一、异质性胞核核糖核蛋白A2/B1与肺癌的早期诊断（论文文献综述）
王丽娜[1]（2021）在《敲低HNRNPDL基因抑制体外肺腺癌细胞的恶性表型》文中提出目的:通过基因芯片技术筛选出经β-榄香烯处理A549,NCI-H1299细胞后的差异基因HNRNPDL,并使用慢病毒将其敲低,明确HNRNPDL对A549、NCI-H1299细胞增殖及凋亡影响。方法:1.前期实验通过使用CCK-8法检测经β-榄香烯处理的肺腺癌细胞系的细胞活力,基于所测量的吸光度,其间接反映了活细胞的数量,反映了药物损伤细胞的能力,反映了药物对细胞的作用。根据药敏结果处理A549细胞后,通过Trizol法提取每组样品的总RNA,然后进行标记,与人类基因表达谱芯片Affymetrix（GEO数据库中大量肺癌样本数据集）杂交,通过分析每组样品的荧光强度与探针杂交的比率来鉴定基因表达水平的变化。以确定β-榄香烯治疗前后肺腺癌细胞中的差异表达基因;再采用高内涵细胞功能学筛选实验（HCS）与细胞计数法（Celigo）筛选出确定的且具有潜在的增殖与抑制功能的基因。2.构建具有敲低HNRNPDL作用的以慢病毒介导的短发夹RNA（sh RNA）。转染A549和NCI-H1299人肺腺癌细胞系,两株细胞全程实验都将分组为病毒敲低组（sh HNRNPDL）和阴性对照组（sh Ctrl）;使用逆转录定量实时聚合酶链反应和Western Blot验证其敲低效率;分别通过CCK-8法、流式细胞术（FCM）,划痕试验研究了HNRNPDL对A549和H1299细胞增殖、凋亡、细胞周期及迁移的影响。结果:1.β-榄香烯作用于人肺腺癌A549及NCI-H1299细胞后经CCK-8检测其IC50分别为375.5μg/ml、299.3μg/ml;而IC30=301.3μg/m L作用于A549细胞后浓度相对稳定;后续实验选择IC30为β-榄香烯作用于人肺腺癌A549及NCIH1299细胞的终浓度;2.筛选了具有显着差异表达的721个基因,包括273个上调和448个下调;采用高内涵细胞功能学筛选实验（HCS）,比较基因敲低对细胞增殖速度的影响,在待选目的基因中初步筛选出增殖抑制表型明显的基因HNRNPDL;细胞计数法（Celigo）筛选出最佳干扰基因sh HNRNPDL-PSC57267并通过RNAi将其验证;3.成功构建HNRNPDL基因RNA干扰序列的慢病毒,转染肺腺癌细胞A549和NCI-H1299,在荧光显微镜下观察其转染效率,并将转染效率为80%的细胞用于后续实验;分别通过Western Blot及PCR验证HNRNPDL的敲低效率;4.CCK-8分析的结果表明,敲低HNRNPDL可抑制A549和H1299细胞的增殖。FCM分析表明,HNRNPDL敲低可促进细胞凋亡并将肺腺癌细胞阻滞在G1期生长。除此之外,划痕试验表明细胞的迁移能力呈降低趋势。结论:β-榄香烯作用于肺腺癌细胞后,经过基因芯片技术筛选出的差异基因HNRNPDL可抑制肺腺癌细胞的增殖并促进细胞凋亡。我们的发现为肺腺癌的发病机理提供了进一步的认识,并为肺腺癌的诊疗提出了新的靶标。
吕昌乐[2]（2021）在《RNA结合蛋白在膀胱癌中的生物学功能及预后价值》文中研究表明目的:膀胱癌（Bladder cancer,BLCA）是一种发病率高、死亡率高的恶性肿瘤,其发病率和患病率的稳步上升使膀胱癌成为世界上最常见的泌尿生殖道癌之一。RNA结合蛋白（RNA-binding Proteins,RBPs）的异常表达在多种恶性肿瘤中均有报道且与肿瘤的发生、发展密切相关。但RNA结合蛋白在膀胱中的作用仍不清楚,因此探索RNA结合蛋白在膀胱癌中的潜在生物学功能并建立临床预测模型是非常有意义的。方法:本研究通过生物信息学分析,从肿瘤基因组图谱（TCGA）数据库下载BLCA的RNA测序数据和临床数据,利用R软件筛选出正常组织和癌组织中差异表达的RNA结合蛋白（DERBPs）。