一、胶质细胞源性神经营养因子（论文文献综述）
王康,智晓东,王伟[1]（2022）在《人羊膜上皮细胞修复损伤神经的作用及机制》文中研究说明背景:人羊膜上皮细胞与其他各种干细胞相比,发育更原始,扩增能力更强,特别是具有来源广、获取成本低、可控性强等众多优势,对神经损伤修复过程有着重要的积极影响,是一种具有广泛应用前景的种子细胞。目的:总结人羊膜上皮细胞在神经损伤治疗中的应用效果,为临床神经损伤的治疗提供参考及依据。方法:检索Pub Med数据库2000-2020年之间的相关文章,英文检索词为"central nervous system injury,peripheral nerve injury,amniotic epithelial cells,cell therapy,tissue engineering,genetic engineering,repair,regenerate",检索中国知网、维普、万方等数据库2000-2020年之间的相关文章,中文检索词为"中枢神经损伤,周围神经损伤,人羊膜上皮细胞,细胞治疗,组织工程,基因工程,修复,再生"。对文献资料及参考文献进行逐一查阅。结果与结论:人羊膜上皮细胞具有强大的神经组织修复再生和保护能力,可避免其他干细胞移植时出现的免疫排斥、致瘤风险等问题,是治疗神经系统疾病的可靠细胞来源之一,未来的研究不仅仍需在其基本生物学特性方面继续深入,还需在诱导分化能力方面进一步展开。
吴子健[2]（2021）在《通腑逐瘀法指导下抵当汤加减调控AQP4表达治疗大鼠急性脊髓损伤的作用机制研究》文中指出目的 本次研究结合急性脊髓损伤（acute spinal cord injury,ASCI）的研究现状和热点,基于导师的临床经验,以通过抑制水通道蛋白4（aquaporin 4,AQP4）的表达从而减轻ASCI后脊髓水肿为切入点,旨在探讨通腑逐瘀法治则指导下抵当汤加减治疗ASCI的可能作用机制,以期为推广通腑逐瘀法治疗ASCI提供理论依据。方法 第一部分:10周龄SD大鼠30只,按随机数字表法随机分为假手术组（A组）、自制打击器2cm组（B1组）、自制打击器4cm组（B2组）、NYU组1.25cm组（C1组）、NYU组2.5cm组（C2组）,每组各6只。除Sham组外,其余各组采用改良Allen’s法造模。B1、B2组将9g打击杆分别从2cm、4cm处自由坠落撞击T10脊髓,C1、C2组使用NYU打击器分别从1.25cm、2.5cm处撞击T10脊髓。各组造模完成后分别于1、3、5、7d进行BBB评分和Reuter评分,7d后行灌注取材,石蜡包埋切片,尼氏染色,观察各组组织受损程度和神经元存活率。第二部分:10周龄SD大鼠60只按随机分配方法随机分为假手术组（Sham）、模型组（Model）、抵当汤组（DDD）、TGN-020组（TGN-020）和抵当汤联合TGN-020组（DDD+TGN-020）,每组各12只。Sham组仅打开椎板暴露脊髓但不损伤脊髓;其余各组均采用自制脊髓打击器从40mm高度对脊髓进行打击。Sham组和Model组术后不予任何治疗措施干预,DDD组于术后3d予以抵当汤加减每日灌胃,持续3d,根据大鼠与人用药剂量体表面积换算法,DDD组大鼠每日用药剂量为5.04g/kg,采用蒸馏水进行稀释一定比例配制后予以灌胃处理,每日早晚各1次。TGN-020组处理方法:腹腔注射给药,每日用药剂量为5mg/kg,给药时间为3d。DDD+TGN-020组处理方法:予TGN-020腹腔注射给药,随后给予DDD灌胃处理。干预结束后进行行为学评价（BBB评分、斜板实验及Reuter评分）观察大鼠神经功能恢复情况,取材后进行脊髓组织大体观察和含水率检测、HE染色观察组织受损程度,尼氏染色观察神经元形态,免疫荧光检测各组脊髓组织AQP4、GFAP共表达的阳性细胞个数,Western Blot法检测各组脊髓组织中AQP4、GFAP、CSPG、PCNA、NGF、BDNF、GAP-43蛋白的表达量,q PCR法检测各组脊髓组织中CSPG、PCNA基因的表达量,电镜下观察各组髓鞘和神经元组织形态,高尔基染色观察树突和树突棘形态。第三部分:8周龄SD大鼠40只随机分为空白血清组和含药血清组,含药血清组给予5.04g/kg DDD灌胃,持续3d,空白血清组予等剂量超纯水灌胃,持续3d,干预结束后提取血清备用。每次取胚胎大鼠8-12只,通过机械-酶消化法提取星形胶质细胞（Astrocytes,AS）,细胞采用10%的高糖培养基培养,观察细胞传代至第3代进行后续实验。首先,免疫荧光鉴定细胞中GFAP含量,随后进行实验分组:空白组（Control group,CG）、模型组（Model group,MG）、空白血清组（Blank serum group,BSG）、DDD含药血清组（DDD）、TGN-020干预组（TGN-020）、DDD联合TGN-020组（DDD+TGN-020）,除MG外,其余各组均以划痕法进行造模,造模完成后DDD予以含药血清干预,BSG予以等剂量空白血清干预,TGN-020予以100nm TGN-020干预,DDD+TGN-020先予TGN-020干预后再予DDD干预。MTT法检测DDD含药血清干预AS的安全干预浓度、最佳干预时间和干预浓度,MTT法检测各组对RAS活性的影响,免疫荧光染色法检测RAS中AQP4和GFAP共表达的细胞数,Western Blot法检测各组RAS中AQP4、GFAP和NGF、BDNF、GAP-43蛋白的表达量,镜下观察DDD含药血清对RAS迁移率的影响。统计学方法:实验所得数据均使用SPSS21.0软件进行统计学处理,计量资料以均值±标准误（`X±S）表示,所得数据均经过正态性分布检测,若符合正态分布,则采用单因素方差分析,方差齐则采用LSD法,方差不齐则采用Games-Howell法;若不符合正态分布,则采用非参检验。以P<0.05提示差异具有统计学意义。结果 第一部分:自制脊髓打击器与NYU打击器建立脊髓损伤模型研究1.各组脊髓外观形态比较A组T10节段处硬脊膜完整,脊髓组织呈均匀乳白色,形态饱满圆润;B1、B2、C1、C2组T10节段处硬脊膜均完整,颜色呈不同程度的鲜红色或暗红色,损伤处可见水肿、瘀血及瘢痕组织增生,相对于B1、C1组,B2、C2组水肿更严重、瘀血范围更广、颜色更深、瘢痕组织更多。2.行为学评分比较BBB评分结果显示,A组术后除因手术致运动量减少外,未出现双下肢功能异常的表现,评分为21分;其余各组均出现不同程度的运动功能障碍,具体表现为:B2与B1、C2与C1相比,BBB评分显着降低,差异具统计学意义（P<0.05）;B1与C1、B2与C2相比,BBB评分无显着差异（P>0.05）。Reuter评分结果显示,A组术后未发现感觉功能异常现象;其余各组术后均出现不同程度的感觉功能异常现象,具体表现为B2、C2组术后1d牵张反射消失,肌力、肌张力减弱或消失,疼痛回缩反射迟钝,背部感觉存在或消失;B1、C1组术后1d除肌力消失外,牵张反射、肌张力、疼痛回缩反射、背部感觉均存在,术后3d肌力开始恢复。B2与B1、C2与C1相比,Reuter评分显着降低,差异具统计学意义（P<0.05）。B1与C1、B2与C2相比,Reuter评分无显着差异（P>0.05）。3.尼氏染色尼氏染色结果显示,A组脊髓组织结构完整,灰白质边界清晰,神经元细胞形态规则、胞核大、核仁清晰可见、数量多,胞质内可见斑块样尼氏体。相比A组,其余各组结构破坏更严重,灰白质结构不清,组织空白间隙更大,损伤处可见细胞呈空泡样改变或细胞皱缩、体积减小,神经元数量减少,尼氏体模糊或消失。4.脊髓受损面积比结果表明,A组未见受损区域,比值为0,其余各组均高于A组,差异具有统计意义（P<0.05）;相对于B1和C1,B2和C2损伤面积比值明显升高,差异具有统计意义（P<0.05）;B1与B2、C1与C2损伤面积比值差异不具有统计意义（P>0.05）。5.各组脊髓前、后角神经元损伤程度比较通过分析前、后角神经元阳性细胞数结果显示,A组神经元数目多,尼氏体含量多,其余各组均少于A组,差异具有统计意义（P<0.05）;相对于B1和C1,B2和C2神经元阳性细胞数明显减少,差异具有统计意义（P<0.05）;B1与B2、C1与C2神经元阳性细胞数差异不具有统计意义（P>0.05）。