒后6小时首次灌胃（1m L/100g）。再灌注后3d、7d、14d,进行神经功能缺损评分;再灌注后7d,HE染色观察脑组织病理改变;再灌注后3d、7d、14d,ELISA试剂盒检测血清b FGF、BDNF的表达。结果:第一部分,基于GEO数据库筛选脑梗死大鼠血清生物标志物:（1）检索GEO数据库GSE119121大鼠血液芯片,利用R语言筛选出271个差异基因,其中102个基因表达下调,169个基因表达上调（包括BDNF、b FGF）。（2）利用String数据库及Cytoscape软件进行差异基因蛋白PPI构建及聚焦,进行Degree、Betweenness、Closeness算法拓扑分析。（3）利用Web Gestalt数据库对271个差异基因进行GO功能富集分析;利用DAVID数据库对271个差异基因进行KEGG信号通路富集分析,发现主要富集在造血细胞谱系、细胞因子与细胞因子受体的相互作用、原发性免疫缺陷、MAPK信号通路等。第二部分,探讨活血荣络方对MCAO再灌注损伤大鼠血清BDNF、b FGF的影响:（1）神经功能缺损评分结果:假手术组无神经功能缺损;与模型组相比,活血荣络方组和丁苯酞组再灌注后3d、7d、14d的神经功能缺损评分显着降低（P<0.01）。（2）HE染色结果:光镜下可见（×400）,假手术组:大鼠缺血侧大脑皮层神经细胞形态正常,排列整齐致密,细胞呈圆形或椭圆形,未见明显肿胀;模型组:大鼠缺血侧大脑皮层神经细胞大量变性坏死、萎缩,细胞排列紊乱,细胞空泡化明显,细胞核与细胞质界限不清晰,胞核破碎或消失;与模型组相比,活血荣络方组及丁苯酞组均可不同程度的改善缺血侧大脑皮层神经元形态,神经细胞可见少许空泡样改变,排列尚整齐,周围间质损伤较轻。（3）血清BDNF、b FGF表达结果:与假手术组相比,模型组、活血荣络方组及丁苯酞组再灌注后3d、7d、14d,血清BDNF、b FGF含量显着增加（P<0.01）;与模型组相比,活血荣络方组及丁苯酞组再灌注后3d、7d、14d,血清BDNF、b FGF含量显着降低（P<0.01）。结论:第一部分,利用生物信息学分析GEO数据库原始基因芯片数据,能有效筛选脑梗死大鼠血清生物标志物,揭示了脑梗死的可能发病机制,提示与多靶点、多信号通路相关,为今后临床研究提供了新思路。第二部分,动物实验研究发现,BDNF、b FGF在MCAO再灌注损伤大鼠血清中表达上调,与利用生物信息学分析得到的数据结果相符;活血荣络方能促进脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能恢复,减轻脑组织病理损害,下调血清BDNF、b FGF的表达,推测其作用机制可能与促BBB的修复有关。
姚德祎[9]（2020）在《中风醒脑液防治急性脑缺血-再灌注损伤作用及其机制的研究》文中研究说明研究目的:本研究旨在验证中风醒脑液（ZFXNL）对急性脑缺血-再灌注损伤的防治作用,并筛选出ZFXNL的最佳治疗剂量;进一步探究在急性脑缺血-再灌注过程中ZFXNL对BBB的保护作用及相关机制。为拓展ZFXNL的临床使用范围提供理论依据。研究方法:将114只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为6个组:假手术组、模型组（MCAO-R）、ZFXNL高剂量组（26.46g/Kg/d）、ZFXNL中剂量组（13.23/Kg/d）、ZFXNL低剂量组（6.615/Kg/d）、依达拉奉组（4mg/Kg/d）,其中假手术组14只,其余各组每组20只。造模前6天,ZFXNL组灌胃ZFXNL,每天一次,持续7天,最后一次灌胃在造模前2h。（1）采用线栓法制备右侧大脑中动脉阻塞（MCAO）模型,阻塞1.5h后拔出线栓,形成右侧大脑中动脉缺血-再灌注（MCAO-R）模型,再灌注48h后取材并记录下各组大鼠造模前及取材前体重减轻的百分比,采用longa五分法、本位反射试验、前肢放置试验、提尾试验综合评价大鼠的神经功能。（2）在取材前对大鼠进行心脏灌流,采用苏木精-伊红染色法对脑组织进行染色,利用图形分析软件计算梗死灶面积占比和患侧脑半球肿胀百分比;在光镜下观察缺血半暗带区的病理改变。（3）通过检测脑组织伊文思蓝的漏出量评价血脑屏障的通透性;利用透射电镜观察缺血半暗带区BBB的结构的完整程度;从而评价ZFXNL对BBB的保护作用。（4）采用免疫组化法联合积分光密度法检测紧密连接蛋白Claudin-5、Occludin和基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9在缺血半暗带区的表达位置和表达量,进而明确ZFXNL在脑I/R过程中保护BBB的机制。实验结果:与模型组相较:（1）ZFXNL高、中剂量组能显着改善MCAO-R大鼠神经功能、缩小脑梗死灶面积、抑制患侧脑半球肿胀、改善缺血半暗带区的病理改变体现其对CI-RI的防治作用（P<0.05）。（2）高、中剂量的ZFXNL能显着减少伊文思蓝的漏出量（P<0.05）、保护血脑屏障中TJ的完整性起到保护血脑屏障的作用。（3）高、中剂量的ZFXNL能明显上调缺血半暗带区血管内皮细胞上Claudin-5、Occludin的表达量（P<0.05）;同时抑制神经元、神经胶质细胞中MMP-2、MMP-9的表达量（P<0.05）。（4）ZFXNL高剂量组出现严重腹泻,体重减轻明显（P<0.05）;ZFXNL高、中剂量组治疗效果和依达拉奉相当（P>0.05）。结论:（1）ZFXNL能够有效防治CI-RI,起到保护缺血半暗带区神经元,改善神经功能,缩小梗死灶面积,抑制脑半球肿胀的作用。（2）ZFXNL能有效保护BBB结构的完整性,维持BBB功能的稳定,进而在结构和功能两个方面起到保护BBB的作用。（3）ZFXNL通过上调缺血半暗带区血管内皮细胞上Claudin-5、Occludin的表达量,抑制神经元、神经胶质细胞中MMP-2、MMP-9的表达量起到保护BBB的作用机制。（4）中剂量（13.23/Kg/d）是ZFXNL保护BBB防治CI-RI的最佳治疗剂量。