为了识别相关通路并对DERBPs进行功能注释,利用R软件进行GO&KEGG生物富集分析来分析其主要参与的生物学过程,并可视化。后利用互作基因检索工具（STRING）数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）分析,并用Cytoscape 3.7.2软件以及其中的MCODE插件来筛选了关键模块并进行可视化处理。后通过对DERBPs基因进行单因素和多因素Cox回归分析,识别出与生存相关的RBPs,并建立预后模型。为了验证模型的有效性将所有患者的生存数据以1:1随机分为训练组Train和验证组Test,分别计算两组患者的风险评分。并从生存分析、ROC曲线、风险曲线和独立预后分析等方面来验证模型的有效性。然后基于预测模型绘制列线图。并最后利用Human Protein Atlas（HPA）数据库分别在基因的转录和翻译水平再次验证模型的有效性。结果:共筛出385个DERBPs基因,其中上调基因218个和下调基因167个。GO&KEGG生物富集分析后提示,DERBPs主要参与了nc RNA代谢过程、nc RNA加工、核糖核蛋白复合物的生物发生过程、翻译调控、RNA剪接、t RNA代谢过程、核糖体合成、核糖核酸分解过程、m RNA分解、细胞质核糖核蛋白体、m RNA代谢过程的调控、核糖核蛋白颗粒、RNA催化活性等生物进程。STRING数据库中将置信评分设为0.7后得到一个包含311个节点和2020条边的蛋白质互作网络。后利用Cytoscape 3.7.2软件中的MCODE插件筛选了3个PPI网络的关键子网络并进行可视化和功能富集分析。对DERBPs基因进行单因素和多因素Cox回归分析后最终确定了由CLK2、HNRNPH3、CTU1、OAS1、MRPL38、CTIF、DARS2和XPOT等8个DERBPs组成的最佳预测模型。根据该模型进一步的分析表明,患者的风险得分与其预后存在差显着相关性。分析显示8-RBPs预测模型的1年、3年、5年的风险值的ROC曲线下面积（AUC）为0.742、0.713、0.776。之后建立了一个基于8-RBPs预后风险评分模型的列线图,该列线图能够很好的预测BLCA患者1年、3年和5年总体生存率。为了验证模型的有效性在TCGA队列中进行了内部验证,验证组1年、3年、5年风险值的AUC分别为0.720、0.639、0.653,同样验证了该模型的对BLCA的预测价值。最后利用Human Protein Atlas（HPA）数据库分别在转录和翻译水平再次验证了8-RBPs模型的有效性。结论:本研究基于生物信息学方法,通过对TCGA数据库的BLCA分析获得了CLK2、HNRNPH3、CTU1、OAS1、MRPL38、CTIF、DARS2和XPOT等8个RBPs基因组成的最佳预测模型,且多指标验证了8-RBPs基因预后模型对预测BLCA的可靠性并基于8-RBPs基因构建了列线图。该研究将有助于提高对BLCA发病和预后的认识,为进一步探讨BLCA的诊断和治疗提供参考。
李腾达[3]（2021）在《肺泡巨噬细胞Lkb1对其自稳的调控及肿瘤表观遗传学相关研究》文中提出课题一:肺泡巨噬细胞Lkb1对其自稳的调控缺失。过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（peroxisome proliferator-activatedreceptor-γ,PPAR-y）的基因或蛋白表达水平在Cd11cCreLkb1f/f小鼠AM中均降低,其激动剂可部分挽救AM脂质堆积状态。结论:Lkb1在AM胞内糖脂代谢调节过程中起到了重要作用。ROS抑制剂或PPAR-γ激动剂可一定程度挽救Lkb1缺陷AM的比例或脂质堆积状态。第一部分Cd11cCreLkb1f/f条件敲除小鼠的建立及其免疫表型的鉴定目的:明确Lkb1在肺泡巨噬细胞（Alveolar Macrophage,AM）发挥免疫功能过程中的主要作用。