一、基质金属蛋白酶及其抑制剂与乳腺癌的浸润与转移（论文文献综述）
白清丽[1]（2021）在《AKT/mTOR/STAT3信号通路在稽留流产中的作用及机制研究》文中进行了进一步梳理目的:通过检测病例组和对照组胚胎组织中AKT/mTOR/STAT3信号通路相关因子和滋养细胞侵袭能力相关因子MMPs与TIMPs的基因和蛋白表达水平,研究此信号通路与稽留流产的关系及其可能的作用机制。方法:在兰州市妇幼保健院和平凉市静宁县妇幼保健院收集2018年05月至2019年04月期间,确诊的稽留流产患者和同时期进行人工流产终止妊娠的正常早孕者的血清及胚胎组织建立标本库。本研究选取12名稽留流产者为病例组,12名人工流产者为对照组,两组研究者孕周相同、年龄相近,无其他疾病及不良嗜好。对两组胚胎组织进行研究分析:（1）光镜下观察12对研究对象绒毛组织的病理组织学的变化;（2）采用q RT-PCR检测AKT/mTOR/STAT3信号通路相关因子基因的相对表达水平以及滋养细胞侵袭能力相关因子基因的相对表达水平;（3）采用Wes全自动蛋白质表达定量分析系统检测两组绒毛组织中AKT/mTOR/STAT3信号通路中相关因子蛋白的表达水平以及滋养细胞侵袭能力相关因子蛋白的表达水平;（4）采用免疫组织化学法观察p-STAT3在绒毛及蜕膜组织中的分布并进行定量分析。结果:（1）组织病理观察:病例组绒毛组织结构明显紊乱,滋养层明显变薄变浅,绒毛管腔变细、极度狭窄甚至消失,细胞数量明显减少,绒毛间质不清晰。（2）AKT/mTOR/STAT3信号通路相关因子表达:病例组绒毛组织中AKT、mTOR和STAT3 m RNA表达水平与对照组比较均降低（P<0.05）;病例组绒毛组织中p-AKT、mTOR、p-mTOR、STAT3和p-STAT3蛋白表达水平与对照组比较均降低（P<0.05）,p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR和p-STAT3/STAT3比值也均较对照组减小（P<0.05）。（3）p-STAT3定位及定量:在两组绒毛组织中的合体滋养细胞和细胞滋养细胞及蜕膜组织中均有不同程度地p-STAT3的阳性表达,其主要表达于细胞核中;p-STAT3蛋白在病例组的表达低于对照组（P<0.05）。（4）滋养细胞侵袭能力相关因子表达:病例组绒毛组织中MMP2和MMP9 m RNA的表达水平与对照组相比均降低（P<0.05）,TIMP2 m RNA表达水平与对照组相比则升高（P<0.05）;病例组绒毛组织中MMP2和MMP9蛋白表达水平与对照组相比均降低（P<0.05）,TIMP2蛋白表达水平较对照组升高（P<0.05）,MMP2/TIMP2和MMP9/TIMP3比值与对照组比较均减小（P<0.05）。结论:稽留流产绒毛膜组织中AKT/mTOR/STAT3信号通路表达下调,其下游转录因子MMP2/TIMP2和MMP9/TIMP3失衡,可能导致滋养细胞的侵袭能力降低,妊娠早期胚胎植入过浅,滋养细胞功能异常,影响胚胎的正常生长发育。AKT/mTOR/STAT3信号通路表达下调可能是稽留流产发生的重要机制之一。
王丹琳[2]（2020）在《MMP-19在胃腺癌中的表达及与黏附素的相关性》文中研究说明目的探讨基质金属蛋白酶-19（Matrix metalloproteinase-19,MMP-19）在胃腺癌中的表达,分析其临床及预后意义,关注其与上皮型钙黏附素（E-cadherin,E-cad）和神经型钙黏附素（N-cadherin,N-cad）的相关性。方法收集2015年1月-2016年9月在华北理工大学附属医院确诊为胃腺癌并行根治性手术治疗的患者64例作为研究对象,留取肿瘤组织作为观察组,留取距肿物边缘>5cm的非肿瘤性胃黏膜组织（正常胃黏膜组织）作为对照组。采用免疫组化En Vision法检测两组中MMP-19、胃腺癌中E-cad、N-cad、原癌基因人表皮生长因子受体2（Human epidermal growth factor receptor-2,HER-2）的表达,采用Western Blot法检测两组中MMP-19蛋白的半定量表达情况。此外,对胃腺癌中HER-2为1+和2+的病例行荧光原位杂交法（FISH）进行检测。结果免疫组化结果显示MMP-19在胃腺癌组织中表达的阳性率为57.8%,在正常胃黏膜组织中表达阳性率为23.4%,经统计学分析,差别有统计学意义（P=0.001）。MMP-19在不同浸润深度（P=0.001）、有无癌栓（P=0.004）、淋巴结转移分组（P=0.001）中的表达差别有统计学意义;而在不同性别、年龄、分化程度、肿瘤最大径、HER-2表达、癌结节分组的表达中差别无统计学意义（P>0.05）。生存分析显示MMP-19的表达与生存时间有关（P=0.020）。Pearson相关分析显示MMP-19与E-cad具有负相关性（r=-0.59,P=0.021）。MMP-19与N-cad具有正相关性（r=0.62,P=0.013）。Western Blot结果显示观察组中MMP-19的半定量表达明显高于对照组（P=0.016）。结论1 MMP-19在胃腺癌组织中表达升高,参与肿瘤的形成。2 MMP-19在肿瘤不同浸润深度、有无癌栓及是否有淋巴结转移的分组中差异有统计学意义,MMP-19参与肿瘤的进展。3胃腺癌组织中MMP-19与E-cad呈负相关性,与N-cad呈正相关性,以此调节肿瘤细胞的黏附作用。4检测胃腺癌组织中MMP-19的表达可能对判断预后有一定价值。图17幅;表3个;参108篇。
孔晋[3]（2020）在《TIMP-4和MMP-2在胃癌中的表达及其临床意义》文中指出背景:胃癌（Gastric cancer,GC）是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤,是世界第五大常见的癌症,也是全球癌症死亡率的第三主要原因,近年来发病率在不断上升。胃癌已成为威胁人类健康的重要疾病之一,因此,胃癌的及时治疗及预后判断非常重要。目前胃癌预后相对较差,5年生存率低于30%,部分原因是肿瘤细胞的快速侵袭和转移,细胞转移相关基因（MMPs,TIMPs）的表达失调同肿瘤的发生、发展密切相关。细胞外基质（extracellular matrix,ECM）蓄积是恶性肿瘤侵袭和转移进展中的一个重要因素。ECM受蛋白质水解酶（如基质金属蛋白酶（MMPs））及其内源性抑制剂TIMPs的调节。金属蛋白酶组织抑制因子-4（TIMP-4）是一种抑制金属蛋白酶活性的蛋白质,对基质金属蛋白酶的活性有调节作用。金属蛋白酶-2（MMP-2）参与细胞外基质和基底膜Ⅳ型胶原的降解。研究表明TIMP-4和MMP-2的表达与神经胶质瘤预后、分期及疾病进展相关。但是,这两种标志物在胃癌中的表达情况及其与患者预后的关系的研究,国内外尚未见报道。因此本研究应用免疫组织化学法和实时荧光PCR从蛋白和基因水平探讨胃癌中TIMP-4和MMP-2表达情况,并分析两者之间关联性,为研究GC的发生、发展机制提供理论依据。目的:分析金属蛋白酶组织抑制因子-4（TIMP-4）及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在胃癌（Gastric cancer,GC）及癌旁组织中的表达,并探讨其在胃腺癌中的临床意义。方法:采用免疫组织化学法分析75例胃癌组织及42例癌旁组织中TIMP-4蛋白和MMP-2蛋白表达水平;利用实时荧光PCR（RT-q PCR）和蛋白免疫印迹法（Western Blot）对23对手术切除的新鲜胃癌组织及其癌旁组织中TIMP-4和MMP-2的表达水平进行检测;同时采用Pearson相关分析法分析TIMP-4和MMP-2与GC临床病理参数的关系并探讨两者表达之间的相关性;最后从TCGA（The Cancer Genome Atlas）数据库中获取Kaplan-Meier生存分析数据分析胃癌中TIMP-4和MMP-2的表达与患者总生存期的相关性。结果:1.75例GC组织中,TIMP-4蛋白阳性65例,表达率为86.67%,MMP-2蛋白阳性68例,表达率为90.67%。