张新昌[10]（2020）在《针刺调控ERK1/2信号通路延长脑梗死溶栓时间窗的实验研究》文中研究说明目的:目前脑梗死最有效治疗方法是超早期溶栓,但须在4.5h时间窗内实施,否则极易破坏血脑屏障（BBB）而出现脑水肿及颅内溶栓出血性转化等并发症,导致死亡率增高,如能探寻到延长时间窗的方法,将会为患者赢得更多救治机会。针刺治疗脑梗死的疗效公认,然而早期针刺能否提高溶栓安全性,进而延长脑梗死溶栓时间窗,目前尚不明确。因此,本研究首先明确针刺延长脑梗死溶栓时间窗的效应,其次从细胞与分子水平探讨针刺提高脑梗死溶栓安全性、延长溶栓时间窗的作用机制。方法:本研究采用“醒脑开窍”针刺法,以改良的自体血栓栓塞性脑缺血模型为研究对象,rtPA为静脉溶栓手段。实验一:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、4.5h溶栓组、6h溶栓组、9h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组、针刺+6h溶栓组、针刺+9h溶栓组。观察针刺干预对各组大鼠梗死体积、神经行为学评分、BBB通透性、颅内溶栓出血性转化及脑水肿的影响,以明确针刺延长脑梗死溶栓时间窗的效应。实验二:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、6h溶栓组、针刺+6h溶栓组。采用Western blot、免疫荧光（IF）检测ERK1/2信号通路指标（MEK1/2、ERK1/2）、跨膜蛋白（Claudin5）、胞浆黏附蛋白（ZO-1）、细胞骨架蛋白（MAP-2）以及MMP9的蛋白表达;采用 Real time-PCR、Western blot 检测 NF-κB p65 的 mRNA 及蛋白表达;使用透射电镜观察各组BBB超微结构的变化;采用ELISA法检测缺血脑组织中炎症因子（TNF-α、IL-1β）的含量。实验三:将SD大鼠随机分为假手术组、6h溶栓组、6h溶栓组+ERK1/2信号通路抑制剂（U0126）组。采用Western blot检测ERK1/2、MMP9、NF-κB p65的蛋白表达变化。通过实验二、三,明确针刺调控ERK1/2信号通路延长脑梗死溶栓时间窗的作用机制。结果:1、各组大鼠神经行为学评分的比较治疗后24h评分,与模型组相比,4.5h溶栓组神经行为学评分降低,差异有统计学意义（P<0.01）。时间窗外溶栓组（6h溶栓组、9h溶栓组）与模型组相比,神经行为学评分差异无统计学意义（P>0.05）。与模型组、6h溶栓组相比,针刺+6h溶栓组神经行为学评分均降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。表明针刺可改善时间窗外溶栓大鼠的神经行为学评分。2、各组大鼠脑梗死体积的比较与模型组相比,4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组、针刺+6h溶栓组脑梗死体积显着减小（P<0.01）;6h溶栓组、9h溶栓组、针刺+9h溶栓组比模型组脑梗死体积显着增大（P<0.01,P<0.05）;针刺+6h溶栓组与6h溶栓组比,梗死体积显着减小（P<0.01）。表明针刺可减小时间窗外溶栓大鼠的脑梗死体积。3、各组大鼠脑出血性转化的比较与模型组相比较,6h溶栓组、9h溶栓组、针刺+9h溶栓组血红蛋白含量均显着升高（P<0.01）,说明超时间窗外溶栓会显着增加出血性转化风险。针刺+6h溶栓与6h溶栓比,血红蛋白含量降低（P<0.05）。表明针刺可降低时间窗外单纯溶栓大鼠的脑出血性转化。4、各组大鼠BBB通透性的比较与模型组相比,时间窗内4.5h溶栓组Evans blue（EB）含量降低;时间窗外6h、9h溶栓组EB含量增加,其差异均具有统计学意义（P<0.01）。与模型组相比,针刺+4.5h溶栓组、针刺+6h溶栓组EB含量降低;针刺+9h溶栓组EB含量增加,其差异均具有统计学意义（P<0.01）。针刺+6h溶栓与6h溶栓比,EB含量降低（P<0.05）。表明针刺可降低时间窗外单纯溶栓大鼠的BBB通透性。5、各组大鼠脑含水量的比较与模型组相比,4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组、针刺+6h溶栓组脑含水量均显着降低（P<0.01）;时间窗外6h溶栓组、9h溶栓组脑含水量显着增加（P<0.01）。针刺+6h溶栓组与6h溶栓组比,脑含水量显着降低（P<0.01）。表明针刺可降低时间窗外溶栓大鼠的脑含水量。6、各组大鼠BBB超微结构的改变透射电镜显示:模型组BBB超微结构内皮细胞及基底膜明显肿胀变形且不规则,内皮细胞层间连接疏松,紧密连接遭到破坏。6h溶栓组BBB脑微血管内皮细胞及基底膜肿胀变形进一步加重,大量空泡及胞饮小泡形成,紧密连接断裂,BBB超微结构严重破坏。针刺+6h溶栓组BBB超微结构破坏减轻,其内皮细胞及基底膜肿胀减轻,形态有规则基本连续完整,紧密连接破坏明显减轻,表明针刺可改善脑梗死溶栓大鼠BBB超微结构的破坏。7、针刺对脑梗死溶栓大鼠ERK1/2信号通路的作用WB、IF结果显示:模型组与假手术比,p-MEK1/2/t-MEK1/2、p-ERK1/2/t-ERK1/2均显着增加（P<0.01）;针刺+6h溶栓组分别与6h溶栓组、模型组相比,p-MEK1/2/t-MEK1/2、p-ERK1/2/t-ERK1/2均显着降低（P<0.0 1）。表明针刺可抑制时间窗外溶栓大鼠E Rκ1/2信号通路的激活。8、各组大鼠MMP9的表达比较WB、IF结果显示:与假手术相比,模型组MMP9表达增加（P<0.01）;6h溶栓组与模型组比,MMP9进一步增加（P<0.05）;针刺+6h溶栓组分别与模型组、6h溶栓组相比,MMP9表达显着降低（P<0.01）。提示针刺可下调时间窗外溶栓大鼠MMP9的蛋白表达。9、各组大鼠ZO-1、Claudin5、MAP-2的表达比较WB、IF结果显示:与假手术相比,模型组ZO-1、Claudin5、MAP-2蛋白表达均降低,差异具有统计学意义（P<0.01）;6h溶栓组与模型组比,ZO-1、Claudin5、MAP-2的表达进一步降低（P<0.05）;针刺+6h溶栓组分别与模型组、6h溶栓组相比,ZO-1、Claudin5、MAP-2蛋白表达增加,差异具有统计学意义（P<0.05;P<0.01）。