方法:我们对小鼠DNA扩增后进行琼脂糖凝胶电泳以鉴定其基因型。对Lkb1f/f和Cd11cCreLkb1ff小鼠进行肺泡灌洗并取肺组织制备单细胞悬液以进行流式分析。用Click-iTTM Plus EdU试剂盒对细胞增殖情况进行检测。利用金黄色葡萄球菌经滴鼻建立肺炎模型。肺部巨噬细胞的去除根据Nano Sciences公司的巨噬细胞去除试剂盒说明书进行。两组独立连续变量之间的比较采用t检验。结果:经杂交我们构建了Cd11cCreLkb1ff条件敲除小鼠,检测结果显示相对于Lkb1ff小鼠,Cd11cCreLkb 1ff小鼠AM绝对数和比例显着降低,细胞凋亡增加（P<0.05）,但其前体巨噬细胞、单核细胞与胚胎巨噬细胞并未发生改变。肺炎模型结果表明相对于Lkb1ff小鼠或去除实验对照组,Cd11cCreLkb1ff小鼠或AM去除组肺部炎症更为严重,感染的病菌更多,中性粒细胞百分比增加,嗜酸性粒细胞百分比降低,差别具有统计学意义（P<0.05）。结论:Lkb1缺陷可致AM数目或比例严重缺失,这种缺失来源于AM自身凋亡或坏死细胞的增多,可使小鼠肺部易受病原体感染及中性/嗜酸性粒细胞比例失衡。第二部分代谢相关检测及Cd11cCreLkb1f/f小鼠AM挽救实验目的:探究Lkb1对AM代谢的影响,挽救Lkb1缺陷AM的缺失或其功能。方法:我们用流式或磁珠分选技术纯化AM。用油红O对细胞脂质进行染色。代谢组学分析基于气相色谱-质谱联用仪或多反应监测技术进行。用Seahorse XF技术对细胞代谢状况进行分析。细胞基因水平检测采用实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）技术。蛋白水平检测采用蛋白印迹法。活性氧水平经检测试剂盒获得。免疫表型相关检测经流式分析得到。配对实验设计采用配对检验,两组独立样本之间的比较采用t检验。结果:相对于Lkb1ff小鼠,Cd11cCreLkb1ff小鼠AM呈脂质堆积。代谢组学分析结果显示Cd11cCreLkb1ff小鼠AM的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide,NAD）等的检测水平相对于Lkb1ff小鼠AM下调,而亚油酸、油酸和β-D-果糖-6-磷酸盐等上调,差别具有统计学意义（P<0.05）。Seahorse XF实验结果显示Cd11cCreLkb1ff小鼠AM糖酵解过程活跃,呼吸能力增强,ATP产生增加。活性氧（reactiveoxygen species,ROS）检测显示Lkb1缺陷的AM其ROS产生增加,用ROS抑制剂可一定程度挽救Cd11cCreLkb1ff小鼠AM 比例的第三部分Lkb1缺陷的肺泡巨噬细胞中重要的信号通路及基因目的:探究Lkb1缺陷对AM重要基因转录水平的影响及相关通路的变化。方法:我们利用流式分选技术分选出AM细胞后进行RNA-seq分析,测序平台为BGISEQ-500。用Cytohubba插件进行关键基因的筛选。热图由R软件获得。结果:差异基因（Cd11cCreLkb1f/f vs Lkb1f/f）主要富集在炎症反应、甘油脂代谢、脂质储存等通路,这些通路中募集到的几乎所有基因在Cd11cCreLkb1f/f小鼠AM中均表达上调。关键基因评分结果表明C-X-C基序趋化因子受体2（C-X-C motif chemokine receptor 2,CXCR2）,Toll 样受体 2（Toll like receptor 2,TLR2）,丝裂原激活的蛋白激酶 3（mitogen-activatedproteinkinase3,MAPK3）,CD40,趋化因子（C-C 基序）受体 7（chemokine（C-C motif）receptor7,CCR7）等基因相对重要且在Cd11cCreLkb1f/f小鼠AM中表达增高。