TIMP-4癌旁组织阳性22例,表达率为52.3%,MMP-2癌旁组织阳性23例,表达率为54.7%。TIMP-4及MMP-2在胃癌组织中表达高于癌旁组织且差异具有统计学意义（P<0.05）。2.TIMP-4蛋白在75例GC组织中表达与性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分化程度及分期均无统计学相关性（P>0.05）。MMP-2蛋白在75例GC组织中的表达与淋巴结转移密切相关（P<0.01）,同时与胃癌分期在统计学上存在相关性（P<0.05）;但与性别、年龄、肿瘤大小以及分化程度无显着性差异。TIMP-4蛋白在GC组织中表达与性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分化程度及分期均无统计学相关性（P>0.05）。3.23例新鲜切除GC组织中TIMP-4 m RNA相对表达水平为2.240±0.728,23例新鲜切除癌旁组织中相对表达水平为1.691±0.772,两组比较无差异,差异无统计学意义（t=2.006,P>0.05）。23例新鲜切除GC组织中MMP-2 m RNA相对表达水平为1.718±0.921,23例新鲜切除癌旁组织中相对表达水平为1.110±0.845,胃癌组织中表达高于癌旁组织且差异具有统计学意义（t=2.123,P<0.05）。4.23对新鲜GC组织中TIMP-4蛋白相对表达水平为0.693±0.117,配对癌旁组织中相对表达水平为0.361±0.103,两组比较无差异,差异无统计学意义（t=5.114,P<0.05）。GC组织中MMP-2蛋白相对表达水平为0.682±0.198,癌旁组织中相对表达水平为0.371±0.136,胃癌组织中表达高于癌旁组织且差异具有统计学意义（t=7.198,P<0.05）。5.Pearson相关分析发现在23对新鲜GC组织中TIMP-4蛋白和MMP-2蛋白表达显着正相关（r=0.351,P<0.01）。6.Kaplan-Meier生存分析显示TIMP-4、MMP-2的高表达的胃癌患者预后较差。结论:TIMP-4和MMP-2蛋白均在胃癌组织中高表达,其高表达均提示胃癌患者预后较差,可能共同参与胃癌的发生发展,有望成为预测胃癌转移的潜在生物学标志物。
杨锡彤,秦燕,王光明[4]（2018）在《MMPs和TIMPs与肿瘤关系的研究进展》文中指出肿瘤作为威胁人类生命健康的一类重大疾病已严重影响人们的生活质量和健康状态。近年来肿瘤患者人数呈现增多的趋势,而肿瘤的发展也受环境、饮食习惯和遗传等多种因素的影响。目前肿瘤威胁人类健康主要是由于其转移和侵袭过程未明确,肿瘤的转移和浸润的进展程度能直接影响患者预后状况。肿瘤的转移和浸润过程受到多种机制的影响,其中基质金属蛋白酶（MMPs）家族中的部分成员如MMP-2和MMP-9的异常表达能够导致肿瘤进程的加快,而MMPs的抑制剂基质金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs）在肿瘤的复发和预后中起到重要作用。本文重点介绍MMPs及其抑制剂TIMPs在肿瘤中的异常表达及在肿瘤中的研究进展。
滕晓丹,张明,李志高,郭欣欣,陈琢,王洪斌[5]（2014）在《基质金属蛋白酶及其抑制剂在乳腺癌中的表达》文中研究指明目的:研究基质金属蛋白酶2（Matrix Metalloproteinase-2,MMP-2）,基质金属蛋白酶7（MMP-7）,基质金属蛋白酶9（MMP-9）,膜型基质金属蛋白酶（Membrane Type-1 Matrix Metalloproteinase,MT1-MMP）,金属蛋白酶组织抑制剂1（Tissue Inhibitor of Metalloproteinase,TIMP-1）,金属蛋白酶组织抑制剂2（TIMP-2）在乳腺癌组织中mRNA的表达,及与临床病理变量之间的关联。方法:采用150例乳腺癌患者的组织样本。使用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法来测定肿瘤组织和正常乳腺组织中MMP-2,MMP-7,MMP-9,MT1-MMP,TIMP-1和TIMP-2的mRNA表达。结果:MMP-2,MMP-7,MMP-9,MT1-MMP,TIMP-1和TIMP-2在乳腺癌中的mRNA表达显着高于正常组织。结论:MMP-2,MMP-7,MMP-9,和MTI-MMP的表达增加和临床病理参数之间的关联,可以用来预测乳腺癌的侵害行为。
朱嘉钰[6]（2014）在《基质金属蛋白酶及F10基因在滋养细胞侵入异常相关疾病发病机制中的作用研究》文中研究表明人类妊娠时滋养细胞适度浸润至子宫蜕膜、腺体及血管以建立母胎物质交换,是胎盘、胎儿生长发育乃至妊娠得以顺利进行的关键。近十多年来国内外学者经大量的基础实验及临床观察发现,滋养细胞的侵入与肿瘤细胞的侵润过程相似,但前者具有更严格的时间性与空间性。滋养细胞侵入异常可导致多种疾病,侵入不足可导致子宫螺旋动脉重铸障碍,导致自然流产、子痫前期、胎儿生长受限等病理妊娠的发生。葡萄胎是与滋养层细胞密切相关的另一种妊娠疾病,发病机制尚不清楚,其病理特点为滋养细胞良性增生导致水泡状胎块。如果在增生基础上,进一步侵袭至子宫深肌层及血管,则恶变为侵袭性葡萄胎及绒癌等滋养细胞肿瘤。虽然目前有较多有关子痫前期、胎儿生长受限及葡萄胎发病机制的研究,但无一学说可以解释这一类疾病。我们认为,以上疾病的发病过程均与滋养细胞的侵润状态有关,可统称为“滋养细胞侵入异常相关疾病”。随着对滋养细胞侵入异常相关疾病的病理机制及防治研究的不断深入,有学者发现,蜕膜及胎盘等组织局部的内源性因子均参与到了滋养细胞的侵入过程中,其中基质金属蛋白酶及其抑制剂是影响滋养细胞侵入的重要效应因子。滋养细胞通过表达和分泌这些蛋白酶而获得对细胞外基质的降解能力,进而调控滋养细胞的侵入程度,影响妊娠的发展和结局。目前已有文献报道,在子痫前期、胎儿生长受限、葡萄胎及绒癌等滋养细胞侵入异常相关疾病中个别基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达异常,但究竟是何种因素造成基质金属蛋白酶及其抑制剂等效应因子的变化尚不知晓。F10基因是本课题组在前期研究中采用抑制性消减杂交法,从葡萄胎与正常早孕绒毛的差异cDNA文库中筛选出的一条新基因（Genbank登录号AB196290）。F10基因在滋养细胞肿瘤、卵巢癌、子宫内膜腺癌及其他肿瘤组织中表达增加,且生物信息学分析结果显示,在细胞分裂中期,F10基因定位于细胞核。初步推论F10是一种参与细胞遗传信息调控的转录因子,并且可能通过促进肿瘤细胞的增生进而参与肿瘤细胞侵袭等调控过程。目前该基因在细胞侵袭过程中的作用研究尚处于初步阶段,并且尚无关于F10在滋养细胞中作用及机制的研究报道。鉴于滋养细胞侵入与肿瘤细胞侵袭的相似性,我们推测葡萄胎发病相关基因F10是否可能通过影响基质金属蛋白酶等滋养细胞侵入调节因子的表达并促进滋养细胞的增生,进而调控滋养细胞的节制性侵入。为了验证上述假说,本研究拟通过检测子痫前期及胎儿生长受限两种滋养细胞侵入过浅疾病患者的胎盘组织中基质金属蛋白酶等侵入调节因子及F10基因的表达水平,了解其在胎盘组织中的表达水平是否存在相关性,以及它们与滋养细胞侵入过浅的关系;同时,检测葡萄胎患者绒毛组织中以上因子的表达水平,寻找滋养细胞侵入调节因子、F10基因与滋养细胞增生过度的关系;最后,针对组织中滋养细胞侵入调节因子及F10基因的异常变化,特异性对人类永生化滋养细胞株进行F10基因过表达及沉默处理,建立稳定过表达及沉默的滋养细胞克隆模型,通过观察F10基因对其增殖及凋亡的影响及分析相应信号通路,初步探讨F10基因在滋养细胞侵入调控过程中的作用,以揭示滋养细胞侵入异常相关疾病发病的分子机制。上述研究对于阐明滋养细胞侵入异常相关疾病的发病机制具有重要意义,为未来指导临床治疗提供新的线索。第一章基质金属蛋白酶表达异常与子痫前期及胎儿生长受限相关性的研究目的子痫前期及胎儿生长受限是母胎发病率及病死率均较高的两种产科疾病。