提示针刺可上调时间窗外溶栓大鼠ZO-1、Claudin5、MAP-2 的蛋白表达。10、各组大鼠NF-κB p65的表达比较WB、RT-PCR结果显示:与假手术相比,模型组NF-κB p65mRNA和蛋白表达水平显着升高（P<0.01）;6h溶栓组与模型组比,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平进一步升高（P<0.01）;针刺+6h溶栓组分别与模型组、6h溶栓组相比,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平均显着降低（P<0.01）。表明针刺可下调时间窗外溶栓大鼠NF-κB p65的mRNA和蛋白表达水平。11、各组大鼠TNF-α和IL-1β的含量比较ELISA结果显示:与假手术相比,模型组大鼠脑组织TNF-α、IL-1 β含量显着升高（P<0.01）;6h溶栓组与模型组比,TNF-α、IL-1β含量进一步升高（P<0.01）;针刺+6h溶栓组分别与模型组、6h溶栓组相比,TNF-α、IL-1 β含量显着降低（P<0.01）。表明针刺可降低时间窗外溶栓大鼠脑组织炎症因子TNF-α和IL-1 β的含量。12、ERK1/2信号通路对MMP9、NF-κB p65表达的影响WB结果显示:与假手术相比,6h溶栓组p-ERK1/2、MMP9、p-NF-κB p65表达均显着增加,差异具有统计学意义（P<0.01）;与6h溶栓组比,6h溶栓+U0126组大鼠p-ERK1/2、MMP9、p-NF-κB p65表达均显着降低（P<0.01）。表明ERK1/2信号通路位于MMP9、NF-κB p65的上游,能够调控其蛋白表达水平。结论:1、针刺及时介入,能够减轻溶栓并发症,提高溶栓安全性,发挥延长脑梗死溶栓时间窗的效应,本实验研究表明,针刺可延长该安全时间窗至6h。2、针刺能够抑制ERK1/2信号通路的激活,进而下调MMP9以及NF-κB p65的表达,上调大鼠血脑屏障结构相关蛋白（Claudin5、ZO-1、MAP-2）的表达,并降低脑组织中炎症因子（TNF-α、IL-1 β）的含量,改善血脑屏障的破坏,表明针刺是通过调控ERK1/2信号通路来实现延长脑梗死溶栓时间窗效应的。
二、大鼠脑梗死早期活性MMP-9表达的实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、大鼠脑梗死早期活性MMP-9表达的实验研究（论文提纲范文）
（1）针刺提高脑梗死溶栓安全性的RhoA/ROCK信号通路机制及临床效应观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表(按在文中出现的先后排序) |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1.脑梗死流行病学资料 |
| 2.现代医学对脑梗死发病原因及机制的认识 |
| 3.中医对脑梗死(中风)病名及病因病机的认识 |
| 3.1 中风病名的历史沿革 |
| 3.2 病因病机 |
| 4.脑梗死治疗 |
| 4.1 现代医学治疗 |
| 4.2 中医治疗 |
| 5.针刺治疗脑梗死机制 |
| 6.本研究科学假说形成的理论依据 |
| 6.1 脑梗死溶栓疗法的优势及存在的并发症 |
| 6.2 脑梗死后BBB的破坏是溶栓并发症发生的病理基础 |
| 6.3 有效防控溶栓后BBB破坏的加重是减少溶栓并发症发生的前提 |
| 6.4 调控RhoA/ROCK信号通路是减轻溶栓后BBB损伤加重的关键路径 |
| 6.5 针刺是减轻溶栓后BBB损伤的有效途径 |
| 6.6 “针刺抑制RhoA/ROCK信号通路减少脑梗死rt-PA静脉溶栓所致的HT发生”科学假说的提出 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一、针刺提高脑梗死模型大鼠溶栓安全性的效应研究 |
| 1.材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器及设备 |
| 1.3 主要试剂 |
| 2.方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 改良的大鼠自体血栓栓塞型模型制备 |
| 2.3 激光多普勒血流仪监测脑血流量 |
| 2.4 干预方法 |
| 2.5 神经行为学评分 |
| 2.6 脑梗死体积测定 |
| 2.7 BBB通透性的测定 |
| 2.8 脑含水量的测定 |
| 2.9 脑出血性转化的测定 |
| 2.10 统计学方法 |
| 2.11 技术路线图 |
| 3.结果 |
| 3.1 模型制备过程中的脑血流量变化 |
| 3.2 各组大鼠神经行为学评分的比较 |
| 3.3 各组大鼠脑梗死体积的比较 |
| 3.4 各组大鼠BBB通透性的比较 |
| 3.5 各组大鼠脑含水量的比较 |
| 3.6 各组大鼠脑出血性转化的比较 |
| 4.小结 |
| 实验二、针刺提高脑梗死模型大鼠溶栓安全性的RhoA/ROCK信号通路机制研究 |
| 1.材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器及设备 |
| 1.3 主要试剂 |
| 2.方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 改良的大鼠自体血栓栓塞型模型制备 |
| 2.3 激光多普勒血流仪监测脑血流量 |
| 2.4 干预方法 |
| 2.5 Western Blot检测 |
| 2.6 Real-time PCR检测 |
| 2.7 免疫荧光检测 |
| 2.8 统计学方法 |
| 2.9 技术路线图 |
| 3.结果 |
| 3.1 各组大鼠RhoA蛋白和mRNA表达的比较 |
| 3.2 各组大鼠ROCK2蛋白和mRNA表达的比较 |
| 3.3 各组大鼠MLC蛋白表达的比较 |
| 3.4 各组大鼠MMP9蛋白表达的比较 |
| 3.5 各组大鼠ZO-1蛋白表达的比较 |
| 3.6 各组大鼠Claudin5蛋白表达的比较 |
| 3.7 各组大鼠Occludin蛋白表达的比较 |