基因集富集分析（gene set enrichment analysis,GSEA）得到了与Cytoscape相同的炎症反应和代谢相关通路的结果。结论:Lkbl缺陷的AM其炎症反应及甘油脂代谢等通路相关基因上调,一些关键基因如TLR2,CD40,CCR7等可能在此过程中起到了重要作用。课题二:胃癌与黑色素瘤表观遗传学相关研究第一部分 胃癌患者DNA甲基化亚分型及预后评估模型的构建目的:根据胃癌DNA甲基化亚分型,建立预后评估模型以预测高风险胃癌患者,为临床诊治提供依据。方法:我们利用Cox风险回归的方法确定独立预后相关甲基化位点并进行患者亚分型,用coxph函数构建风险评估模型。基因通路富集在Cytoscape软件进行。相关性分析采用Spearman或Pearson分析。两组或两组以上独立样本之间的比较选择参数或非参数统计学检验。结果:我们鉴定出了610个胃癌独立预后相关甲基化位点（P<0.05）,将胃癌患者分为7个甲基化亚组,并利用甲基化水平和患者生存率高于其他亚组的第6亚组中显着变化的甲基化位点（P<0.05）构建了预后风险评估模型。该模型能够有效地将高风险和低风险的胃癌患者进行区分,受试者工作特征曲线下面积大于0.90,其有效性在另一组胃癌患者甲基化样本中得到了证实。独立预后相关甲基化位点对应的基因主要富集在癌症通路或胃癌信号通路。其中,转化生长因子β2（transforming growth factor β2,TGFβ2）在不同的胃癌患者生存状态、T分期、分级和肿瘤阶段的表达水平存在差异,并且相对于正常人,在肿瘤患者中的表达水平升高,参与了该病信号通路。结论:我们实现了基于甲基化大样本的胃癌亚分型并构建了能够有效识别高风险患者的预后风险评估模型。一些重要的独立预后甲基化位点对应的基因例如TGFβ2被发现,这些基因将会为胃癌患者临床诊治和个性化风险评估提供新的依据和思路。第二部分黑色素瘤患者DNA甲基化亚分型及预后评估模型的构建目的:通过建立黑色素瘤DNA甲基化亚分型构建预后风险评估模型并挖掘重要的独立预后相关甲基化位点对应的基因。方法:我们基于475个黑色素瘤患者甲基化文件,利用Cox风险回归方法鉴定独立预后相关甲基化位点进而进行亚分型。利用R软件进行风险评估模型构建,用ClueGo对位点基因进行通路富集。根据数据是否满足正态分布及方差齐性选择参数或非参数统计学检验。结果:我们鉴定出了 256个黑色素瘤独立预后相关甲基化位点（P<0.0001）,并将患者分为7个甲基化亚组,这些亚组中第2亚组的甲基化水平和生存时间显着低于其他组（P<0.05）。于是我们将第2亚组中显着变化的甲基化位点用于黑色素瘤患者预后风险评估模型的构建,该模型能够有效地将患者分为高风险组和低风险组,具有较高的检测效率,受试者工作曲线下面积为0.833。经分析我们发现,随着风险值的升高,死亡患者数目逐渐增加,患者甲基化水平逐渐降低,有高风险分数的患者生存率远低于有低风险分数的患者。相关性分析结果显示,黑色素瘤患者的风险值与生存时间呈负相关（rs=-0.325,P<0.0001）。独立预后相关甲基化位点对应的基因主要富集在癌症和免疫相关通路。在这些位点基因中,我们鉴定出35个关键基因,其中DOK2、GPBAR1、GBP4、PSMB9等基因在不同甲基化亚组、患者生存状态、肿瘤阶段和临床T分期中的表达水平存在显着性差异且呈正相关（P<0.05）。结论:我们实现了基于大样本的黑色素瘤甲基化亚分型并构建了具有较高检测效率的预后风险评估模型,同时发现了几个重要的与患者预后情况存在显着相关性的位点基因,这些基因之间呈明显的正相关,说明其可能通过协同作用共同促进了黑色素瘤疾病的形成过程,这对于进一步理解黑色素瘤疾病分子生物学机理具有重要意义,为临床诊治提供了新的靶点。