第二部分:抵当汤加减调节AQP4表达对SCI大鼠脊髓水肿的作用研究1.各组脊髓组织的大体观察从大体观察上来看,Sham组脊髓组织颜色鲜白,组织完整,未见瘀血部位和水肿;Model组在打击损伤部位可见明显的瘀血区域,瘀血颜色深红,瘀血范围较大,并可见明显脊髓水肿;DDD组在打击损伤部位可见较小的瘀血区域,瘀血部位颜色淡红,可见轻度水肿;DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组大体观察相似,肉眼见无显着差异。2.各组脊髓组织含水率与Sham组相比,其余各组脊髓组织含水率均显着增高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组脊髓组织含水率均显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组组间比较,脊髓组织含水率没有显着差异（P>0.05）。3.行为学观察结果各组大鼠BBB评分、斜板实验结果以及Reuter评分显示,与Sham组相比,其余各组BBB评分和斜板实验得分均显着降低（P<0.05）,Reuter评分均显着升高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组BBB评分均显着升高（P<0.05）,Reuter评分均显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组组间比较无显着差异（P>0.05）。4.HE染色Sham组组织结构完整,神经元等细胞形态结构良好,未见瘢痕组织或空洞形成,未见瘀血区域或炎性物质渗出。Model组损伤部位可见组织结构离乱,大量瘢痕组织和脊髓空洞的形成,可见明显的瘀血区域,并伴有大量的炎性细胞浸润,神经元等细胞皱缩,数量减少。其余三组可见组织形态结构较完整,可见少量脊髓空洞的形成,瘀血区域范围较小,炎性细胞清润较少,神经元等细胞形态结构较完整。使用Image J软件对各组空洞面积进行定量分析,结果显示,与Sham组相比,Model组脊髓空洞面积显着增加（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组脊髓空洞面积显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组脊髓空洞面积组间比较不具有显着差异（P>0.05）。5.尼氏染色观察各组神经元形态Sham组脊髓形态结构完整,灰质呈蝴蝶状,灰白质界限清晰,可见较多的神经元分布,神经元胞质内可见染色清晰的斑块状尼氏体,神经元胞体饱满,细胞核大,核仁明显。Model组脊髓组织破坏严重,结构不完整,灰、白质界限不清,可见大量的炎性细胞浸润,神经元皱缩、液化、坏死,形成较多的空泡,尼氏体较小或消失。相对Model组,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组脊髓结构较完整,隐约可见灰白质界限,神经元仍可见,数量较多,空泡样改变减少,尼氏体数量较多、较饱满。但相对于Sham组,神经元仍存在固缩,胞浆减少,核变小,尼氏体减少等病理改变。6.免疫荧光检测各组AQP4、GFAP的阳性细胞表达量AQP4阳性细胞表达呈绿色,GFAP阳性细胞表达呈红色,DAPI染色呈深蓝色,AQP4+/GFAP+细胞表达呈黄色树枝状,各组染色背景干净,表达清晰,细胞核数量无显着差异（P>0.05）,具有可比性。Sham组少见或未见明显的AQP4+/GFAP+细胞,Model组可见较多的AQP4+/GFAP+细胞,且细胞亮度高,胞体肿胀程度严重。与模型组相比,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组细胞数量较少,亮度较低,细胞肿胀程度减轻。对各组的AQP4+/GFAP+细胞进行计数和统计,与Sham组相比,其余各组AQP4与GFAP的阳性细胞占比均显着增高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组AQP4与GFAP的阳性细胞占比显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组间相比较,AQP4与GFAP的阳性细胞占比无显着差异（P>0.05）。7.Western Blot法检测各组AQP4、GFAP、PCNA、CSPG、NGF、BDNF、GAP-43的蛋白表达量各组蛋白条带背景清晰,无杂带现象,蛋白表达量趋势明显,具有可比性。与Sham组相比,各组脊髓组织中AQP4、GFAP、PCNA、CSPG蛋白的灰度值显着增高（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白的灰度值显着降低（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组脊髓组织中AQP4、GFAP、PCNA、CSPG蛋白的灰度值显着降低（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白的灰度值显着增高（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组组间比较结果显示,各组脊髓组织中AQP4、GFAP、PCNA、CSPG、NGF、BDNF、GAP-43蛋白的灰度值差异不具有统计学意义（P>0.05）。8.各组脊髓组织中PCNA和CSPG基因表达量各组基因检测的扩增曲线变化平稳,溶解曲线为平滑的单峰形态,说明引物设计好,模板未见污染,实验结果具有可比性。各组目的基因相对表达量结果显示,与Sham组相比,各组脊髓组织中PCNA、CSPG基因的表达量显着增高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组脊髓组织中PCNA、CSPG基因的表达量显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组组间比较结果显示,各组脊髓组织中PCNA、CSPG基因的表达量差异不具有统计学意义（P>0.05）。9.透射电子显微镜观察髓鞘和神经元组织形态Sham组脊髓组织在透射电镜下可见髓鞘外形规则,厚薄均一,形似同心圆状,结构完整,未见破裂、缺失等改变,板层结构均匀致密,胞内线粒体丰富,胞浆饱满,清晰可见。Model组髓鞘结构不规则,部分髓鞘断裂缺失,厚薄不一,局部可见褶皱卷曲,板层结构松散、融合,线粒体肿胀,甚至部分溶解消失;DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组可见髓鞘结构较完整,形态部分不规则但较Model组改善,部分髓鞘可见卷曲、厚薄不一,板层结构较均匀,虽有部分缺失,但松散程度相对Model组较轻,仍可见清晰的线粒体,但数量较Sham组少,胞体较小。10.电镜观察树突和树突棘形态各组脊髓经高尔基染色后结果显示:Sham组脊髓树突结构完整、形态规则、长度较长,树突上密布树突棘,树突棘分布整齐、均匀致密、数量较多;Model组脊髓树突形态不规则,部分断裂缺失,长度较短,较为纤细,树突棘数量少,稀疏分布,排列紊乱;与Model组相比,DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组脊髓树突形态有所改善、树突较长、结构较完整、周经较粗,树突棘数量较多,排列更为规则、整齐。对各组脊髓树突长度及树突棘进行定量分析,结果显示,与Sham组相比,Model组树突长度明显降低（P<0.05）,树突棘数量明显减少（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组树突长度明显增加（P<0.05）,树突棘数量显着增多（P<0.05）;DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组组间相比,差异不具有统计学意义（P>0.05）。