| 4.小结 |
| 第三部分 临床研究 针刺提高脑梗死患者溶栓安全性的临床效应观察 |
| 1 临床资料 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 剔除标准 |
| 1.6 中止标准 |
| 2.方法 |
| 2.1 样本量估算 |
| 2.2 病例分组 |
| 2.3 治疗方法 |
| 2.4 观察指标 |
| 2.5 统计学处理 |
| 2.6 技术路线图 |
| 3.结果 |
| 3.1 基线比较 |
| 3.2 治疗后两组患者临床疗效比较 |
| 3.3 治疗前后NIHSS评分比较 |
| 3.4 治疗后sICH发生率比较 |
| 3.5 治疗后不良事件发生率比较 |
| 3.6 治疗前后sICH相关指标 |
| 3.7 依从性比较 |
| 4.小结 |
| 第四部分 讨论 |
| 1.脑梗死模型及评价指标选择依据 |
| 1.1 脑梗死模型选择 |
| 1.2 脑梗死模型评价指标选择 |
| 2.溶栓时间的选择依据 |
| 3.sICH观察时机的选择 |
| 4.治疗手段选择的思考 |
| 4.1 针刺联合溶栓药物的选择依据 |
| 4.2 醒脑开窍针刺法选择依据 |
| 5.RhoA/ROCK信号通路与脑梗死rt-PA静脉溶栓安全性的关系 |
| 6.针刺提高脑梗死模型大鼠溶栓安全性的效应分析 |
| 7.针刺提高脑梗死模型大鼠溶栓安全性的RhoA/ROCK信号通路机制研究 |
| 8.针刺提高脑梗死患者溶栓安全性临床效应的分析 |
| 9.本研究的创新性 |
| 10.不足与展望 |
| 10.1 不足 |
| 10.2 展望 |
| 第五部分 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 NIHSS评分量表 |
| 攻读博士学位期间研究成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）基于数据挖掘和网络药理学探讨中药治疗TON的用药规律及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词对照表 |
| 文献综述一 外伤性视神经病变的研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 红花治疗神经系统疾病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 研究一 基于数据挖掘探究中药治疗外伤性视神经病变的用药规律 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 文献来源 |
| 1.2 检索方法 |
| 1.3 文献纳入标准 |
| 1.4 文献排除标准 |
| 1.5 资料录入及处理 |
| 1.6 处方数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 文献筛选结果及基本信息 |
| 2.2 处方中药频次分析 |
| 2.3 处方中药归经频次分布 |
| 2.4 处方中药药性频次分布 |
| 2.5 处方中药药味频次分布 |
| 2.6 处方中药功效类别频次分布 |
| 2.7 处方高频中药关联规则分析结果 |
| 2.8 处方高频中药聚类分析结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 中医对TON的认识 |
| 3.2 治疗TON的常用处方分析 |
| 3.3 纳入处方中高频中药的分析 |
| 3.4 处方中药的药性、药味、归经、功效分析 |
| 3.5 治疗TON处方中药的关联规则分析 |
| 3.6 治疗TON处方中药的聚类分析 |
| 3.7 本研究的创新性 |
| 参考文献 |
| 研究二 基于网络药理学探究红花治疗外伤性视神经病变的机制 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 高频中药活性成分及作用靶点筛选 |
| 1.2 TON表达谱芯片数据下载及数据整理 |
| 1.3 视神经挤压5天后的C57BL/6J小鼠与正常对照组的差异表达基因筛选 |
| 1.4 红花治疗TON靶点的PPI网络构建 |
| 1.5 红花作用靶点与筛选出的TON差异表达基因的韦恩分析 |
| 1.6 关键靶点基因功能注释和通路富集分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 红花活性成分筛选结果 |
| 2.2 红花活性成分作用靶点 |
| 2.3 TON芯片差异表达基因结果 |
| 2.4 红花治疗TON靶点的PPI网络构建 |
| 2.5 红花活性成分对应靶点与TON差异基因交集靶点筛选 |
| 2.6 红花治疗TON核心靶点基因的GO富集分析 |
| 2.7 红花治疗TON核心靶点基因的KEGG通路富集分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 本研究的意义和创新性 |
| 3.2 选择红花作为该研究主要对象的原因 |
| 3.3 红花治疗TON的作用靶点分析 |
| 3.4 红花治疗TON靶点的PPI网络分析 |
| 3.5 红花治疗TON潜在机制分析 |
| 参考文献 |
| 研究三 红花注射液对L-谷氨酸钠诱导的RGC-5细胞TNF凋亡信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验设备与耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞复苏 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 细胞传代 |
| 2.4 细胞冻存 |
| 2.5 细胞计数 |
| 2.6 免疫荧光检测转录因子Brn3a的表达 |
| 2.7 筛选STSN诱导RGC-5分化的最佳浓度 |
| 2.8 CCK-8法筛选RGC-5谷氨酸损伤模型最佳浓度及时间 |