目前普遍观点认为,两种疾病均可由胎盘滋养细胞侵入过浅、子宫螺旋动脉重塑障碍进而发生胎盘供血不足、胎盘功能减退导致。为探讨滋养细胞侵入调节因子基质金属蛋白酶及其抑制剂与滋养细胞侵入过浅病理发生机制的关系,我们逐一检测子痫前期、胎儿生长受限患者及正常妊娠的孕晚期胎盘组织中基质金属蛋白酶及其抑制剂的蛋白表达水平,初步探讨以上侵入调节因子在滋养细胞侵入过浅发病中的作用和意义。方法随机选取2012年1月至2013年6月南方医科大学南方医院妇产科住院分娩孕妇64例作为研究对象,其中子痫前期患者24例,胎儿生长受限患者10例,正常孕妇30例,包括社会指征剖宫产患者15例,阴道分娩患者15例,其中正常阴道分娩患者作为对照组。分别采用Western blot及免疫组化法检测四组胎盘组织中的 MMP-2, -8, -9, -11,-19, MT2-MMP,MT3-MMP,MT5-MMP,TIMP-1及TIMP-3的蛋白表达水平。所有数据资料采用均数±标准差（x±s）表示,采用完全随机设计资料的多组样本均数比较的单因素方差分析（One-way ANOVA）,两两比较采用Bonferroni法检验,P<0.05视为有统计学差异。结果1、各组母胎临床资料的比较在子痫前期、胎儿生长受限组的母胎临床资料中,母体年龄、BMI指数、分娩孕周与正常阴道分娩组均无统计学差异（P>0.05）。子痫前期组及胎儿生长受限组中胎盘重量（P<0.001）、胎儿生长受限组胎儿出生体重（P<0.001）均显着低于正常阴道分娩组,差异有统计学意义。正常剖宫产分娩组与正常阴道分娩组相比,以上临床指标均无统计学差异（P>0.05）。2、四组侵袭因子表达水平的比较2.1与正常阴道分娩对照组相比,子痛前期患者胎盘组织中MMP-2、-8、-9、-11蛋白表达水平显着降低（P<0.05）,TIMP-1、-3蛋白表达水平显着升高（P<0.05）,而 MMP-19、MT2-MMP、MT3-MMP、MT5-MMP 无统计学差异（P>0.05）。2.2与正常阴道分娩组比较,胎儿生长受限患者胎盘组织中MMP-2、MMP-8、MMP-9、MMP-11蛋白表达水平显着降低（P<0.05） , TIMP-1,-3蛋白表达水平显着升高（P<0.05） , MMP-19、MT2-MMP、MT3-MMP、MT5-MMP无统计学差异（P>0.05）。2.3 MMP-2, -8, -9, -11, -19, MT2-MMP, MT3-MMP, MT5-MMP,TIMP-1及TIMP-3在正常剖宫产分娩组胎盘组织中的蛋白表达水平,与正常阴道分娩组相比无统计学差异（P>0.05）。结论本研究结果证实,与正常孕妇相比,子痫前期及胎儿生长受限患者的胎盘组织中多种基质金属蛋白酶MMP-2、-8、-9、-11的表达水平异常下调,基质金属蛋白酶抑制剂TIMP-1, -3的表达水平异常上调,可能是子痫前期及胎儿生长受限发病的原因之一。MMP-19, MT2-MMP、MT3-MMP、MT5-MMP的表达水平无显着差异,其可能未参与子痫前期及胎儿生长受限的发病过程或对其影响较小。第二章新基因F10在子痫前期及胎儿生长受限胎盘组织中的表达目的前述研究已证实,子痫前期及胎儿生长受限患者胎盘组织中基质金属蛋白酶及其抑制剂表达异常,提示可能与滋养细胞浅侵入相关,然而是何种原因导致这些侵入效应因子异常表达不得而知。F10基因是本课题组前期获得的一条定位于细胞核且与葡萄胎发病相关的新基因,F10基因在多种肿瘤组织中表达,并在葡萄胎、侵袭性葡萄胎及绒癌中呈阳性表达且强度依次递增,提示可能与滋养细胞的侵袭行为有关。鉴于F10基因可能作为转录因子参与滋养细胞的侵入行为,我们推测F10基因同样可能参与子痫前期及胎儿生长受限的发病。我们通过检测F10在子痫前期及胎儿生长受限患者胎盘中的表达情况,探讨F10基因、滋养细胞侵入因子与子痫前期及胎儿生长受限发病的关系。方法子痫前期、胎儿生长受限、正常剖宫产分娩及正常阴道分娩者的胎盘标本来源及分组同第一章,均随机取自南方医科大学南方医院妇产科住院分娩孕妇。分别采用Western blot及免疫组化法检测四组胎盘组织中F10蛋白的表达水平。所有数据资料采用均数±标准差（x±s）表示,采用完全随机设计资料的多组样本均数比较的单因素方差分析（One-wayANOVA）,两两比较采用Bonferroni法检验。P<0.05视为有统计学差异。结果1、子痫前期患者胎盘组织F10蛋白表达降低我们分别采用Western blot及免疫组化染色法检测了子痫前期、胎儿生长受限、正常剖宫产分娩患者胎盘组织中F10蛋白的表达水平。子痫前期胎盘组织中F10蛋白条带明显弱于对照组标本。半定量分析结果显示,与正常阴道分娩组相比,子痫前期组F10蛋白表达水平降低（P=0.001）。免疫组化法检测的半定量结果显示,与正常阴道分娩组比较,子痫前期组F10表达水平显着降低（P=0.001）。2、胎儿生长受限患者胎盘组织中F10蛋白表达降低实验结果显示F10蛋白表达水平在胎儿生长受限组中显着低于对照组,差异有统计学意义（P=0.001）。免疫组化的半定量结果与Western blot结果吻合,胎儿生长受限患者胎盘组织中F10蛋白表达量显着低于对照组（P=0.002）。3、正常剖宫产分娩及正常阴道分娩患者胎盘组织中的F10蛋白表达水平无显着差异F10蛋白在正常剖宫产分娩组胎盘组织中的表达水平与正常阴道分娩组无统计学差异（P>0.05）。结论我们的实验结果显示,子痫前期与胎儿生长受限患者胎盘组织中F10异常下调,提示F10参与了子痫前期与胎儿生长受限的病理生理过程,可能是滋养细胞侵入相关的调控因子。此外,F10基因在子痫前期及胎儿生长受限患者胎盘中与MMP-2、-8、-9、-11蛋白表达水平同时下调,而基质金属蛋白酶抑制剂TIMP-1、TIMP-3的表达上调,三者的异常表达存在一定相关性,说明F10基因可能通过调控下游因子基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达进而影响滋养细胞的侵入行为。第三章基质金属蛋白酶与F10基因在葡萄胎组织中的表达及其可能参与滋养细胞侵袭调节的机制目的葡萄胎是另外一种与滋养细胞密切相关一种良性疾病,具体病因不明,其主要病理表现为滋养细胞增生旺盛,易侵入子宫壁血窦,可恶变为侵袭性葡萄胎及绒癌。葡萄胎发病与恶性转化机制至今不明。前述研究发现F10可能通过调控基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达进而参与滋养细胞侵入过浅的两种代表性疾病-子痫前期及胎儿生长受限的发病。作为葡萄胎发病相关基因F10,是否通过调控基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达进而影响滋养细胞侵袭行为?我们通过检测葡萄胎组织中F10基因、基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达水平,进一步探讨F10基因与葡萄胎发病的相关性及其可能的机制。方法随机选取2012年1月至2013年12月南方医科大学南方医院妇产科住院及门诊清宫的孕妇12例作为研究对象,其中葡萄胎患者6例作为实验组,正常早孕者6例作为正常对照组。分别采用Western blot及免疫组化法检测两组绒毛组织中的 MMP-2, -8, -9, -11,-19, MT2-MMP,MT3-MMP,MT5-MMP,TIMP-1及TIMP-3的蛋白表达水平。所有数据资料采用均数±标准差（x±s）表示,采用完全随机设计资料的两组样本均数比较的t检验。P<0.05视为有统计学差异。结果1、两组患者临床资料比较葡萄胎患者与正常早孕者绒毛相比较,母体年龄与孕周均无统计学差异（P>0.05）。2、葡萄胎绒毛组织中MMP-2、-8、-9、-11蛋白表达水平显着升高,TIMP-1、-3蛋白表达水平降低Western blot结果显示,葡萄胎绒毛组织中MMP-2 （P<0.001）、-8（P=0.002）、-9 （P<0.001）、-11 （P<0.001）蛋白含量高于正常早孕组,差异有统计学意义,而MMP-19、MT2-MMP、MT3-MMP、MT5-MMP无显着变化（P>0.05）。