第三部分:抵当汤加减含药血清对反应性星形胶质细胞的活化、迁移及神经生长相关细胞因子分泌的作用1.原代AS镜下观察原代细胞培养2d,镜下可见AS细胞呈不规则形状散在分布,部分细胞形似星形,细胞核大、呈椭圆形,细胞胞浆丰富,从胞体向四周发出长而有分支的突起;将原代细胞传代至第三代可见细胞生长状态良好,适宜进行后续实验。2.AS鉴定免疫荧光染色结果显示,GFAP染色呈阳性,阴性对照组未见任何阳性染色,提示GFAP呈特异性表达,所提取的细胞为AS。3.DDD含药血清对AS的安全干预浓度,以及干预RAS的最佳干预时间和最佳干预浓度DDD含药血清干预AS的安全浓度范围为:0-15%,DDD含药血清干预RAS最佳的干预浓度为10%,最佳干预时间为48h。4.DDD含药血清对RAS活性的影响MTT结果显示,与CG组相比,其余各组RAS活性均降低（P<0.05）;与MG相比,BSG组RAS活性无显着差异（P>0.05）,DDD、TGN-020和DDD+TGN-020组RAS活性均显着下降（P<0.05）;DDD、TGN-020和DDD+TGN-020组间比较无显着差异（P>0.05）。5.DDD含药血清对RAS迁移率的影响损伤24h后,各组RAS与对侧细胞完全分离,中间形成一条空白的划痕区域,划痕区未见或少见RAS;48h后部分细胞开始向对侧延伸突触,划痕区域出现部分肥大的RAS,细胞胞浆丰富,胞体呈球形,发亮,细胞加速分裂;72h后划痕区域缩小,部分RAS与对侧RAS突触交织,划痕开始愈合。在整个愈合过程中,24h各组划痕区域面积比无显着差异（P>0.05）;自48h开始,与MG组相比,BSG划痕区域面积比无显着差异,其余各组均明显较大（P<0.05）。DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组组间比较无显着差异（P>0.05）。72h后,MG组与BSG组划痕区域面积比无显着差异（P>0.05）。与MG组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组划痕区域面积比明显较大（P<0.05）,组间比较无显着差异（P>0.05）。以上划痕区域面积比的改变反映了RAS在损伤发生后向受损区域的迁移速率。6.各组对RAS中AQP4、GFAP荧光表达量的影响使用免疫荧光染色法对RAS中AQP4、GFAP和细胞核进行了标记。染色结果显示,AQP4+细胞呈绿色,GFAP+细胞呈红色,细胞核呈蓝色,荧光双标的细胞呈黄色的不规则树枝状。其中,CG组仅见12个零星分布的AQP4+/GFAP+细胞;MG组和BSG可见较多的AQP4+/GFAP+细胞,亮度较高,细胞肿胀程度严重;DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组可见较少的AQP4+/GFAP+细胞,亮度较低,细胞肿胀程度较轻。对AQP4+/GFAP+细胞进行计数统计,结果表明,与CG相比,其他各组阳性细胞占比显着增多（P<0.05）;与MG相比,除BSG组无显着差异外（P>0.05）,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组阳性细胞占比显着减少（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组阳性细胞占比组间相比无显着差异（P>0.05）。7.各组对RAS中AQP4、GFAP和NGF、BDNF、GAP-43蛋白表达量的影响结果显示,与CG组相比,其余各组AQP4和GFAP蛋白表达量均显着增高（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白表达量均显着降低（P<0.05）;与MG组相比,除BSG组无明显差异外（P>0.05）,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组AQP4和GFAP蛋白表达量均显着降低（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白表达量均显着增高（P<0.05）,3组组间比较无显着差异（P>0.05）。结论 1.自制简易脊髓打击器从20mm、40mm高处垂直撞击脊髓组织具有和NYU打击器从12.5mm、25mm处打击脊髓损伤程度相似的脊髓损伤动物模型,自制简易脊髓打击器安全性高,稳定性好,操作简便,价格低廉,可供科研工作者参考。2.通腑逐瘀法治则指导下抵当汤加减可有效消除SCI大鼠损伤处水肿,促进神经功能康复。其具体的作用机制为:通过抑制AQP4的表达可抑制反应性星形胶质细胞活化,减少胶质瘢痕形成,提高神经营养因子、神经生长因子及细胞膜生长相关蛋白的表达,促进神经功能康复。3.DDD含药血清能通过抑制AQP4的表达,有效减轻RAS水肿,减少RAS活化和减缓RAS迁移,促进RAS中神经营养因子的分泌。
朱业淘[3]（2021）在《联用神经因子对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能的影响研究》文中认为背景:重型颅脑创伤是目前世界上导致青年人死亡和残疾的主要原因之一,重型颅脑创伤后常导致神经功能废损,而传统治疗方法的效果往往难以令人满意;因此如何改善重型颅脑创伤的预后一直是医疗界的难题。早些年已有相关研究证实在重型颅脑创伤后,损伤脑组织中有部分新生神经细胞生成,但数量极为有限,并不能使受损的神经功能得到充分的改善。神经因子作为一类对神经细胞营养作用且能够调节神经细胞存活的蛋白质,已经被多项研究证实可以在体外促进神经细胞的增殖和抗神经细胞凋亡以改善受损的神经功能,并且在神经缺血性和退行性疾病的邻域已经得到了较为宽泛的研究,在治疗颅脑创伤的研究方面,则少见有研究神经因子对重型颅脑创伤后大鼠神经细胞的影响,而将神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子联用应用观察对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能影响的研究更是罕见。目的:探索联合应用不同的神经因子对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能的影响,观察不同实验组大鼠肢体功能恢复差异,探索外源性神经因子治疗重型颅脑创伤的合适策略及机制。方法:将48只SD大鼠随机分为四个组,即神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组、联用神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子组以及对照组。颅脑创伤模型参照改良Feeney法制作,在造模一天后,对照组通过脑室注射途径注射生理盐水,各个实验组分别由脑室途径注入相应的神经因子。采用免疫组化法、免疫荧光法比较各组大鼠脑内损伤皮层、室管膜下区、海马齿状回以及损伤对侧相应区域阳性细胞的表达;采用前肢放置实验和平衡实验观察大鼠的肢体功能情况,比较各组大鼠肢体功能恢复情况的差异。结果:（1）在造模3 d、7d、14d后神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组、联合组相应区域的神经元、神经胶质细胞数量明显多于对照组,差异有显着性意义（P<0.05）,同时神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组神经元、神经胶质细胞明显少于联合组（P<0.05）,而神经生长因子组和碱性成纤维细胞生长因子组对应的各个区域阳性细胞数量没有明显差异;（2）在造模5天后,行为学实验评分对比中,对照组评分均高于神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组以及联合组,差异具有统计学意义（P<0.05）,且联合组评分低于碱性成纤维细胞生长因子组、神经生长因子组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:联合应用外源性神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子较单用二者之一更能促进神经细胞的增殖和大鼠肢体功能的恢复。