| 2.9 CCK-8法筛选红花注射液干预RGC-5谷氨酸损伤模型的最佳浓度及时间 |
| 2.10 CCK-8法检测红花注射液对STSN诱导后RGC-5细胞谷氨酸损伤模型细胞存活率 |
| 2.11 流式细胞术检测红花注射液对STSN诱导后RGC-5细胞谷氨酸损伤模型细胞凋亡率 |
| 2.12 Western-blot检测L-谷氨酸钠诱导的RGC-5损伤模型相关凋亡通路中各蛋白的表达 |
| 2.13 数据处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 RGC-5细胞的体外培养 |
| 3.2 RGC-5的鉴定 |
| 3.3 STSN诱导RGC-5分化 |
| 3.4 L-谷氨酸钠诱导RGC-5细胞凋亡损伤模型 |
| 3.5 红花注射液干预RGC-5细胞浓度的筛选结果 |
| 3.6 红花注射液对L-谷氨酸钠诱导后RGC-5细胞存活率的影响 |
| 3.7 红花注射液对各组RGC-5细胞凋亡率的影响 |
| 3.8 红花注射液通过TNFR1/FADD/Caspase-8/Caspase-3通路调控RGC-5的凋亡 |
| 4 讨论 |
| 4.1 红花及其有效成分保护RGCs的相关研究 |
| 4.2 红花及其有效成分对细胞凋亡相关通路的调控 |
| 4.3 在视神经损伤中,细胞凋亡对RGCs的存活起重要作用 |
| 4.4 TNFR/FADD/Caspase-8/Caspase-3凋亡信号通路 |
| 4.5 使用STSN分化RGC-5细胞的意义 |
| 4.6 红花注射液对L-谷氨酸钠诱导后RGC-5细胞凋亡通路的调控及分析 |
| 4.7 本研究的创新性 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 附录1 红花活性成分对应靶点的基本信息 |
| 附录2 TON差异基因 |
| 在学期间主要研究成果 |
（3）“三焦次第治疗”对脑缺血再灌注损伤大鼠模型血管神经单元的保护及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 基于“三焦次第治疗”论治中风的理论探讨及临床运用 |
| 1.中风病名与沿革 |
| 2.中风的主要病因病机 |
| 3.基于“阳虚为本”论中风病的“三焦次第治疗”的理论基础 |
| 4.“三焦次第治疗”的组方方解 |
| 5.临床医案举隅 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 SD大鼠脑缺血再灌注损伤模型构建及分期 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 实验二 不同剂量阳化汤对急性期大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 实验三 “三焦次第治疗”对急性期脑缺血再灌注损伤神经血管单元的保护作用及机制研究 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 实验四:“三焦次第治疗”对恢复期脑缺血再灌注损伤神经血管单元的保护作用及机制研究 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 中医中药在缺血性脑损伤中神经血管单元保护的研究进展 |
| 参考文献 |
（4）冰片配伍黄芪甲苷和三七总皂苷对脑缺血/再灌注损伤后神经血管单元保护作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文索引 |
| 前言 |
| 第一部分 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对脑缺血/再灌注损伤大鼠行为学及病理形态学的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 受试药物、剂量确定及药物配制 |
| 1.3 试剂及仪器 |
| 1.4 实验方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 MCAO模型的评价 |
| 2.2 Bederson神经功能评分比较 |
| 2.3 Garcia JH神经功能评分比较 |
| 2.4 脑梗死体积的比较 |
| 2.5 脑组织病理形态的比较 |
| 3 讨论 |
| 3.1 实验模型及动物的选择 |
| 3.2 中医对缺血性脑卒中的认识及中药治疗 |
| 4 小结 |
| 第二部分 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对脑缺血/再灌注损伤大鼠神经血管单元特异性结构蛋白及其结构完整性的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 受试药物、剂量及浓度 |
| 1.3 实验器材、耗材、试剂及仪器 |
| 1.4 实验方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后脑缺血皮质区NeuN表达的影响 |
| 2.2 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后脑缺血皮质区Laminin表达的影响 |
| 2.3 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后脑缺血皮质区GFAP表达的影响 |
| 2.4 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后 脑缺血皮质区EBA表 达的影响 |
| 2.5 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后脑缺血皮质区NVU的主要组分结构关系的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 指标选择依据 |
| 3.2 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后脑缺血皮质区Neu N、 EBA和Laminin及 GFAP表达的影响 |