第三部分 m6a调控基因在黑色素瘤患者中的表达情况及意义目的:探索RNA表观修饰N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine,m6a）调节基因在黑色素瘤疾病形成过程中的重要作用。方法:我们利用Oncomine数据库对m6a的调控基因的表达水平进行了分析,并在基因表达综合数据集（gene expression omnibus dataset,GEO）中进行了验证。关键基因通过Cytohubba获得。利用cBioPortal线上工具对基因突变情况进行分析。结果:我们发现YTHDF1和HNRNPA2B1在黑色素瘤患者中表达上调,对这两个基因进行联合回归分析发现检测效率相比较于单个基因提高了约10%。黑色素瘤转录本中关键基因的功能富集结果表明,p53信号通路中包括了 CDK2,CDK1,RRM2,CCNB1和CHEK1等基因。这五个基因与YTHDF1或HNRNPA2B1呈正相关,这意味着这两个m6a调节基因可能通过影响上述5个关键基因的m6a修饰而调节其表达进而促进其抑制p53信号通路。我们还发现YTHDF1和HNRNPA2B1主要的变异是扩增,且携带m6a调节基因突变的患者与不携带突变的患者在不同的肿瘤阶段和治疗反应组中有显着差别。结论:我们第一次利用m6a调节基因联合回归的方法对黑色素瘤患者进行诊断鉴别。同时,我们发现YTHDF1和HNRNPA2B1表达水平在黑色素瘤患者中显着改变且可能通过p53等信号通路影响了患者的疾病进展。
彭磊[4]（2019）在《PTBP1等基因在肝癌细胞恶性增殖中的作用及与相关中医证候的关系》文中认为目的在导师团队以往中医药防治肝癌研究的基础上,选择若干在肝癌细胞恶性增殖时表达量上调的基因,综合采用RNA干扰等实验技术,探索研究这些基因在肝癌细胞恶性增殖中的作用,以期丰富肝癌发病和恶性增殖机制,及肝癌热毒证发生的部分机制。方法主要包括:肝癌细胞的培养、目的基因干扰质粒的制备、脂质体瞬时转染干扰质粒、沉默目的基因后细胞增殖能力的MTT法检测、沉默目的基因后RT-q PCR的检测基因表达量的变化、沉默目的基因后Western blot检测蛋白表达的变化、沉默目的基因后流式细胞技术对细胞周期和细胞凋亡的检测、相关方法学实验探讨和改进以及文献资料查阅等。结果（1）成功构建了10个目的基因的干扰质粒。（2）荧光对照显示质粒转染成功。（3）转染si RNA后72h,与正常组相比PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A基因沉默组细胞数量明显减少。（4）转染si RNA后72h,PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A各基因相对表达量与阴性相比均不同程度下调,且下调幅度较明显。（5）转染si RNA后72h,与对照组相比PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A各基因沉默组其相应蛋白表达量呈现不同程度下调。（6）转染si RNA后72h,流式细胞技术检测细胞周期的变化显示,与阴性质粒转染组相比,PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A各基因敲除组的G2期峰面积有不同程度增加趋势,但改变不明显。（7）转染si RNA后72h,流式细胞技术检测细胞凋亡的情况显示,与阴性质粒转染组相比,PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A基因敲除组凋亡细胞数量有一定程度增加,但改变不明显。结论PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A等与应激相关基因具有维持和促进SMMC-7721肝癌细胞恶性增殖的作用,且其作用应当主要不是直接或间接通过调节细胞周期、凋亡来实现的。在肝癌患者常见的复杂证候中,热毒/瘀毒证候是基本证候之一,突出表现在肝癌的恶性增殖和难治,临床对应的会采用清热解毒类中药治疗。因此,本研究结果提示,PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A等基因的过表达,与肝癌的热毒/瘀毒证候相关,是其发生的物质基础。