乔奕胜[4]（2021）在《芍药甙对小胶质细胞的影响及其分子机制以及促进神经干细胞向多巴胺神经元分化的研究》文中提出目的:探讨芍药甙（PF）对激活小胶质细胞的影响及促进神经干细胞（NSCs）向多巴胺（DA）能神经元分化的影响并初步探寻其可能的分子机制,试想为帕金森病（PD）的神经干细胞移植治疗寻找新的思路。方法:1.原代小胶质细胞的培养及鉴定 解剖分离2天内SD乳鼠大脑皮质区域,使用胰蛋白酶消化及机械吹打制成单细胞悬液,接种于含有10%FBS的完全培养基中培养;在8-11天后经摇床震摇和轻拍法纯化小胶质细胞,并用小胶质细胞特异性荧光CD11b/c对小胶质细胞进行免疫荧光鉴定。2.胚胎中脑腹侧原代神经干细胞培养及鉴定 用孕14d的SD大鼠,脱颈法处死后酒精充分消毒腹部,取出珠状胚胎,严格遵守无菌操作,分离胚胎中脑腹侧组织;将脑组织充分剪碎至≤1mm3,用NSCs完全培养基,火焰抛光消毒吸管并吹打后,通过200目过滤网过滤,形成单细胞悬液,离心（1200rpm,5min）后收集细胞。加入完全培养液重悬后,细胞密度控制为每毫升2×105个接种于T25细胞培养瓶,置于于37℃、5%CO2培养箱中培养。每天在倒置显微镜下观察细胞的形态和情况。根据细胞代谢情况,每2-3d加1次液。原代经过大约3-5天培养后,使用特异性荧光蛋白巢蛋白（Nestin）对其进行鉴定。3.CCK法检测差异浓度芍药甙对MG活率的影响纯化小胶质细胞后,芍药甙溶于 DMSO,并分别以 0.25 mM,0.5 mM,1 mM,2mM 处理,37℃、5%CO2条件培养24 h,对照组加入相同体积的DMSO。将芍药甙预处理后的小胶质细胞每孔104接种于24孔板。37℃、5%CO2条件培养1-2 d。严格按照CCK-8试剂盒（碧云天）说明操作,490 nm波长,在酶标仪上测各孔OD值。4.ELISA法检测芍药甙对激活MG的影响实验分组:A.正常小胶质细胞组（MG）:不施加任何处理因素。B.激活小胶质细胞组（LPS+MG）:以LPS诱导活化小胶质细胞,不施加其他处理因素。C.PF作用正常小胶质细胞组（MG+PF）。D.PF作用活化小胶质细胞组:以LPS诱导活化小胶质细胞后,向细胞培养液加入PF（浓度参照第3步结果,作用时间同前）。收集细胞培养液,ELISA法检测各组细胞培养液中炎症相关因子:白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）;以及神经营养因子:脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）、和胶质细胞源性神经营养因子（glial cell-line derived neurotrophic factor,GDNF）的表达水平。参照ELISA试剂盒说明（CUSABIO,96T）,分别设标准品孔（7个浓度）、空白对照孔和待测样品孔依次加样、显色、终止、读板。在反应终止后5 min内立即移至酶标仪处,在波长为490 nm检测各孔的OD值。5.不同状态MG对NSCs存活、生长和分化的影响采用Transwell系统,下层培养神经干细胞,上层为MG,并进行如下分组:（1）NSCs单独培养组;（2）NSCs与MG共培养组;（3）PF处理过的NSCs与MG组。在共培养3d、6d、9d时,观察NSCs的存活、生长以及向DA能神经元分化的情况。在以上时间采用ELISA法检测各组神经营养因子的分泌情况;采用免疫荧光染色检测各组NSCs向DA能神经元的分化情况;WB检测各组神经干细胞向DA能神经元分化的相关标记基因和蛋白（Pitx3,TH,DAT）的表达水平。结果:1.胶质细胞混合培养至7-10d时,细胞充分多层生长。经轻拍法得到纯化小胶质细胞,经特异性标志物CD11b/c免疫细胞化学鉴定为阳性,纯度在96%左右。2.CCK法结果显示,在PF处理48小时,PF浓度在0.5mM时,对小胶质细胞活性增加（t=2.598,P<0.05）。3.ELISA检测结果显示,PF可显着抑制脂多糖引起的小胶质细胞的过度激活,显着减少炎症相关因子（IL-1、IL-6、TNF-α）的分泌,并能增加BDNF、GDNF等神经营养因子的分泌。4.Western blot结果显示:在LPS在刺激小胶质细胞后,mTOR、HIF-1α和p-NF-κB表达水平均增加;加入PF后,mTOR、HIF-1α、p-NF-κB表达水平降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。5.原代NSCs培养7d后,可形成大量并悬浮的神经球,特异性标志物巢蛋白（Nestin）染色阳性。6.Transwell共培养后,ELISA检测结果显示,与其他各组相比,PF处理过的MG+NSCs共培养组分泌更多的神经营养因子BDNF、GDNF。7.Transwell共培养后,免疫荧光检测结果显示,与其他各组相比,PF处理过的MG+NSCs共培养组有更多的NSCs向DA能神经元分化。8.Transwell共培养后,Western blot显示,与其各组相比,PF处理过的NSCs+MG共培养的DA能神经元分化标志基因及蛋白（DAT,Pitx3,TH）的表达量显着升高。结论:芍药甙（PF）可经过抑制小胶质细胞的过度激活,在抑制炎症相关因子IL-1、IL-6和TNF-α产生的同时,促进其分泌GDNF、BDNF等神经营养因子进而促进共培养的NSCs向多巴胺能神经元分化;其机制与其对mTOR、HIF-1α、p-NF-κB信号通路的抑制有关。PF有望成为PD治疗的潜在药物。
李淼[5]（2021）在《眼针对CI/RI模型大鼠神经营养因子表达的影响》文中研究表明目的:通过观测眼针疗法对脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia/reperfusion injury,CI/RI）模型大鼠脑内脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）、神经生长因子（nerve growth factor,NGF）、胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF）、碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）等神经营养因子表达水平的影响,探讨眼针改善缺血性脑卒中的作用机制,并为眼针更广泛地应用于临床提供证据支持。材料与方法:本实验选用72只成年SPF级SD大鼠,雄雌各半。适应性喂养7d后采用随机数字表法将所有动物按照1:3的比例随机分为2组:假手术组18只,造模组54只。造模组大鼠以改良线栓法制备CI/RI模型,假手术组大鼠施以相同手术方式但不做实质性栓塞。模型制备后2组大鼠分别以Zea Longa5分制评分标准判定神经功能缺损情况;各随机抽取1只用TTC染色法判断梗死灶的有无。模型确立后,采用随机数字表法将造模组大鼠分为模型对照组、非经非穴组、眼针治疗组。其中假手术组及模型对照组不做处理,正常饲养至其他组别干预结束;眼针治疗组分别于再灌注3h后、再灌注12h后、再灌注24h后施以眼针斜刺“肝区”、“肾区”、“上焦区”、“下焦区”,平补平泻;非经非穴组于眼针穴区外侧约5mm的位置进行针刺,干预时机与眼针治疗组保持一致。干预结束后,观察各组大鼠一般情况并进行行为学评价及指标测定:以Zea Longa5分制评分法进行行为学检测;采用HE染色法观测大鼠脑组织病理形态学变化;免疫组织化学法检测大鼠缺血半影区BDNF、NGF、GDNF及bFGF表达情况;ELISA法测定大鼠缺血半影区BDNF、NGF、GDNF及bFGF蛋白含量;尼氏染色法观察神经元损伤情况并对阳性神经元进行计数。结果:1.造模后,神经功能缺损评分显示:与假手术组相比,造模组评分显着升高（P<0.01）,差异有统计学意义。