| 3.3 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后脑缺血皮质区NVU主要组分的结构关系的影响 |
| 4 小结 |
| 第三部分 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对脑缺血/再灌注损伤大鼠神经血管单元主要组分相关功能蛋白的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 受试药物、剂量及浓度 |
| 1.3 实验器材、耗材、试剂及仪器 |
| 1.4 实验方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后脑缺血皮质区αII-Spectrin表达的影响 |
| 2.2 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后脑缺血皮质区AQP-4表达的影响 |
| 2.3 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后脑缺血皮质区VEGF表达的影响 |
| 2.4 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后脑缺血皮质区MMP-9 表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 指标选择依据 |
| 3.2 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后脑缺血皮质区αII-Spectrin、AQP-4、MMP-9及VEGF表达的影响 |
| 4 小结 |
| 第四部分 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对脑缺血/再灌注损伤大鼠损伤局部Notch信号通路的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 受试药物、剂量及浓度 |
| 1.3 实验器材、耗材、试剂及仪器 |
| 1.4 实验方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后脑缺血皮质区Notch1表达的影响 |
| 2.2 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后脑缺血皮质区NICD表达的影响 |
| 2.3 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后脑缺血皮质区Hes1 表达的影响 |
| 2.4 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后脑缺血皮质区DLL4 表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 指标选择依据 |
| 3.2 冰片配伍AST Ⅳ和 PNS对 CIRI后脑缺血皮质区Notchl、NICD、Hesl及 DLL4 表达的影响 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录A 个人简历 |
| 文献综述 |
| 文献综述一 基于神经血管单元的缺血性脑卒中相关信号通路研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 黄芪、三七及冰片抗脑缺血的研究进展 |
| 参考文献 |
（5）牛黄及其有效成分对神经血管单元的保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 上篇文献综述 |
| 综述一 缺血性中风背景下的神经血管单元 |
| 1. 缺血性中风的研究现状 |
| 2. 神经血管单元的组成 |
| 3. 在正常和低氧条件下的生理学 |
| 4. 缺血性脑卒中的实验模型 |
| 5. 基于神经血管单元的治疗策略 |
| 6. 参考文献 |
| 综述二 中药抗缺血性脑卒中的研究进展 |
| 一. 植物药 |
| 1.1 人参 |
| 1.2 栀子 |
| 1.3 姜黄 |
| 1.4 丹参 |
| 1.5 黄芪 |
| 1.6 川芎 |
| 1.7 地黄 |
| 1.8 黄连 |
| 二. 动物药 |
| 2.1 牛黄 |
| 2.2 麝香 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 下篇 实验研究 |
| 实验一 “神经血管单元”体外模型的建立以及缺氧/复氧模型的建立 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 实验二 牛黄及其有效成分对单独培养的神经元、星形胶质细胞、内皮细胞的细胞毒性 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 牛黄及其有效成分对脑神经血管单元的保护作用 |
| 1. 实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 不同配伍组分对脑神经血管单元的保护作用 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验五 牛磺酸和熊去氧胆酸对神经血管单元的作用机制 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验六 牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）中风膏预适应对脑缺血再灌注损伤后CD34、VEGF、MMP-9的影响研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验主要试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 实验药物 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 各实验组大鼠生活状态观察 |