葡萄胎患者绒毛组织中的TIMP-1 （P=0.003）、-3 （P<0.001）蛋白表达水平均低于正常早孕组。免疫组化染色结果显示,葡萄胎绒毛组织中MMP-2 （P=0.004）、-8（P=0.004）、-9 （P=0.001）、-11 （P=0.003）表达显着高于正常早孕组;MMP-19、MT2-MMP、MT3-MMP及MT5-MMP的表达没有显着差异（P>0.05）。葡萄胎患者绒毛组织中的TIMP-1 （P=0.004）、-3 （P<0.001）蛋白表达水平均低于正常早孕组。3、葡萄胎绒毛组织中F10蛋白表达水平显着升高我们进一步检测了葡萄胎绒毛组织中F10蛋白的表达水平。Western blot结果显示,在葡萄胎患者绒毛组织中,F10蛋白表达水平显着高于正常早孕组（P<0.001）。免疫组化半定量结果显示,与正常早孕组绒毛组织相比,葡萄胎患者绒毛组织中的F10蛋白表达水平上调（P=0.004）。结论根据本实验结果显示,葡萄胎患者绒毛组织中的F10与基质金属蛋白酶MMP-2、-8、-9、-11蛋白的表达同时异常上调,而基质金属蛋白酶抑制剂TIMP-1、-3蛋白表达降低,说明F10基因及侵袭调节因子表达异常是葡萄胎的发病因素之一,F10基因、基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达异常在滋养细胞侵入行为上具有一定相关性,再次证实F10基因可能通过影响基质金属蛋白酶及其抑制剂下游因子的表达进而参与对滋养细胞侵入行为的调控。第四章F10基因参与滋养细胞增殖调节的机制研究目的如前所述,我们已证实滋养细胞侵入异常相关疾病患者的胎盘或绒毛组织中F10、基质金属蛋白酶及其抑制剂表达异常,且三者存在一定相关性,提示上游基因F10可能通过上调基质金属蛋白酶及下调基质金属蛋白酶抑制剂的表达而提高滋养细胞侵润能力。作为滋养细胞侵入子宫基质的前提之一,妊娠早期滋养细胞的增殖程度是影响其浸润深度的另外一个重要因素。那么,F10基因是否也可以通过影响其增殖及凋亡而改变滋养细胞的浸润能力。本实验拟以F10基因过表达与沉默的单克隆滋养细胞株为体外模型,研究其对细胞增殖及凋亡的影响及相关的信号通路。方法针对F10基因分别设计并构建F10基因稳定过表达及沉默的HTR8/Svneo单克隆细胞,而未处理的HTR8/SVneo细胞作为正常对照组。经过体外培养后,分别采用MTT法绘制三组细胞的生长曲线、免疫荧光法比较细胞增殖标记物PCNA及CyclinE蛋白的表达水平、流式细胞术检测Annexin V/PI及Western blot检测凋亡分子Caspase-3 了解早期凋亡差异、Western blot检测细胞增殖相关信号通路蛋白MEK、ERK、PI3K及STAT3表达差异情况。所有数据资料采用均数±标准差（x±s）表示,MTT结果采用析因方差分析法,其他多组间比较采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）,两两比较采用Bonferroni法检验。P<0.05视为有统计学差异。结果1、成功建立F10基因稳定过表达及沉默的单克隆滋养细胞模型对F10基因过表达、沉默及正常的HTR8/SVneo三组细胞行RT-PCR验证,结果提示F10过表达组、正常对照组及F10沉默组的CT值逐渐降低,且差异有统计学意义（P<0.001）。行Western blot验证,结果提示F10蛋白条带灰度值在过表达组强度最高,其次分别为正常对照组及F10沉默组,差异均有统计学意义（P<0.001）。2、F10基因促进滋养细胞增殖2.1 MTT结果显示,每组细胞随时间的延长,其增殖差异具有显着性,除第一天外,其余时间点过表达组细胞较正常组及沉默组细胞生长增快,其差异有统计学意义（P<0.001）。2.2我们分别使用PCNA及CyclinE对三组细胞进行荧光染色。与正常对照组相比,经F10基因过表达处理后,细胞中PCNA （P<0.001）及CyclinE（P<0.001）荧光强度高,蛋白表达量增多,差异均具有统计学意义,而F10基因沉默组与正常对照组相比无显着差异（P>0.05）。3、F10基因抑制细胞凋亡3.1采用流式细胞术检测三组细胞的早期凋亡比例。结果显示,F10过表达组早期凋亡细胞比例明显低于正常细胞组,差异有统计学意义（P<0.001）, F10沉默组与正常组相比无统计学差异（P>0.05）。3.2在Western blot结果中,F10过表达组Caspase-3条带细且强度低,半定量结果显示,与对照组相比,过表达组Caspase-3蛋白表达显着下调（P<0.001）。F10基因沉默组Caspase-3的表达水平与正常组相比无显着差异（P>0.05）。4、F10基因对增殖相关信号通路蛋白表达的影响分别检测了增殖相关信号通路中部分信号蛋白在三组细胞中的表达水平,了解F10基因促进滋养细胞增殖的分子机制。实验结果显示,在F10基因过表达组中,磷酸化MEK1/2 （P<0.001）及ERK1/2 （P<0.001）蛋白表达水平显着高于正常对照组,而总蛋白含量无显着差异（P>0.05）,而F10过表达组中磷酸化及总蛋白的PI3K及STAT3均无显着差异（P>0.05）。此外,我们还检测了 F10基因沉默组中以上信号蛋白磷酸化形式及总蛋白的含量,但与正常组相比无统计学差异（P>0.05）。结论以F10基因过表达及沉默的HTR8/SVneo细胞克隆为模型,探讨F10基因对滋养细胞增殖的影响及其分子机制。实验结果显示,F10基因过表达的滋养细胞生长速度增快、细胞增殖标记物表达增多、早期凋亡比例减少,提示F10基因有促进滋养细胞增殖、抗凋亡的作用。过表达细胞中MEK1/2及ERK1/2信号蛋白异常上调,提示F10基因可通过激活MEK/ERK信号通路,调控滋养细胞的增殖及凋亡。全文小结1、与正常胎盘相比,子痫前期及胎儿生长受限患者胎盘组织中基质金属蛋白酶MMP-2,MMP-8,MMP-9,MMP-11的表达水平异常下调,其抑制剂TIMP-1,TIMP-3表达上调,提示基质金属蛋白酶及其抑制剂表达异常可能是滋养细胞浅侵入的发病机制之一。2、在MMPs蛋白表达下调的子痫前期及胎儿生长受限的胎盘组织中F10基因的蛋白表达水平同时出现下调,提示F10可能作为转录因子对基质金属蛋白酶及其抑制剂等下游因子进行转录调控进而参与调控滋养细胞的侵入行为。3、F10基因在葡萄胎绒毛组织中与基质金属蛋白酶的表达水平同时异常上调,进一步验证F10基因可能是基质金属蛋白酶及其抑制剂的上游因子,其通过影响下游因子基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达水平,进而调控滋养细胞过度侵入子宫内膜的行为。4、F10过表达的滋养细胞增殖水平增强,凋亡比例减少,结合前述研究,提示F10基因不仅可通过改变基质金属蛋白酶等侵入调节因子的表达水平,还可通过MEK/ERK通路信号影响滋养细胞的增殖和凋亡来调控滋养细胞的侵润能力。
肖丽,姜达[7]（2012）在《基质金属蛋白酶-2与乳腺癌的研究进展》文中进行了进一步梳理乳腺癌为女性最常见的恶性肿瘤之一。肿瘤细胞的侵袭和转移是影响患者预后十分重要因素。近几年的研究表明,基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）在肿瘤的侵袭和转移中起着极其重要的作用。
李卓玉[8]（2012）在《蛋白酶抑制剂在肿瘤治疗中的作用研究》文中认为蛋白酶及其抑制剂是非常重要的信号分子,涉及多个关键的人体生理代谢途径,在体内受到严格的调控.蛋白酶抑制剂活性的紊乱可导致多种疾病,诸如心血管和炎症疾病、癌症和神经系统障碍等.已知蛋白酶在肿瘤细胞侵袭和转移过程中扮演着重要的角色.细胞外基质和基底膜重塑是癌细胞侵袭转移过程中的关键环节,这个过程需多个蛋白水解酶的表达和激活.蛋白酶抑制剂的应用在一定程度上可减少由蛋白酶水解引起的肿瘤细胞的侵袭和转移,且它的抑制作用具有不同程度的特异性,可以减缓肿瘤恶性发展的进程.文章对蛋白酶及其抑制剂的靶向治疗药物及临床应用研究进展进行了综述.