2.造模后,TTC染色结果显示:与假手术组相比,造模组脑组织内出现白色团块,提示有梗死灶存在。3.干预后,行为学评分表明:与模型对照组对照相比,眼针治疗组评分显着降低（P<0.01）,非经非穴组无统计学差异（P>0.05）。4.干预后,HE染色结果显示:假手术组未见细胞水肿及变性;模型对照组细胞完整性被破坏,与假手术组形成鲜明对比;非经非穴组与模型对照组观察到的结果相近;眼针治疗组神经细胞轮廓较清晰,较造模后呈恢复趋势。5.干预后,免疫组织化学法结果显示:与假手术组对比,模型对照组缺血半影区BDNF、NGF、GDNF及bFGF的表达水平显着降低（P<0.01）;与模型对照组相比,非经非穴组的BDNF、NGF、GDNF及bFGF表达无明显变化,差异不具备统计学意义（P>0.05）;与模型对照组相比,眼针治疗组BDNF、NGF、GDNF及bFGF的表达水平表达显着升高（P<0.01）。6.干预后,ELISA结果显示:与假手术组对比,模型对照组缺血半影区BDNF、NGF、GDNF及bFGF的含量显着降低（P<0.01）;与模型对照组相比,非经非穴组BDNF、NGF、GDNF及bFGF的含量无明显变化,差异不具备统计学意义（P>0.05）;与模型对照组相比,眼针治疗组的BDNF、NGF、GDNF及bFGF含量显着升高（P<0.01）。7.干预后,尼氏染色结果显示:假手术组着色明显,富含大量的尼氏小体;与假手术组相比,模型对照组尼氏小体数量骤减,神经细胞大量丢失（P<0.01）;非经非穴组与模型对照组相比基本无差异,不具有统计学意义（P>0.05）;与模型对照组相比,眼针治疗组尼氏小体数量回升,阳性神经细胞数明显增多（P<0.01）。结论:1.眼针疗法可有效改善CI/RI模型大鼠肢体功能障碍,并于一定程度上缓解其脑组织损伤。2.眼针干预肝区、肾区、上焦区、下焦区能明显上调CI/RI模型大鼠缺血半影区BDNF、NGF、GDNF、bFGF等神经营养因子的表达水平。3.眼针疗法能有效改善CI/RI模型大鼠缺血半影区神经元功能并增加阳性神经元数目,可能与神经营养因子在为神经元提供营养,促进其增殖的同时,诱导血管新生以减少神经元的继发损伤,影响了神经元转归有关。
肖博[6]（2020）在《橙皮苷对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响及其机制》文中研究表明目的探讨橙皮苷对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞是否具有抗凋亡作用及其作用机制。方法雄性SD大鼠36只,手持检眼镜检查眼前节及眼底无明显异常,随机分成3组,即对照组（C组）12只、糖尿病组（D组）12只、橙皮苷治疗组（H组）12只。D组和H组注射链脲佐菌素（STZ）建立糖尿病大鼠模型,C组注射等剂量0.01mol/L的柠檬酸钠缓冲液。确定糖尿病模型建立成功且血糖稳定后,每日晨起给予H组橙皮苷（50mg/kg）灌胃治疗,C组和D组给予等体积生理盐水灌胃处理,共持续8周。每天观察大鼠的一般状况,包括:毛色、活动度、食欲、饮水量等,每周测量并记录空腹血糖1次。8周后,处死所有动物,迅速取右眼,制备石蜡切片,取左眼置于液氮中。通过HE染色法观察视网膜形态,Tunel法检测凋亡细胞,并计算视网膜神经节细胞的凋亡指数（AI）,免疫组织化学法测caspase-3蛋白表达量,实时荧光定量核酸扩增检测系统（qPCR）检测脑源性神经营养因子（BDNF）及酪氨酸蛋白激酶受体B（TrkB）的相对表达量。结果1血糖:同一时间节点,糖尿病组和治疗组血糖均高于对照组,治疗组血糖较糖尿病组降低,三组比较差异具有统计学意义（P<0.05）,三组大鼠的血糖值与时间因素无关,证实橙皮苷具有降糖作用。2 HE染色:对照组大鼠视网膜各层次分明,细胞排列规则,神经节细胞形态良好。糖尿病组大鼠视网膜组织疏松变薄,可见明显的细胞水肿、核固缩及新月形细胞核,细胞排列紊乱,神经节细胞数目减少明显。治疗组病理改变较糖尿病组轻,可见轻度的细胞水肿,细胞排列相对规整,神经节细胞数量稍减少。证实橙皮苷可减少糖尿病大鼠视网膜的损伤。3 Tunel检测及AI值:三组大鼠视网膜组织可见不同数量的凋亡细胞,计算AI值,糖尿病组AI值高于对照组,治疗组AI值低于糖尿病组,三组比较差异有统计学意义（P<0.05）,证实橙皮苷可抑制RGCs的凋亡。4 caspase-3蛋白表达量:三组均可见caspase-3蛋白表达,测量三组大鼠平均光密度值（AOD）,糖尿病组AOD值高于对照组,治疗组AOD值低于糖尿病组,三组比较差异有统计学意义（P<0.05）,证实橙皮苷可降低caspase-3蛋白的表达。5 BDNFmRNA和TrkBmRNA相对含量:糖尿病组BDNFmRNA含量低于对照组,治疗组BDNFmRNA含量高于糖尿病组,三组比较差异具有统计学意义（P<0.05）,糖尿病组大鼠TrkBmRNA含量低于对照组,治疗组TrkBmRNA含量高于糖尿病组,差异具有统计学意义（P<0.05）,证实橙皮苷可提升BDNF、TrkB的表达。结论1橙皮苷可抑制糖尿病大鼠RGCs的凋亡。2橙皮苷的抗凋亡作用与其降糖作用以及BDNF/TrkB信号通路有关。图8幅;表11个;参134篇。
刘矿嫔[7]（2020）在《IncRNA-Malat1及相关转录因子参与调控背根节卫星胶质细胞转分化的作用及机制研究》文中研究说明[目 的]有研究表明,外周神经系统的背根神经节（Dorsal root ganglion,DRG）中存在神经发生的现象,这种现象与感觉神经元周围一类特殊的胶质细胞-卫星胶质细胞（Satellite glial cells,SGCs）有关。前期研究发现SGCs具有可塑性,具有多向分化潜能,条件具备时可转分化为神经元。通过高通量测序筛选的lncRNA表达谱,通过lncRNA Database功能注释结合GO和KEGG富集分析,初步预测lncRNA-Malatl参与调控SGCs的转分化过程,且与proBDNF负调控信息有关。因此本研究探讨lncRNA-Malatl及相关转录因子在调控背根节内卫星胶质细胞的转分化过程中的作用及可能机制。[方法]通过前期高通量测序分析及Q-PCR验证确定与本研究相关的lncRNA后,本研究继续进行DRG-SGCs的培养,通过从新生小鼠中提取背根神经节组织,并继续培养至原代卫星胶质细胞从组织中迁出,然后将所培养的SGCs分为正常组和Anti-proBDNF干预组（干预剂量4ug/ml）,在这6个时间点（24h、3d、7d、14d、21d、28d）收集SGCs进行如下实验:Q-PCR、Elisa、细胞免疫荧光、体外lncRNA-Malatl过表达及干扰实验。[结果]1.背根神经节卫星胶质细胞（原代）培养成功。2.通过Anti-proBDNF血清对卫星胶质细胞以及大鼠单侧坐骨神经损伤模型进行干预,Q-PCR验证前期相关靶基因并预测相关转录因子,与测序情况一致。3.通过Elisa试剂盒发现SGCs能够自分泌malat1、proBDNF/BDNF及其受体,并在转分化过程中表达水平发生变化,SGCs中malat1的表达可能影响胶质细胞表型变化,在SGCs转分化过程中malat1表达受到内源性anti-proBDNF分泌影响。4.构建转染实验载体,分别为过表达载体与干扰载体进行预实验,预实验说明试剂盒内的提供的慢病毒滴度与剂量可用于作为实验中的最适值。正式转染实验结果与预实验一致。5.免疫荧光结果鉴定,发现过表达及过表达后通过anti-proBDNF的干预,可以在一定程度上逆转malat1对于细胞促凋亡的作用,使细胞数量在一定程度上恢复;而干扰malat1后,低表达的malat1可能与anti-proBDNF协同调控细胞转分化。6.Q-PCR验证结果显示转染实验前后BDNF信号通路相关因子及其受体及转录因子 AKT1、NKX2.2、CTNNB1、FZD6 存在差异表达。[结论]1.经过lncRNA表达谱分析及生物信息学分析筛选出LncRNA-malat1及其相关的转录因子可能与SGC转分化过程有关,并且可能通过BDNF信号通路发挥作用。2.在正常的背根神经节组织和卫星胶质细胞中存在malat1、BDNF/proBDNF及其受体TrkB/p75NTR,它们的表达水平受到内源性抗proBDNF影响。3.敲低/过表达malat1可能通受到proBNDF/P75NTR和BDNF/TrkB信号调控来影响背根节卫星胶质细胞转分化。