| 3.2 中风膏对大鼠神经功能评分的影响 |
| 3.3 中风膏对各组大鼠脑组织形态学的影响 |
| 3.4 中风膏对大鼠脑组织中CD34 蛋白浓度的影响 |
| 3.5 中风膏对大鼠脑组织中VEGF浓度的影响 |
| 3.6 中风膏对大鼠脑组织中MMP-9 浓度的影响 |
| 3.7 中风膏对大鼠脑组织中VEGFm RNA表达的影响 |
| 3.8 中风膏对大鼠脑组织中MMP-9m RNA表达的影响 |
| 4.讨论 |
| 4.1 缺血预适应保护机制研究 |
| 4.2 中药预适应现代研究 |
| 4.3 中风膏主要组成治疗中风研究 |
| 4.4 中风膏在ICVD中的应用研究 |
| 4.5 中风膏预适应对实验大鼠一般情况的影响 |
| 4.6 中风膏预适应对神经功能评分的影响 |
| 4.7 中风膏对各组大鼠脑组织形态学影响 |
| 4.8 中风膏预适应对大鼠脑组织中CD34 蛋白、VEGF?MMP-9 含量及基因表达的影响 |
| 4.8.1 中风膏对CD34 蛋白的影响 |
| 4.8.2 中风膏对血管内皮生长因子的影响 |
| 4.8.3 中风膏对基质金属蛋白酶9(MMP-9)的影响 |
| 5.结语 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 体会与不足 |
| 参考文献 |
| 文献综述 短暂性脑缺血发作中西医治疗研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在校期间主要研究成果 |
| 附录1 医学实验动物合格证书 |
| 附录2 实验动物设施使用证明 |
| 附件 |
（7）“醒脑开窍”针法对脑缺血损伤血脑屏障通透性的调控作用及对ICAM-1、MMPs-9表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物及饲养条件 |
| 1.2 实验药物及给药方法 |
| 1.3 主要仪器、试剂及其配制方法 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 干预方法 |
| 2.3 实验模型的制备 |
| 2.4 模型评定标准 |
| 2.5 脑组织病理标本的制作 |
| 2.6 指标检测 |
| 2.7 统计处理 |
| 2.8 技术路线图 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 大鼠神经功能缺损评分 |
| 3.2 大鼠EB定量结果分析 |
| 3.3 RT-qPCR检测不同时相ICAM-1mRNA、MMPs-9mRNA的实验结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 中医病名及发病机制 |
| 4.2 西医发病机制 |
| 4.3 血脑屏障的生理病理变化 |
| 4.4 .针刺对血脑屏障的调控作用 |
| 4.5 醒脑开窍针法在治疗缺血性脑卒中的作用 |
| 4.6 中风膏对治疗缺血性脑卒中的作用 |
| 4.7 实验结果分析 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 文献综述 缺血性脑卒中时血脑屏障变化及其影响因素 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间获得的科研成果 |
（8）基于GEO数据库筛选脑梗死大鼠血清生物标志物及活血荣络方干预作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 引言 |
| 第一部分 基于GEO数据库筛选脑梗死大鼠血清生物标志物 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 脑梗死差异基因(DEGs)筛选 |
| 1.2 脑梗死差异基因蛋白共表达网络(PPI)构建及聚焦 |
| 1.3 脑梗死差异基因GO和KEGG富集分析 |
| 2.结果 |
| 2.1 脑梗死差异基因筛选结果 |
| 2.2 脑梗死差异基因蛋白共表达网络(PPI)构建及聚焦结果 |
| 2.3 脑梗死差异基因GO和KEGG富集分析结果 |
| 3.讨论 |
| 第二部分 探讨活血荣络方对MCAO再灌注损伤大鼠血清BDNF、bFGF的影响 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物制备 |
| 1.3 主要实验试剂和材料 |
| 1.4 主要实验设备 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 动物模型的制备与评价 |
| 2.2 实验分组与给药 |
| 2.3 取材 |
| 2.4 观察指标及检测方法 |
| 2.5 统计学方法 |
| 3.结果与分析 |
| 3.1 神经功能缺损评价 |
| 3.2 HE染色观察脑组织病理改变 |
| 3.3 ELISA检测血清BDNF、bFGF的水平 |
| 4.讨论 |
| 第三部分 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述:脑梗死血清生物标志物研究进展 |
| 参考文献 |
（9）中风醒脑液防治急性脑缺血-再灌注损伤作用及其机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写索引 |
| 引言 |
| 研究路径 |
| 第一部分 中风醒脑液对急性脑缺血-再灌注损伤防治作用的研究 |
| 1.实验材料与设备 |
| 2.研究方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论Ⅰ:实验设计的相关依据 |
| 5.讨论Ⅱ:中风醒脑液对急性脑缺血-再灌注损伤的防治作用 |
| 6.小结 |
| 第二部分 中风醒脑液对脑缺血-再灌注过程中血脑屏障的保护作用及机制的研究 |
| 1.实验材料与设备 |