柯瑞盛[5]（2019）在《miR-423-5p、HNRNPA1在肝细胞癌中的临床意义及分子机制研究》文中研究表明第一章 miR-423-5p在肝细胞癌中的临床意义及分子功能机制研究背景:肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）主要是以手术切除为主的综合治疗,但大多数患者预后未达到理想预期。因此,改善HCC的早期诊断和预测预后、探索更多有效的治疗方法,是目前临床上急需解决的难题。MicroRNAs（miRNA）在各种恶性肿瘤的进展中起关键作用。表达异常的miRNA具有显着的临床意义,能够调控肿瘤进展的相关过程,表现出改善肿瘤靶向治疗的巨大潜能。本研究从GEO（Gene Expression Omnibus）数据库中的HCC相关miRNAs差异表达谱,筛选到了在HCC中表达水平显着上调的miR-423,进一步预测了其潜在靶基因为转化生长因子β受体III（Transforming growth factor beta receptor III,TGFBR3）,并结合已有文献报道,本研究推测miR-423可能是通过调控TGFBR3来影响PI3K/AKT通路发挥其在肝癌中的功能。本项目的研究结果将丰富肝癌中功能miRNA的种类,为该疾病的提供一种新的生物标记物及潜在治疗靶点。目的:本研究通过临床研究、功能研究及分子机制研究,评估miR-423-5p和TGFBR3在肝细胞癌中的临床意义,以及肝细胞癌进展中的生物学功能和分子机制。方法:先从GEO数据库四个不同的数据集中筛选得到了在HCC中表达异常的miR-423,并用生物信息学预测其靶基因为TGFBR3,Kaplan Meier-plotter数据库分别分析miR-423和TGFBR3与肝癌患者的预后关系,FunRich软件分析miR-423-5p和TGFBR3可能涉及了PI3K/AKT信号通路。再用生物信息学分别分析了miR-423-5p和TGFBR3在GEO和TCGA数据库的HCC相关数据中的表达水平和临床意义,使用LinkedOmics数据库分别对miR-423-5p和TGFBR3在HCC中行表达关系分析和GSEA分析,用在线STRING数据库构建TGFBR3的蛋白-蛋白互作（PPI）网络,并分析TGFBR3基因在人体肿瘤中可能涉及的KEGG信号通路。再回顾性收集本中心132例肝癌患者的组织标本和临床预后信息,使用定量实时PCR（qRT-PCR）用于评估miR-423-5p和TGFBR3的表达。通过ROC曲线分析,Kaplan-Meier生存曲线分析和多因素Cox回归分析等统计方法分别评估miR-423-5p和TGFBR3的临床意义。体外细胞实验研究miR-423-5p和TGFBR3对HCC细胞中细胞生物行为的影响:MTT实验法检测HCC细胞增殖能力,Transwell法观察HCC细胞迁移及侵袭能力,流式细胞术测HCC细胞凋亡情况;体内实验通过构建裸鼠成瘤模型检测miR-423-5p和TGFBR3不同表达对肿瘤生长的影响。双荧光素酶报告基因实验和蛋白质免疫印迹实验（Western Blot,WB）验证HCC中miR-423-5p和TGFBR3之间的表达调控关系。WB实验评估分子机制研究中PI3K/AKT通路涉及的关键蛋白质水平,并用分别用MTT法,Transwell小室法,流式细胞术等检测在HCC细胞中miR-423-5p和TGFBR3是否通过PI3K/AKT通路影响细胞生物学行为。