王素梅[9]（2008）在《组织蛋白酶及其组织抑制剂与卵巢癌浸润转移关系的研究》文中研究表明卵巢恶性肿瘤是最常见的女性恶性肿瘤之一,5年存活率低,侵袭和转移是卵巢恶性肿瘤重要的生物学特征,是引起卵巢恶性肿瘤患者死亡的主要原因。组织蛋白酶通过降解细胞外基质（ECM）,从而在肿瘤的侵袭和转移中起关键性的作用。组织蛋白酶抑制剂可抑制组织蛋白酶的活性,组织蛋白酶及其抑制剂的平衡失调可促进肿瘤的侵袭和转移。本研究的目的是探讨组织蛋白酶及其抑制剂在卵巢恶性肿瘤中的表达及与卵巢恶性肿瘤侵袭转移的关系,探讨血清中组织蛋白酶L（CTSL）及其组织抑制剂（CC）对卵巢恶性肿瘤的诊断意义,并通过体外实验进一步探讨CTSL与卵巢恶性肿瘤侵袭转移的关系,从而寻找卵巢恶性肿瘤基因治疗的方法。组织蛋白酶及其组织抑制剂在卵巢组织中的表达及临床价值目的:探讨组织蛋白酶及其组织抑制剂在卵巢组织中的表达及临床价值。方法:应用RT-PCR方法检测47例卵巢恶性肿瘤患者,20例卵巢良性肿瘤患者,21例正常卵巢组织中CTSB、CTSL、CTSD、CC的mRNA表达,进行阳性率和半定量的比较,并分析其与卵巢恶性肿瘤临床病理的关系。结果:CTSB、CTSL、CC在卵巢恶性肿瘤组织中的半定量明显高于卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织（p＜0.05）;CTSD在三组之间的表达无统计学意义（p＞0.05）;CTSB的表达与腹水量和组织学类型有关（p＜0.05）;CTSL的表达与临床分期、病理分级、淋巴结转移有关（p＜0.05）;CC的表达与病理分级、肝转移和大网膜转移有关（p＜0.05）;CTSD的表达与肝转移和腹水量的多少有关（p＜0.05）;单因素生存分析CTSL阳性率与患者的预后相关（p＜0.05）,Cox比例风险回归模型分析CTSL阳性率是卵巢恶性肿瘤的独立预后因素。结论:卵巢恶性肿瘤中CTSB、CTSL、CC表达增高,并与卵巢恶性肿瘤转移有关,有可能成为卵巢恶性肿瘤预测转移和预后的指标。血清CTSL及CC含量测定在卵巢恶性肿瘤中的临床价值目的:探讨CTSL及CC在卵巢恶性肿瘤患者血清中的含量及其临床意义。方法:采用ELISA方法检测64例卵巢恶性肿瘤、23例卵巢良性肿瘤及20例正常对照血清中CTSL及CC的含量,并对其中17例初诊卵巢恶性肿瘤手术患者进行术前、术后血清CTSL和CC含量的动态观察,将结果与临床资料进行统计学分析,并进行单因素生存分析及Cox比例风险回归模型分析。结果:卵巢恶性肿瘤患者血清中CTSL及CC的含量显着高于良性组及正常对照组,差异有统计学意义（p＜0.05）;同一患者术前、术后血清CTSL的含量差异有统计学意义（p＜0.05）;复发患者的血清中CTSL及CC含量高于未复发患者（p＜0.05）;在卵巢恶性肿瘤患者术前血清中,CTSL的含量与肿瘤的临床分期、病理分级、淋巴结转移及残余灶的大小有关（p＜0.05）;CC的含量与淋巴结转移有关（p＜0.05）;血清CTSL、CC与卵巢恶性肿瘤的侵袭转移有关。血清CTSL对卵巢恶性肿瘤诊断的敏感性为72.7%,特异性为76.7%,阳性预测值为70.58%和阴性预测值为76.7%,准确率75.0%。单因素生存分析CTSL的含量与患者的预后相关（p＜0.05）,Cox比例风险回归模型分析显示残余灶大小是卵巢恶性肿瘤的独立预后因素。结论:血清CTSL含量在卵巢恶性肿瘤中异常升高,血清CTSL水平有可能作为诊断卵巢恶性肿瘤,判断有无复发及转移的生物学指标。CTSL基因真核表达质粒的构建与鉴定目的:构建CTSL基因的真核表达质粒并进行表达鉴定。方法:采用RT-PCR技术从人卵巢恶性肿瘤组织总RNA中逆转录CTSL基因的ORF全长,克隆到PMD18-T载体上;亚克隆至pcDNA3.1质粒,重组阳性克隆进行酶切及测序鉴定,重组质粒瞬时转染HO8910细胞,RT-PCR和Western-blot检测CTSL基因mRNA和蛋白表达。结果:RT-PCR扩增CTSL ORF全长,成功克隆入PMD18-T载体,亚克隆至pcDNA3.1质粒,重组阳性克隆经双酶切及测序鉴定证实CTSL基因已正向插入pcDNA3.1质粒。RT-PCR和Western-blot结果证实CTSL基因能够在HO8910细胞中正确表达。结论:成功构建了CTSL基因的真核表达质粒,为下一步探讨CTSL基因在卵巢癌细胞中的作用提供了实验基础。CTSL基因介导的卵巢上皮癌细胞系侵袭转移的体外实验研究目的:通过体外实验研究CTSL基因与卵巢恶性肿瘤侵袭转移的关系。方法:CTSL基因的真核表达质粒转染卵巢癌细胞HO8910,G418筛选,获得稳定转染细胞克隆,采用RT-PCR和Western-blot技术证实CTSL基因转染成功。通过测定细胞生长曲线、克隆形成实验、细胞生长周期、细胞侵袭实验、细胞迁移实验和细胞黏附实验等了解CTSL基因转染后对卵巢癌细胞生物学行为的影响。结果:通过筛选建立了稳定转染细胞系HO8910-CTSL和HO8910-pcDNA3.1。细胞生物学实验显示:CTSL基因可促进卵巢癌细胞的侵袭转移,但是对卵巢癌细胞的增殖、细胞周期和黏附性影响不大。结论:体外实验进一步证明CTSL基因与卵巢恶性肿瘤的侵袭转移有关。CTSL基因siRNA真核表达载体的构建与鉴定目的:构建CTSL基因的siRNA真核表达载体并鉴定。方法:根据GenBank数据库提供的CTSL基因核苷酸序列,设计并化学合成4对双链小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）,瞬时转染卵巢癌细胞系A2780细胞,通过RT-PCR检测其对CTSL基因的沉默效果,从中筛选一对沉默效果最好的siRNA序列。并根据psilencer4.1载体插入片段设计要求,设计带有BamH1、HindⅢ粘性末端且能表达shRNA的寡核苷酸碱基对序列,退火后与psilencer4.1-CMV neo载体定向连接,测序进行鉴定,并通过RT-PCR验证其干扰效果。结果:成功构建CTSL的siRNA表达载体psilencer4.1-CMV neo-CTSL,经DNA测序证实与设计完全一致,并通过RT-PCR证明psilencer4.1-CMV neo-CTSL载体可沉默该基因。结论:成功构建了CTSL基因的siRNA真核表达载体,为下一步探讨CTSL基因对肿瘤细胞的作用奠定了基础。RNAi抑制CTSL介导的卵巢上皮癌细胞系侵袭转移的体外实验研究目的:研究RNA干扰CTSL基因对卵巢癌细胞侵袭转移的影响。方法:CTSL基因的siRNA表达载体转染卵巢癌细胞A2780,G418筛选,获得稳定转染细胞克隆,采用RT-PCR和Western-blot技术证实CTSL基因干扰成功。通过测定转染细胞的生长曲线、克隆形成实验、细胞生长周期、细胞侵袭实验、细胞迁移实验和细胞黏附实验等了解CTSL基因干扰对卵巢癌细胞生物学行为的影响。结果:通过筛选建立了稳定转染细胞系A2780-CTSL、A2780-Control、A2780-psilencer,RT-PCR和Western-blot技术证实其能够沉默CTSL基因表达。细胞生物学实验显示:沉默CTSL基因后可以抑制卵巢癌细胞的侵袭转移,但对卵巢癌细胞的增殖、细胞周期和黏附性影响不大。结论:RNA干扰CTSL基因可以抑制卵巢癌细胞的侵袭转移,有可能成为卵巢恶性肿瘤基因治疗的新方法。