曾友根[8]（2020）在《NSC联合OEC移植对SNHL模型大鼠耳蜗细胞凋亡的研究》文中认为目的:本研究通过观察NSCs和OECs联合移植对SNHL模型大鼠耳蜗细胞神经营养因子,凋亡及抗凋亡蛋白因子表达影响,探讨细胞移植对SNHL损伤耳蜗细胞保护作用的部分机制。方法:（1）细胞培养:选取胎鼠作为移植细胞组织来源,对NSCs和OECs培养、形态观察及鉴定。（2）动物造模:采用庆大霉素对大鼠进行SNHL造模,将筛选出符合要求的大鼠随机分为实验组和对照组,每组10只,实验组予NSCs和OECs联合移植,对照组予输注人工外淋巴液代替细胞移植。（3）细胞移植:将荧光标记的NSCs和OECs通过圆窗植入耳蜗内,术后记录各组大鼠体重变化,检测大鼠ABR听力阈值变化和听觉耳动反射阈值,并采集样本检测。（4）耳蜗切片HE染色。（5）耳蜗免疫荧光染色检测移植后NSCs和OECs荧光标记物。（6）TUNEL法检测凋亡细胞阳性细胞数和MOD值。（7）免疫组织化学法检测神经营养因子及凋亡免疫阳性细胞。（8）Western-blot法检测样本BDNF、NT-3和Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达影响。结果:（1）细胞培养鉴定结果:NSCs染色鉴定标记物呈nestin阳性,OECs染色鉴定标记物呈p75NTR阳性,培养获得了纯度较高的细胞。（2）听觉耳动反射检测结果:实验组大鼠耳廓反射阈值改善,耳廓抖动变化增强,对照组改变不明显。（3）ABR阈值变化结果:与对照组比较,实验组在1周后ABR阈值变化不明显（P>0.05）,在2周后实验组ABR阈值变化升高（P<0.05）。（4）耳蜗免疫荧光染色结果:实验组移植后NSCs标记分化的细胞部分能表达神经元细胞标志物Nestin,OECs标记分化的细胞分能表部达OECs标志物p75NTR,对照组耳蜗未发现荧光标记的细胞。（5）HE染色结果:对照组见内、外毛细胞变性坏死,SGCs部分坏死,核萎缩,损伤明显,细胞空泡样变性,密度降低,排列疏松混乱不齐,实验组整体病理损伤减低。（6）TUNEL阳性细胞数检测结果:与对照组比较,实验组TUNEL阳性细胞数明显减少（P<0.05）,细胞凋亡指数占比减少,MOD值减少（P<0.05）。（7）免疫组化检测结果:与对照组比较,实验组BDNF和NT-3阳性细胞数及IOD值明显增多（P<0.05）,同时抗凋亡因子Bcl-2阳性细胞数及IOD值升高,促凋亡因子Bax、Caspase-3阳性细胞数及IOD值减少（P<0.05）。（8）Western-blot检测结果:与对照组比较,实验组耳蜗组织样本中BDNF、NT-3,Bcl-2蛋白表达水平升高,Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论:（1）NSC联合OEC移植对SNHL大鼠耳蜗具有保护作用,能减轻耳蜗细胞的损伤。（2）NSC联合OEC移植可能通过调节神经营养因子的表达水平而参与了耳蜗细胞的保护过程。（3）NSC联合OEC移植可能通过上调抗凋亡蛋白Bcl-2,下调凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达路径而参与了对SNHL耳蜗细胞凋亡的保护机制。
张宇[9]（2020）在《下调LncRNA BDNF-AS表达在布比卡因诱导幼鼠脊髓背根神经节神经毒性中的保护机制研究》文中研究说明目的:观察脑源性神经营养因子-反义长链非编码RNA（LncRNA BDNF-AS）在布比卡因诱导神经毒性损伤幼鼠体外脊髓背根神经节（DRG）中的表达变化,通过研究干预LncRNA BDNF-AS在神经毒性损伤DRG中的表达对神经突生长和细胞凋亡的影响以及与TrKB信号传导通路活化的关系,从而阐述调节LncRNA BDNF-AS表达在神经毒性损伤中神经保护的可能机制,为局部麻醉药物导致的神经毒性损伤提供潜在的治疗靶点。主要方法:1.建立布比卡因诱导的体外培养幼鼠DRG神经毒性损伤模型:将体外DRG神经元细胞使用不同浓度布比卡因处理2 h,Annexin V-FITC/PI双染流式检测凋亡细胞,观察其浓度依赖性毒性反应,确定建模成功;2.qRT-PCR探测LncRNA BDNF-AS在不同浓度与不同时间布比卡因诱导DRG神经毒性损伤中的表达情况,选取5mM布比卡因处理2 h体外DRG神经元作为局麻药神经毒性损伤模型为下一步实验对象;3.体外DRG局麻药神经毒性损伤模型随机分为两组:siRNA-C组使用非特异100nM siRNA-C转染模型24 h;siRNA-BDNF-AS组使用特异性1OOnM siRNA-BDNF-AS 转染模型 24 h。qRT-PCR 探测转染后 LncRNA BDNF-AS 与BDNF表达变化;4.分别使用IHC和TUNEL测定siRNA-C组与siRNA-BDNF-AS组转染神经损伤模型后神经突生长与神经元细胞凋亡情况;5.western blot 技术检测 siRNA-C 组与 siRNA-BDNF-AS 组 TrKB 信号传导通路激活变化情况。结果:1.在布比卡因诱导的幼鼠DRG神经毒性损伤模型中,LncRNABDNF-AS表达呈局麻药时间与浓度依赖性上调（P<0.05）;2.与 siRNA-C 组相比,siRNA-BDNF-AS 组 LncRNA BDNF-AS 表达显着下调（P<0.05）,并且BDNF表达明显上调（P<0.05）;3.与 siRNA-C 组相比,siRNA-BDNF-AS 组下调 LncRNA BDNF-AS 表达后可促进布比卡因所致损伤的DRG神经元神经突起的再生（P<0.05）,并减少DRG神经元细胞的凋亡（P<0.05）;4.与 siRNA-C 组相比,siRNA-BDNF-AS 组下调 LncRNABDNF-AS 表达后TrKB/AKT磷酸化明显增加（P<0.05）。结论:1.在布比卡因诱导DRG神经毒性损伤模型中,LncRNA BDNF-AS表达上调与布比卡因使用浓度和作用时间呈正相关性;2.下调LncRNA BDNF-AS表达对布比卡因诱导的幼鼠DRG神经元的毒性损伤有保护作用;3.下调LncRNA BDNF-AS表达对局部麻醉药物引起的神经毒性的保护作用机制可能与上调BDNF表达和激活TrKB信号传导通路有关。
潘怡[10]（2020）在《GFRα2在胃癌发生发展中的作用及其机制研究》文中研究指明目的:胃癌,作为最常见的恶性肿瘤,2012年全世界死亡病例为72.3万例,新增病例更是达到95万例。东亚区域占到其中的49.2%。因为胃癌难以被早期检测发现,诊治时常常已属中晚期,而且有效的治疗方法不足,所以胃癌依然给人们的生命健康造成严重影响。因而,探究胃癌的发病机理并寻求诊治胃癌潜在的靶点,将为诊断治疗胃癌奠定理论基础和提供重要思路。在本课题的前期研究中,我们应用胃癌蛋白芯片检测胃癌和正常胃粘膜组织中差异表达的蛋白。胃癌蛋白芯片筛选显示胶质细胞源性神经营养因子家族受体α2（GFRα2）在胃癌组织中表达显着降低。GFRα2（Glial cell line-derived neurotrophic factor family receptorα2）是GFRα家族成员,对神经和肾脏的正常发育发挥着重要作用。GFRα2除了对肾脏和神经系统的发育发挥作用外,在其他很多生物学过程中也起着同样重要的作用。GFRα2是第一和第二心脏场心脏祖细胞（CPs）的标记物,已被用于CPs分离,同时它也是早期B细胞的标志物,单细胞PCR分析提示其联合淋巴细胞抗原6家族成员D（Ly6D）和骨髓基质细胞抗原1（BST1）一起来定义连接经典的淋巴前体细胞与CD19+前体细胞的发展轨迹。同时它在脑垂体中有维持内分泌稳态的作用,并且已有报道与神经痛和神经可塑性相关。之前有研究发现GFRα2在胰腺癌组织中过表达,与肿瘤大小及预后不良呈正相关,促进胰腺癌生长,增加化疗耐药性。