结果:通过对4个GEO数据集中分析筛选,我们寻找HCC中关键基因miR-423,miR-423在GEO数据库（GSE22058）/TCGA数据库总均为高表达。Kaplan Meier-plotter数据库分别结果表明miR-423高表达的HCC患者预后不良（P<0.05）,在GSE20594数据集中miR-423高表达与HCC患者BCLC分期,血管侵犯显着相关（P<0.05）。LinkedOmics数据库结果提示TCGA中miR-423表达与HCC患者的年龄、种群、病理分级、肿瘤T分期、肿瘤N分期、总体生存预后均显着相关（n=375例,P<0.05）。GSEA分析结果显示miR-423可能参与HCC发生发展的细胞周期,DNA复制,癌症相关miRNA,p53信号通路等肿瘤发展相关生物学活动。miR-423-5p在HCC组织和细胞系中的表达均显着上调。在132例HCC患者中,miR-423-5p可以用作诊断生物标志物来区分HCC组织和非癌组织。高表达的miR-423-5p与患者的淋巴结转移,TMN分期及生存预后较差等均显着相关。HCC细胞中表达上调的miR-423-5p在体外可促进HCC细胞增值,迁移侵袭和抑制细胞凋亡,并于体内可促进肝癌生长。GEPIA,Kaplan Meier-plotter和CCLE数据库结果显示TGFBR3在人类不同肿瘤中主要呈现低表达,与多种肿瘤的不良预后相关。TGFBR3蛋白的PPI网络分析也富集得到TGFBR3蛋白参与多种癌症发生和进展相关的KEGG通路。生物信息学分析提示HCC中TGFBR3可能是miR-423-5p靶基因,在LinkedOmics数据库中低表达的TGFBR3与miR-423-5p表达呈负相关。TGFBR3在HCC组织和细胞系中的表达显着降低。我们通过双荧光素酶报告实验和蛋白质免疫印迹实验证明了miR-423-5p在HCC中靶向负调控TGFBR3,miR-423-5p过表达可抑制TGFBR3的表达。低表达的TGFBR3与132例HCC患者的TMN分期,淋巴结转移和生存预后较差均具有显着相关。肝癌细胞中TGFBR3过表达在体外具有抑制HCC细胞增值,迁移侵袭和促进凋亡作用,并且在体内可以抑制肿瘤生长。miR-423-5p上调表达可激活PI3K/AKT信号通路影响HCC细胞的生物学活动。表达上调的TGFBR3能够拮抗逆转miR-423-5p过表达的生物学功能及其对PI3K/AKT信号通路的激活作用。结论:miR-423-5p和TGFBR3的表达异常均可作为HCC患者两种候选诊断和预后的生物标志物。在HCC中,高表达的miR-423-5p可能通过靶向负调控抑制TGFBR3表达,从而激活了PI3K/AKT信号通路活性来促进HCC增殖,转移侵袭等恶性进展。抑制miR-423-5p表达或增强TGFBR3表达的治疗策略可能有助于改善HCC预后并且可作为肝癌潜在的治疗靶标。第二章 HNRNPA1在HBV相关肝细胞癌中的临床价值及分子机制研究背景:由于乙型肝炎病毒（HVB）感染率较高,使得中国每年新发HCC患者占到全世界新发病例总数的55%。然而,根治性切除和肝移植等综合多种治疗的预后仍未达到满意预期。根据报道,约有30%HCC患者的AFP为阴性,发现其他敏感肿瘤生化标志并研究其分子机制,对于HCC患者尤为重要。大量研究表明,HNRNPA1在人类多种恶性癌症中表达异常且参与肿瘤的进展及预后。HNRNPA1在HBV阳性HCC中的功能作用研究相对较少,本研究结合生物信息学分析希望可以了解HNRNPA1与HBV阳性HCC（HBV-HCC）患者临床预后之间的关系,并探讨HNRNPA1在HBV-HCC中的分子机制,为HCC的早期及时干预和个性化治疗提供新防治思路和的治疗靶点。目的:探讨HNRNPA1表达在HBV阳性肝细胞癌（HCC）中的临床价值,并初步对HNRNPA1在HCC细胞中表达及潜在分子功能进行研究。