张涛[10]（2008）在《高、低转移潜能乳腺癌细胞的差异表达蛋白研究》文中提出目的：探讨利用细胞穿透人工基质膜能力的差异筛选高、低转移潜能乳腺癌细胞的可行性，并分析二者生物学特性差异。方法：利用人乳腺癌细胞系MDA-MB-435s细胞在Transwell小室上连续穿透人工基质膜获得高、低转移潜能细胞株。透射电镜观察所筛选出的不同转移潜能乳腺癌细胞的超微结构差异，MTT法进行细胞生长曲线、倍增时间及粘附率实验，Transwell小室进行细胞侵袭力、血管形成实验。用免疫组化方法测定两株细胞中基质金属蛋白酶2、9和上皮性钙粘素的表达情况。结果：MDA-MB-435s细胞经过在Transwell小室上连续人工基质膜侵袭实验后，获得两株转移潜能不同的乳腺癌细胞株，它们具有差异明显的体外生长速度、侵袭力、粘附力以及诱导人脐静脉血管内皮细胞形成血管的能力。⑴细胞透射电镜形态学观察示：高转移潜能乳腺癌细胞电镜观察显示大部分细胞呈梭形或圆形，细胞核大、常染色质丰富，异染色质少，核仁发达、甚至多个，部分细胞可见核仁靠边，可见核畸形，少数细胞可见核分裂相。胞浆少，细胞器少，有少量的线粒体和大量的游离核糖体，细胞表面可见微绒毛。与高转移潜能乳腺癌细胞超微结构相比较，低转移潜能乳腺癌细胞异染色质稍多，核仁稍少，核分裂相稍少，胞浆中线粒体稍多，游离核糖体稍少。⑵生长曲线、倍增时间实验示：高转移潜能细胞体外生长速度显着快于低转移潜能细胞；细胞倍增时间高转移潜能细胞为34.166±1.405小时，低转移潜能细胞为39.797±2.018（P＜0.05），两者有显着性差异。⑶侵袭实验示：高、低转移潜能细胞穿膜数量分别为61.46±7.08个/视野，25.32±4.87个/视野（P＜0.05）。高转移潜能细胞的侵袭能力显着强于低转移潜能细胞，差异有显着性。⑷细胞粘附实验示：高转移潜能细胞在30min、60min、90min和120min时其粘附率分别为0.1696±0.0034、0.2779±0.0070、0.3913±0.0109和0.5750±0.0202，均强于低转移潜能细胞的0.1109±0.0068、0.1813±0.0144、0.2961±0.0375和0.4134±0.0996（P＜0.05），差异有显着性。⑸血管形成实验示：高转移潜能细胞诱导人脐静脉血管内皮细胞形成血管管腔数为12.44±1.32个/视野，显着高于低转移潜能细胞所致的5.41±0.82个/视野（P＜0.01）；高转移潜能细胞诱导的血管形成的管腔长度为243.54±44.31μm，明显长于低转移潜能乳腺癌细胞的117.47±19.78μm（P＜0.05）。⑹免疫组化实验示：图像分析结果低转移潜能细胞中基质金属蛋白酶-2和-9的平均光密度值分别为0.16±0.02和0.13±0.03；高转移潜能细胞中分别为0.24±0.04和0.23±0.05（P＜0.05）。基质金属蛋白酶-2和-9在高转移潜能细胞组表达水平高于低转移潜能细胞组。低转移潜能细胞中上皮性钙粘素的平均光密度值为0.16±0.04；高转移潜能细胞中为0.11±0.01（P＜0.05）。上皮性钙粘素在高转移潜能细胞组的表达水平低于低转移潜能细胞组，均存在显着性差异。结论：利用细胞穿透人工基底膜能力的差异能够筛选出高、低转移潜能的乳腺癌细胞。来自同一亲本的高、低转移潜能细胞之间的生物学特性差异有显着性。目的：肿瘤转移相关蛋白在肿瘤细胞转移过程中具有重要作用，本研究拟在建立高、低转移潜能乳腺癌细胞株MDA-MB-435s的基础上，筛选乳腺癌转移相关蛋白。方法：应用双向凝胶电泳分别分离高、低转移潜能乳腺癌细胞的蛋白质，用银染法对电泳后的凝胶染色；ImageMaster2D V2002.1图像分析系统对胶图进行分析，寻找二倍以上的差异表达蛋白；然后取差异显着的蛋白质点进行酶解，应用基质辅助激光解吸附电离质谱进行分析；再将差异显着的蛋白质点质谱数据输入Mascot数据库查询。结果：在对所分离的两株细胞的蛋白质应用双向凝胶电泳技术和图像分析系统进行比较分析后，确认36个有差异表达的蛋白质斑点。其中，高转移潜能细胞株中有11个蛋白质点的相对含量高于低转移潜能细胞株；低转移潜能细胞株中有25个蛋白质点的相对含量高于高转移潜能细胞株。质谱分析结果示，在对20个差异显着的蛋白质点分别做基质辅助激光解吸附电离质谱后，成功鉴定了20个差异表达蛋白。对其中CDK6、STAT1、PGAM1、PLD5、RAB7B、GSDM1、BRCA1等差异表达蛋白的生物学意义进行了详细的讨论和评估。结论：由乳腺癌MDA-MB-435s细胞所分离高、低转移潜能细胞中存在有显着差异表达的蛋白质。目的：对双向电泳所分离的差异显着的蛋白质斑点，经质谱分析获得的部分候选蛋白质作鉴定。方法：利用RT-PCR法检测3个候选蛋白质ANX A1、HSP70和MYLK2在高、低转移潜能细胞中mRNA的表达水平，应用Western-blot法检测3个候选蛋白质ANX A1、HSP70和MYLK2的蛋白表达情况。结果：3个候选蛋白质ANX A1、HSP70和MYLK2在乳腺癌MDA-MB-435s细胞所分离高、低转移潜能细胞中的mRNA和蛋白质表达水平变化显着，且有统计学意义的差异。其中，⑴高转移潜能细胞株中Annexin A1蛋白质表达水平低于低转移潜能细胞株，其平均光密度值分别为0.13±0.02和0.42±0.06（P＜0.05）；高转移潜能细胞株中Annexin A1mRNA表达水平低于低转移潜能细胞株,其平均光密度值分别为0.12±0.03和0.31±0.06（P＜0.05）。⑵高转移潜能细胞株中HSP70蛋白质表达水平高于低转移潜能细胞株，其平均光密度值分别为0.62±0.10和0.21±0.04（P＜0.05）；高转移潜能细胞株中HSP70mRNA表达水平高于低转移潜能细胞株，其平均光密度值分别为0.47±0.06和0.27±0.03（P＜0.05）。⑶高转移潜能细胞株中MYLK2蛋白质表达水平高于低转移潜能细胞株，其平均光密度值分别为0.54±0.08和0.18±0.03（P＜0.05）；高转移潜能细胞株中MYLK2mRNA表达水平也高于低转移潜能细胞株，其平均光密度值分别为0.49±0.07和0.25±0.04（P＜0.05）。结论：乳腺癌MDA-MB-435s细胞所分离高、低转移潜能细胞中存在与乳腺癌转移相关的蛋白质。ANXA1、HSP70以及MYLK2与乳腺癌转移相关，其蛋白表达水平与mRNA转录有关。
二、基质金属蛋白酶及其抑制剂与乳腺癌的浸润与转移（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、基质金属蛋白酶及其抑制剂与乳腺癌的浸润与转移（论文提纲范文）
（1）AKT/mTOR/STAT3信号通路在稽留流产中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 稽留流产概述 |
| 1.2 滋养细胞侵袭能力在胚胎发育中的作用 |
| 1.3 MMPs和 TIMPs在胚胎发育中的作用 |
| 1.4 AKT/m TOR信号通路 |
| 1.5 STAT3 信号通路 |
| 1.6 MMPs和 TIMPs与 AKT/m TOR/STAT3 信号通路的关系 |
| 1.7 研究目的和意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验设计 |
| 2.1.1 研究对象和分组 |
| 2.1.2 技术路线图 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 主要试剂及仪器 |
| 2.2.2 主要溶液配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 绒毛组织HE染色病理切片制备 |
| 2.3.2 qRT-PCR检测步骤 |
| 2.3.3 Wes~(TM)全自动蛋白质表达定量分析系统检测步骤 |
| 2.3.4 免疫组化染色方法 |
| 2.4 统计分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 一般临床资料分析 |
| 3.2 绒毛组织病理形态观察 |
| 3.3 绒毛组织AKT/m TOR信号通路相关因子的基因和蛋白表达水平 |
| 3.3.1 相关基因m RNA表达水平 |
| 3.3.2 相关蛋白表达水平 |
| 3.4 绒毛组织STAT3 信号通路相关因子的基因和蛋白表达水平 |
| 3.4.1 相关基因m RNA表达水平 |
| 3.4.2 相关蛋白表达水平 |
| 3.5 两组胚胎组织中p-STAT3 蛋白的表达定位 |
| 3.5.1 绒毛组织中表达定位 |
| 3.5.2 蜕膜组织中表达定位 |
| 3.6 绒毛组织MMPs、TIMPs基因和蛋白表达水平 |
| 3.6.1 基因m RNA表达水平 |