在急性髓系白血病（AML）细胞中,artemin（ARTN）/GFRα3和ARTN/GFRα2配体/共受体复合物激活ret原癌基因（RET）信号,促进白血病的发生。但相关的通路在结直肠癌中却可抑制肿瘤发展。然而却未见GFRα2与胃癌发生发展有关的研究报道。故本课题旨在探索GFRα2在胃癌发生发展中的作用及其发挥作用的分子机制。方法:我们采用免疫印迹法明确胶质细胞源性神经营养因子家族受体α2（GFRα2）在胃癌细胞株中的表达情况,通过胃癌组织芯片法进一步验证其胃癌中的具体表达情况及核浆定位。分析过表达GFRα2质粒和GFRα2小干扰对胃癌细胞系SGC7901和MGC803细胞增殖的影响。采用免疫印迹法了解neuturin和跨膜蛋白酪氨酸激酶RET在胃癌组织中的表达情况,以推测其涉及在GFRα2表达影响胃癌细胞恶性表型中的分子机制。胃癌细胞株SGC7901和MGC803中转染GFRα2过表达质粒后分析其下游基因的表达变化。结果:研究结果显示胶质细胞源性神经营养因子家族受体α2（GFRα2）在胃癌组织及胃癌细胞株中表达显着降低。胃癌组织芯片检测显示GFRα2癌与癌旁胞浆及胞膜阳性表达有显着差异,癌旁高于癌,p<0.01。GFRα2过表达后胃癌细胞的增殖受到抑制,然而敲低GFRα2后却能使胃癌细胞增殖受到促进。由此我们推测GFRα2在胃癌的发生发展中起抑癌作用。neuturin在胃癌组织中表达降低,在对应的癌旁组织中高表达,以上的差异在统计学上有意义（P<0.05）且其在胃癌中的表达趋势和GFRα2表达趋势相同。转染过表达GFRα2质粒后,相较于对照组,Ret在胃癌细胞株MGC803和SGC7901中的表达明显上调,这些差异在统计学上有意义（P<0.05）。且与GFRα2表达趋势一致。我们推测Neuturin和Ret涉及GFRα2在胃癌中发生分子机制。结论:胶质细胞源性神经营养因子家族受体α2（GFRα2）在胃癌细胞株及胃癌组织中的表达明显降低,由此我们推测GFRα2在胃癌发生发展中起作用,对胃癌的研究具有一定意义。胶质细胞源性神经营养因子家族受体α2（GFRα2）过表达可显着抑制胃癌细胞增殖,敲低GFRα2可显着促进胃癌细胞增殖。GFRα通过抑制胃癌细胞增殖,进而发挥抑癌基因的作用。我们推测neuturin是胶质细胞源性神经营养因子家族受体α2（GFRα2）的上游,Ret是GFRα2的下游。研究结果显示而neuturin在胃癌组织中的表达低,在对应的癌旁组织中高表达,以上差异在统计学上有意义（P<0.05）且表达趋势与GFR2在胃癌中的表达趋势一致。转染GFRα2过表达质粒后,相较于对照组,Ret在胃癌细胞株MGC803和SGC7901中的表达明显上调,上述差异具有统计学意义（P<0.05）。且与GFRα2表达趋势一致。
二、胶质细胞源性神经营养因子（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、胶质细胞源性神经营养因子（论文提纲范文）
（2）通腑逐瘀法指导下抵当汤加减调控AQP4表达治疗大鼠急性脊髓损伤的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 自制脊髓打击器与NYU打击器建立脊髓损伤模型研究 |
| 1.目的 |
| 2.材料和方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 6.不足和展望 |
| 第二部分 抵当汤加减调节AQP4 表达对SCI大鼠脊髓水肿的作用研究 |
| 1.目的 |
| 2.材料 |
| 3.方法 |
| 4.实验结果 |
| 5.讨论 |
| 6.小结 |
| 7.不足与展望 |
| 第三部分 抵当汤加减含药血清对反应性星形胶质细胞的活化、迁移及神经生长相关细胞因子分泌的作用 |
| 1.目的 |
| 2.材料 |
| 3.实验方法 |
| 4.实验结果 |
| 5.讨论 |
| 6.小结 |
| 7.不足和展望 |
| 本研究的创新点 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 附件1 自制简易打击器与NYU打击器 |
| 附件2 脊髓打击损伤模型 |
| 附录3 BBB评分 |
| 附录4 Reuter评分 |
| 附录5 综述 水通道蛋白在急性脊髓损伤中的作用机制 |
| References |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（3）联用神经因子对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能的影响研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 神经因子对重型颅颅脑创伤后神经保护的研究进展 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（4）芍药甙对小胶质细胞的影响及其分子机制以及促进神经干细胞向多巴胺神经元分化的研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 芍药甙在临床中应用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（5）眼针对CI/RI模型大鼠神经营养因子表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 针灸治疗缺血性卒中作用机制研究 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（6）橙皮苷对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响及其机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第1章 实验研究 |
| 1.1 实验动物与材料 |
| 1.1.1 实验动物及其分组 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验设备 |
| 1.2 实验动物与材料 |
| 1.2.1 糖尿病模型制备 |
| 1.2.2 分组及给药 |
| 1.2.3 取材 |
| 1.2.4 HE染色 |
| 1.2.5 Tunel法检测凋亡细胞及计数 |
| 1.2.6 免疫组织化学法测caspase-3 |
| 1.2.7 qPCR法检测BDNF和TrkBmRNA含量 |
| 1.3 统计学分析 |
| 1.4 结果 |
| 1.4.1 实验动物血糖值 |
| 1.4.2 HE染色观察视网膜形态 |
| 1.4.3 各组大鼠视网膜神经细胞凋亡（Tunel法） |
| 1.4.4 各组大鼠视网膜caspase-3表达 |
| 1.4.5 大鼠视网膜中BDNF、TrkBmRNA的相对表达量 |
| 1.5 讨论 |
| 1.5.1 糖尿病视网膜病变神经节细胞凋亡 |
| 1.5.2 视网膜神经节细胞与脑源性神经营养因子 |
| 1.5.3 橙皮苷对血糖的影响 |
| 1.5.4 橙皮苷对BDNF / TrkB信号通路的影响 |
| 1.5.5 橙皮苷对caspase-3蛋白的影响 |
| 1.5.6 橙皮苷对视网膜神经节细胞的影响 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 第2章 综述 神经营养因子在糖尿病视网膜病变中的作用 |
| 2.1 DR早期神经退行性病变 |
| 2.1.1 视网膜神经元凋亡增加 |
| 2.1.2 神经胶质细胞的活化 |
| 2.2 神经营养因子 |
| 2.3 神经营养因子与DR的关系 |
| 2.3.1 神经生长因子 |
| 2.3.2 脑源性神经营养因子 |
| 2.3.3 睫状神经营养因子 |
| 2.3.4 色素上皮衍生因子 |
| 2.3.5 血管内皮生长因子 |
| 2.4 神经营养因子的应用 |
| 2.4.1 直接给药 |
| 2.4.2 细胞包囊技术 |
| 2.4.3 基因治疗 |