| 2.研究方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论Ⅰ:中风醒脑液对血脑屏障的保护作用 |
| 5.讨论Ⅱ:中风醒脑液对缺血再灌注区CLAUDIN-5、OCCLUDIN、MMP-2、MMP-9 的调节作用 |
| 6.讨论Ⅲ:中医学对急性脑缺血-再灌注损伤的认识 |
| 7.小结 |
| 全文总结 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 中医药防治脑缺-再灌注损伤的研究现状 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间公开发表论文及参与科研项目 |
（10）针刺调控ERK1/2信号通路延长脑梗死溶栓时间窗的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 理论研究 |
| 一、急性脑梗死概述 |
| 1、流行病学 |
| 2、病因及发病机制 |
| 3、溶栓疗法及局限性 |
| 二、血脑屏障破坏是脑梗死溶栓并发症的病理基础 |
| 1、血脑屏障结构 |
| 2、血脑屏障破坏与溶栓并发症 |
| 三、调控ERK1/2信号通路是治疗脑梗死的关键路径 |
| 1、ERK1/2信号通路 |
| 2、ERK1/2信号通路与脑梗死 |
| 四、中医对脑梗死的认识及针刺治疗概况 |
| 1、病名溯源 |
| 2、病因病机 |
| 3、古代针灸治疗 |
| 4、现代针灸治疗方法及机制 |
| 五、本研究科学假说 |
| 第二部分 针刺延长脑梗死溶栓时间窗的效应研究 |
| 一、材料 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 主要仪器及设备 |
| 3. 主要试剂 |
| 二、方法 |
| 1. 动物分组 |
| 2. 改良的大鼠自体血栓栓塞性模型制备 |
| 3. 激光多普勒血流仪监测脑血流量 |
| 4. 神经行为学评分 |
| 5. 干预方法 |
| 6. 脑梗死体积测定 |
| 7. 脑含水量的测定 |
| 8. BBB通透性的测定 |
| 9. 溶栓后脑出血性转化的测定 |
| 10. 统计学方法 |
| 三、结果与分析 |
| 1. 模型制备过程中的脑血流量变化 |
| 2. 各组大鼠神经行为学评分的比较 |
| 3. 各组大鼠脑梗死体积的比较 |
| 4. 各组大鼠脑出血性转化的比较 |
| 5. 各自大鼠BBB通透性的比较 |
| 6. 各组大鼠脑含水量的比较 |
| 四、本章小结 |
| 第三部分 针刺调控ERK1/2信号通路延长脑梗死溶栓时间窗的机制研究 |
| 一、材料 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 主要仪器及设备 |
| 3. 主要试剂 |
| 二、方法 |
| 1. 动物分组及干预方法 |
| 2. 侧脑室注射 |
| 3. 改良的大鼠自体血栓栓塞性模型制备 |
| 4. 激光多普勒血流仪监测脑血流量 |
| 5. Western Blot检测 |
| 6. Real-time PCR检测 |
| 7. ELISA检测 |
| 8. 免疫荧光检测 |
| 9. 透射电镜观察血脑屏障超微结构 |
| 10. 统计学方法 |
| 三、结果与分析 |
| 1. 各组大鼠BBB超微结构的改变 |
| 2. 针刺对脑梗死溶栓大鼠ERK1/2信号通路的作用 |
| 3. 各组大鼠MMP9的表达比较 |
| 4. 各组大鼠ZO-1的表达比较 |
| 5. 各组大鼠Claudin5的表达比较 |
| 6. 各组大鼠MAP-2的表达比较 |
| 7. 各组大鼠NF-κB p65的表达比较 |
| 8. 各组大鼠TNF-α和IL-1β的含量比较 |
| 9. ERK1/2信号通路对脑梗死溶栓大鼠MMP9表达的影响 |
| 10. ERK1/2信号通路对脑梗死溶栓大鼠NF-κB p65表达的影响 |
| 四、本章小结 |
| 第四部分 讨论 |
| 一、动物模型的制备与评价 |
| 二、针刺方案选择 |
| 三、针灸延长脑梗死溶栓时间窗的效应探讨 |
| 四、针刺调控ERK1/2信号通路延长脑梗死溶栓时间窗机制探讨 |
| 五、本研究的创新性 |
| 六、不足与展望 |
| 第五部分 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间研究成果 |
| 致谢 |
四、大鼠脑梗死早期活性MMP-9表达的实验研究（论文参考文献）
- [1]针刺提高脑梗死溶栓安全性的RhoA/ROCK信号通路机制及临床效应观察[D]. 宋扬扬. 南京中医药大学, 2021(01)
- [2]基于数据挖掘和网络药理学探讨中药治疗TON的用药规律及机制[D]. 吴琼. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]“三焦次第治疗”对脑缺血再灌注损伤大鼠模型血管神经单元的保护及机制研究[D]. 张伟. 湖南中医药大学, 2021(02)
- [4]冰片配伍黄芪甲苷和三七总皂苷对脑缺血/再灌注损伤后神经血管单元保护作用的研究[D]. 欧阳波. 湖南中医药大学, 2021(02)
- [5]牛黄及其有效成分对神经血管单元的保护作用研究[D]. 杜欣. 北京中医药大学, 2021(02)
- [6]中风膏预适应对脑缺血再灌注损伤后CD34、VEGF、MMP-9的影响研究[D]. 侯慧敏. 甘肃中医药大学, 2021(01)
- [7]“醒脑开窍”针法对脑缺血损伤血脑屏障通透性的调控作用及对ICAM-1、MMPs-9表达的影响[D]. 康晓文. 甘肃中医药大学, 2021(01)
- [8]基于GEO数据库筛选脑梗死大鼠血清生物标志物及活血荣络方干预作用研究[D]. 康蕾. 湖南中医药大学, 2020(03)
- [9]中风醒脑液防治急性脑缺血-再灌注损伤作用及其机制的研究[D]. 姚德祎. 成都中医药大学, 2020(02)
- [10]针刺调控ERK1/2信号通路延长脑梗死溶栓时间窗的实验研究[D]. 张新昌. 南京中医药大学, 2020(01)