| 3.6.2 蛋白表达水平 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 绒毛组织结构病理形态改变分析 |
| 4.2 AKT/m TOR信号通路与稽留流产的关系 |
| 4.3 STAT3 信号通路与稽留流产的关系 |
| 4.4 基质金属蛋白酶及其抑制剂与稽留流产的关系 |
| 第五章 结论 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 研究不足与展望 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 在学期间研究成果 |
| 致谢 |
（2）MMP-19在胃腺癌中的表达及与黏附素的相关性（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略表 |
| 引言 |
| 1.1 研究对象与方法 |
| 1.1.1 研究对象 |
| 1.1.2 资料收集 |
| 1.1.3 实验试剂 |
| 1.1.4 实验仪器 |
| 1.1.5 实验室检测方法 |
| 1.1.6 结果判读方法 |
| 1.1.7 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 研究对象的一般特征 |
| 1.2.2 胃腺癌和正常胃黏膜中MMP-19阳性率的比较 |
| 1.2.3 胃腺癌不同临床病理特征中MMP-19阳性率的比较 |
| 1.2.4 胃腺癌中MMP-19与E-cad、MMP-19与N-cad的相关性 |
| 1.2.5 胃腺癌中MMP-19与生存时间的关系 |
| 1.2.6 WesternBlot检测胃腺癌和正常胃黏膜组织中MMP-19 半定量表达的比较 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 MMP-19在胃癌形成中的作用 |
| 1.3.2 MMP-19在不同临床病理特征中表达的意义 |
| 1.3.3 MMP-19与黏附素的关系和意义 |
| 1.3.4 MMP-19与胃腺癌患者生存时间的关系 |
| 1.4 结论 |
| 参考文献 |
| 第2章 综述 MMP-19在肿瘤的研究进展 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 MMP-19的结构 |
| 2.3 MMP-19的功能 |
| 2.3.1 MMP-19与细胞增殖的关系 |
| 2.3.2 MMP-19与细胞黏附的关系 |
| 2.3.3 MMP-19与血管生成的关系 |
| 2.3.4 MMP-19与mi RNA调节通路的关系 |
| 2.3.5 MMP-19与血清相关因子的相关性 |
| 2.4 MMP-19在消化道肿瘤中的研究现状 |
| 2.5 总结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 在学期间研究成果 |
（3）TIMP-4和MMP-2在胃癌中的表达及其临床意义（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 临床资料 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 实验仪器 |
| 2.4 免疫组织化学 |
| 2.4.1 试剂的配置 |
| 2.4.2 组织切片、烤片、脱蜡和水化 |
| 2.4.3 通透及抗原修复 |
| 2.4.4 免疫组化油性笔圈出组织并消除非特异性染色 |
| 2.4.5 孵育一抗、二抗 |
| 2.4.6 DAB显色、苏木素复染、脱水透明及封片镜检 |
| 2.4.7 结果判断 |
| 2.5 实时荧光定量PCR(RT-qPCR) |
| 2.5.1 实验准备 |
| 2.5.2 RNA的提取 |
| 2.5.3 RNA逆转录 |
| 2.5.4 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)反应 |
| 2.6 蛋白质免疫印迹(Western blot,WB) |
| 2.6.1 试剂配制 |
| 2.6.2 组织蛋白提取和浓度测定 |
| 2.6.3 配胶与灌胶 |
| 2.6.4 上样 |
| 2.6.5 转膜与封闭 |
| 2.6.6 一抗、二抗孵育 |
| 2.6.7 显影及条带处理 |
| 2.7 统计学分析 |
| 2.8 Kaplan-Meier生存分析和临床表达分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 TIMP-4与MMP-2 蛋白在GC组织以及癌旁组织中的表达 |
| 3.1.1 TIMP-4 蛋白在GC组织以及癌旁组织中的表达 |
| 3.1.2 MMP-2蛋白在GC组织以及癌旁组织中的表达 |
| 3.2 TIMP-4及MMP-2 mRNA在新鲜胃癌组织及癌旁组织中的表达 |
| 3.2.1 TIMP-4 mRNA在新鲜胃癌组织及癌旁组织中的表达 |
| 3.2.2 MMP-2 mRNA在新鲜胃癌组织及癌旁组织中的表达 |
| 3.3 TIMP-4及MMP-2 蛋白在新鲜胃癌组织及癌旁组织中的表达 |
| 3.4 TIMP-4和MMP-2 蛋白在GC患者中的表达与临床病理参数的关系 |
| 3.5 GC组织中TIMP-4和MMP-2 蛋白表达的相关性分析 |
| 3.6 TIMP-4和MMP-2 Kaplan-Meier生存分析和临床表达分析 |
| 3.6.1 TIMP-4 Kaplan-Meier生存分析和临床表达分析 |
| 3.6.2 MMP-2 Kaplan-Meier生存分析和临床表达分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 基质金属蛋白酶与胃癌关系的研究进展 |
| 参考文献 |
（4）MMPs和TIMPs与肿瘤关系的研究进展（论文提纲范文）
| 1 MMPs及TIMPs的生物学特征 |
| 2 MMPs及TIMPs的生理性表达 |
| 3 MMPs异常表达对肿瘤的影响 |
| 4 TIMPs异常表达在肿瘤中的作用 |
| 5 干预MMPs及TIMPs表达在肿瘤治疗中的潜在价值 |
| 6 展望 |
（5）基质金属蛋白酶及其抑制剂在乳腺癌中的表达（论文提纲范文）
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 RNA的提取及反转录聚合酶链反应 (RT-PCR) |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 临床病理资料 |
| 2.2 MMP-2, MMP-7, MMP-9, MT1-MMP, TIMP-1, TIMP-2m RNA的表达 |
| 2.3 MMP-2, MMP-7, MMP-9, MT1-MMP, TIMP-1和TIMP-2的m RNA的表达与乳腺癌肿瘤的大小关系 |
| 2.4 MMP-2, MMP-7, MMP-9, MT1-MMP, TIMP-1和TIMP-2的m RNA的表达与乳腺癌的淋巴结转移之间的关系 |
| 2.5 MMP-2, MMP-7, MMP-9, MT1-MMP, TIMP-1和TIMP-2的m RNA的表达与乳腺癌组织学类型之间的关系 |
| 3 讨论 |
（6）基质金属蛋白酶及F10基因在滋养细胞侵入异常相关疾病发病机制中的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 基质金属蛋白酶与子痫前期及胎儿生长受限相关性的研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二章 新基因F10在子痫前期及胎儿生长受限胎盘组织中的表达 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 基质金属蛋白酶与F10基因在葡萄胎组织中的表达及其可能参与滋养细胞侵袭的调节机制 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第四章 F10基因参与滋养细胞增殖调节的机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| References |