| 2.5 小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间研究成果 |
（7）IncRNA-Malat1及相关转录因子参与调控背根节卫星胶质细胞转分化的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 神经生长因子在神经系统转分化中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（8）NSC联合OEC移植对SNHL模型大鼠耳蜗细胞凋亡的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要操作仪器 |
| 2.1.4 主要溶剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 组织来源、细胞提取和培养 |
| 2.2.2 NSCs的传代培养 |
| 2.2.3 OECs培养 |
| 2.2.4 NSCs的鉴定及细胞纯度的计算 |
| 2.2.5 OECs的鉴定及细胞纯度的计算 |
| 2.2.6 细胞活力测定 |
| 2.2.7 细胞冻存 |
| 2.2.8 细胞复苏 |
| 2.3 动物实验及样本检测 |
| 2.3.1 实验动物 |
| 2.3.2 主要试剂 |
| 2.3.3 主要仪器 |
| 2.3.4 主要试剂配制 |
| 2.3.5 庆大霉素耳毒性大鼠模型的建立方法 |
| 2.3.6 实验动物分组及给药 |
| 2.3.7 ABR检测大鼠听力阈值 |
| 2.3.8 听觉耳动反射检测 |
| 2.3.9 制作切片 |
| 2.3.10 切片染色 |
| 2.3.11 耳蜗免疫荧光染色 |
| 2.3.12 TUNEL法(原位切口末端标记法)检测凋亡细胞 |
| 2.3.13 免疫组织化学法检测神经营养因子及凋亡免疫阳性细胞 |
| 2.3.14 Western-blot法检测样本BDNF、NT-3和Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达 |
| 2.4 统计方法 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 细胞的形态观察及鉴定 |
| 3.1.1 NSCs的培养观察及鉴定 |
| 3.1.2 OECs的培养观察和鉴定 |
| 3.2 各组大鼠体重变化结果 |
| 3.3 大鼠听觉耳动反射检测阈值结果 |
| 3.4 各组大鼠ABR阈值变化结果 |
| 3.5 HE染色结果 |
| 3.6 耳蜗免疫荧光染色观察结果 |
| 3.6.1 耳蜗荧光标记NSC结果 |
| 3.6.2 荧光标记OEC观察结果 |
| 3.7 TUNEL法检测凋亡细胞结果 |
| 3.7.1 各组TUNEL阳性细胞数比较 |
| 3.7.2 各组MOD值比较 |
| 3.8 免疫组化检测结果 |
| 3.9 Western-blot检测各组蛋白表达水平结果 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 实验性感音神经性耳聋动物模型的制备与机制探究 |
| 4.2 神经营养因子减轻SNHL内耳神经损伤后相关机制 |
| 4.2.1 BDNF对 SGNs的保护作用机制探究 |
| 4.2.2 NT-3对SGNs的保护作用机制探究 |
| 4.3 细胞移植抑制耳蜗损伤细胞凋亡机制探索 |
| 4.3.1 Caspase结构、功能与促耳蜗细胞凋亡机制探究 |
| 4.3.2 Bcl-2 结构、功能和抗耳蜗细胞凋亡机制探析 |
| 4.3.3 细胞联合移植激活Bcl-2,抑制Caspase、Bax表达路径保护损伤耳蜗细胞探究 |
| 4.4 细胞联合移植上调神经营养因子,抑制细胞凋亡 |
| 4.5 神经性耳聋常见病因概述 |
| 4.6 神经性耳聋治疗方法概述 |
| 4.7 关于NSC和 OEC的取材、培养与鉴定探究 |
| 4.7.1 NSC的组织取材和分离 |
| 4.7.2 NSC的培养和鉴定方法选择 |
| 4.7.3 OECs的组织取材和分离 |
| 4.7.4 OECs的培养与鉴定选择 |
| 第5章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（9）下调LncRNA BDNF-AS表达在布比卡因诱导幼鼠脊髓背根神经节神经毒性中的保护机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 布比卡因对幼鼠脊髓背根神经节神经元诱导的神经毒性损伤 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二部分 调节 LncRNA BDNF-AS表达对布比卡因诱导的神经毒性的保护作用 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三部分 下调LncRNA BDNF-AS通过TrKB信号转导通路对神经毒性损伤产生保护作用 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 缩略词简表 |
| 攻读博士学位期间主要成果及参与课题基金 |
| 致谢 |
（10）GFRα2在胃癌发生发展中的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 全文缩略语中英文对照 |
| 绪论 |
| 第一章 胶质细胞源性神经营养因子家族受体α2(GFRα2)在胃癌中的表达情况 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第二章 胶质细胞源性神经营养因子家族受体α2(GFRα2)对胃癌恶性表型的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第三章 胶质细胞源性神经营养因子家族受体α2(GFRα2)在胃癌发生发展中作用的详细分子机制 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 学术论文和科研成果目录 |
四、胶质细胞源性神经营养因子（论文参考文献）
- [1]人羊膜上皮细胞修复损伤神经的作用及机制[J]. 王康,智晓东,王伟. 中国组织工程研究, 2022(25)
- [2]通腑逐瘀法指导下抵当汤加减调控AQP4表达治疗大鼠急性脊髓损伤的作用机制研究[D]. 吴子健. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [3]联用神经因子对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能的影响研究[D]. 朱业淘. 西南医科大学, 2021(01)
- [4]芍药甙对小胶质细胞的影响及其分子机制以及促进神经干细胞向多巴胺神经元分化的研究[D]. 乔奕胜. 昆明医科大学, 2021
- [5]眼针对CI/RI模型大鼠神经营养因子表达的影响[D]. 李淼. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [6]橙皮苷对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响及其机制[D]. 肖博. 华北理工大学, 2020(02)
- [7]IncRNA-Malat1及相关转录因子参与调控背根节卫星胶质细胞转分化的作用及机制研究[D]. 刘矿嫔. 昆明医科大学, 2020
- [8]NSC联合OEC移植对SNHL模型大鼠耳蜗细胞凋亡的研究[D]. 曾友根. 南昌大学, 2020(08)
- [9]下调LncRNA BDNF-AS表达在布比卡因诱导幼鼠脊髓背根神经节神经毒性中的保护机制研究[D]. 张宇. 南方医科大学, 2020(01)
- [10]GFRα2在胃癌发生发展中的作用及其机制研究[D]. 潘怡. 上海交通大学, 2020(01)