| 成果 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
| 统计学证明 |
（8）蛋白酶抑制剂在肿瘤治疗中的作用研究（论文提纲范文）
| 1 基质金属蛋白酶及其靶向抑制剂的研究 |
| 2 组织蛋白酶及其抑制剂 |
| 3 纤溶酶原系统及其抑制剂 |
| 4 结论 |
（9）组织蛋白酶及其组织抑制剂与卵巢癌浸润转移关系的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一章 卵巢癌浸润转移与临床研究现况(文献综述) |
| 1. 卵巢癌浸润转移的临床特点 |
| 1.1 局部蔓延 |
| 1.2 腹腔种植 |
| 1.3 淋巴转移 |
| 1.4 血行转移 |
| 2. 卵巢癌浸润转移的主要途径与预后 |
| 2.1 腹腔种植转移 |
| 2.2 腹膜后淋巴结转移 |
| 2.3 血行转移 |
| 2.4 卵巢癌转移的预后 |
| 3. 卵巢癌浸润转移的主要步骤及分子机理 |
| 3.1 卵巢癌浸润转移的主要步骤 |
| 3.2 卵巢癌浸润转移的分子机理 |
| 4. 卵巢癌浸润转移与临床病理的关系 |
| 4.1 与临床分期的关系 |
| 4.2 与组织学类型的关系 |
| 4.3 与病理分级的关系 |
| 5. 卵巢癌浸润转移的诊断现况 |
| 5.1 影像学诊断 |
| 5.2 分子生物学诊断 |
| 6. 卵巢癌浸润转移的治疗现况 |
| 6.1 卵巢癌浸润转移的手术治疗 |
| 6.2 卵巢癌浸润转移的化学治疗 |
| 6.3 卵巢癌浸润转移的生物治疗 |
| 7 组织蛋白酶及抑制物与卵巢癌浸润转移关系研究现况 |
| 7.1 组织蛋白酶及抑制物的结构 |
| 7.2 组织蛋白酶及其抑制剂的生物学特性 |
| 7.3 组织蛋白酶及其抑制剂与肿瘤浸润转移的关系 |
| 7.4 卵巢肿瘤组织中组织蛋白酶及抑制物的表达及其临床意义 |
| 7.5 卵巢肿瘤患者外周组织蛋白酶及抑制物的含量测定及其临床意义 |
| 7.6 蛋白酶及抑制物在卵巢癌浸润转移中的作用机理 |
| 7.7 针对蛋白酶及抑制物的靶向治疗研究 |
| 8. 组织蛋白酶及其抑制剂与卵巢癌研究中存在的问题及本研究的目的 |
| 第二章 组织蛋白酶及其组织抑制剂在卵巢组织中的mRNA表达及其临床意义 |
| 前言 |
| 1. 材料和方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 第三章 血清CTSL及CC含量测定在卵巢恶性肿瘤中的临床价值 |
| 前言 |
| 1. 材料和方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 第四章 CTSL基因真核表达质粒的构建与鉴定 |
| 前言 |
| 1. CTSL基因的克隆及原核表达质粒的构建与鉴定 |
| 1.1 材料和方法 |
| 1.2 结果 |
| 2. CTSL基因的真核表达质粒的构建与鉴定 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.2 结果 |
| 3. 讨论 |
| 第五章 CTSL基因介导的卵巢上皮癌细胞系浸润转移的体外实验研究 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 第六章 CTSL基因RNA干扰真核表达载体的构建 |
| 前言 |
| 1. 材料和方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 第七章 RNAi抑制CTSL介导的卵巢上皮癌细胞系浸润转移的体外实验研究 |
| 前言 |
| 1. 材料和方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 学习期间发表论文 |
（10）高、低转移潜能乳腺癌细胞的差异表达蛋白研究（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 高、低转移潜能乳腺癌细胞亚系的建立与生物学特性的分析 |
| 前言 |
| 实验一 高、低转移潜能乳腺癌细胞亚系的建立 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 实验二 高、低转移潜能乳腺癌形态学比较及细胞生长曲线、倍增时间测定 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 透射电镜结果 |
| 3.2 细胞生长曲线实验 |
| 3.3 细胞倍增时间测定 |
| 实验三 高、低转移潜能乳腺癌细胞侵袭、粘附率实验 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 实验四 血管形成实验 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 实验五 基质金属蛋白酶及钙粘素在高低转移潜能乳腺癌细胞中的表达及意义 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第二部分 高低转移潜能乳腺癌细胞株的差异表达蛋白研究 |
| 前言 |
| 实验一 高、低转移潜能乳腺癌细胞株的蛋白质分离 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 实验二 高低转移潜能乳腺癌细胞株的蛋白质质谱分析和数据库查询 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第三部分 高低转移潜能乳腺癌细胞差异表达蛋白鉴定研究 |
| 前言 |
| 实验一 WESTERN-BLOT法检测 ANNEXINA1、HSP70 、MYLK2 在高低转移潜能细胞中的蛋白表达 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 实验二 RT-PCR 法检测 ANNEXINA1、HSP70 、MYLK2 在高低转移潜能细胞中 MRNA 表达量变化 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 全文总结 |
| 文献综述一 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
四、基质金属蛋白酶及其抑制剂与乳腺癌的浸润与转移（论文参考文献）
- [1]AKT/mTOR/STAT3信号通路在稽留流产中的作用及机制研究[D]. 白清丽. 兰州大学, 2021(09)
- [2]MMP-19在胃腺癌中的表达及与黏附素的相关性[D]. 王丹琳. 华北理工大学, 2020(02)
- [3]TIMP-4和MMP-2在胃癌中的表达及其临床意义[D]. 孔晋. 安徽医科大学, 2020(02)
- [4]MMPs和TIMPs与肿瘤关系的研究进展[J]. 杨锡彤,秦燕,王光明. 广东医学, 2018(16)
- [5]基质金属蛋白酶及其抑制剂在乳腺癌中的表达[J]. 滕晓丹,张明,李志高,郭欣欣,陈琢,王洪斌. 现代生物医学进展, 2014(29)
- [6]基质金属蛋白酶及F10基因在滋养细胞侵入异常相关疾病发病机制中的作用研究[D]. 朱嘉钰. 南方医科大学, 2014(01)
- [7]基质金属蛋白酶-2与乳腺癌的研究进展[J]. 肖丽,姜达. 河北医药, 2012(17)
- [8]蛋白酶抑制剂在肿瘤治疗中的作用研究[J]. 李卓玉. 山西大学学报(自然科学版), 2012(02)
- [9]组织蛋白酶及其组织抑制剂与卵巢癌浸润转移关系的研究[D]. 王素梅. 广西医科大学, 2008(10)
- [10]高、低转移潜能乳腺癌细胞的差异表达蛋白研究[D]. 张涛. 重庆医科大学, 2008(12)