方法:本研究先利用GEPIA、TCGA、GEO等数据库对HNRNPA1基因在肝细胞癌和正常肝组织中表达进行生物信息学分析,并预测了HNRNPA1表达与肝细胞癌预后的关系。再用逆转录-定量聚合酶链反应法（RT-q PCR）和免疫组织化学法（IHC）验证HCC中HNRNPA1表达,进一步验证HNRNPA1表达与HCC患者预后的关系。再从Linked Omics和c Bio Portal数据库筛选与HNRNPA1共表达基因,DAVID 6.7数据库对HNRNPA1共表达基因进行GO和KEGG分析,用STRING数据库来构建HNRNPA1共表达蛋白-蛋白间的互作网络（PPI网络）,并用Cytoscape软件对PPI网络进行可视化处理。最后在HBV相关的HCC细胞中,用双荧光素酶报告实验和蛋白质免疫印迹实验分析HNRNPA1分别与mi R-22和EGFR信号通路的关系。结果:通过综合分析了来自GEPIA,GEO和TCGA等数据库的数据,结果发现HNRNPA1表达在HBV阳性HCC样品中显着性增高,该结果通过本中心的RT-q PCR和IHC实验验证得到支持。在GSE14520数据集和151例HBV-HCC患者中的生存分析显示HNRNPA1高表达患者的总体存活率显着降低。在GSE14520数据集中高表达的HNRNPA1对HBV相关HCC患者具有一定的预后诊断应用意义。此外,GO和KEGG分析均证明HNRNPA1共表达基因参与翻译,核糖核蛋白复合物生物合成和组装,核糖体生物发生,RNA加工,RNA剪接等。可视化后的PPI网络显示了HNRNPA1与SNRPD1、SNRPD2、POLR2H和RBMX等共表达并存在直接作用。基因组富集分析（GSEA）显示了HNRNPA1可能通过细胞周期和WNT信号传导途径等影响HCC进展。生物信息学预测到了mi R-22基因可能是HNRNPA1上游调控mi RNA,Linked Omics数据库提示了mi R-22低表达与HNRNPA1高表达在HCC中表达关系为负相关,荧光素酶报告实验结果也提示HNRNPA1基因在HBV-HCC中是mi R-22的下游直接靶基因,在mi R-22过表达的HBV-HCC细胞中HNRNPA1表达降低。蛋白质免疫印迹实验结果表明HNRNPA1可能在HBV相关的HCC中通过EGFR信号通路起到癌基因的作用。结论:HCC组织中的HNRNPA1高表达作为癌基因起作用,与HCC术后复发率较高相关。HNRNPA1的表达上调与HBV相关HCC切除术患者的不良预后相关,可以作为HBV相关HCC患者预后的生物学标志物。SNRPD1,SNRPD2,POLR2H和RBMX等蛋白与HNRNPA1蛋白可能存在直接相互作用,并且表达均与HNRNPA1呈现正相关,可能影响HNRNPA1的功能。在HBV相关的HCC中,HNRNPA1是mi R-22的直接负调节靶标,并且HNRNPA1可以通过EGFR信号传导途径充当癌基因,可以作为HBV阳性HCC患者的潜在治疗靶点。
洪亚[6]（2019）在《核蛋白PCNP对人肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响》文中研究说明背景近年来,在全球范围内肺癌的发病率、死亡率均出现持续上升,现肺癌已成为了最常见的恶性肿瘤之一。肺癌的发生机制尚不完全明确,大量研究资料表明,肺癌的发生与吸烟、职业因素、空气污染、电离辐射、遗传和基因改变等因素有关。肺癌的发生早期多与肺部良性疾病类似,无明显特殊的症状,患者就诊时大多处于晚期,失去了最佳的治疗时机。在肺癌的众多分类中,非小细胞肺癌（NSCLC）约占肺癌类型的85%,它是肺癌最常见的一种类型。关于NSCLC的治疗,手术常常用于治疗早期,不能接受手术进行治疗的患者,多采取放疗、化疗、介入治疗、生物免疫等治疗方法,其5年生存率低。因此,进一步对NSCLC发病的分子机制进行深入的研究变得至关重要,寻找出对于肺癌治疗更多的新靶点,为治疗肺癌提供更多的机会和可能性。PCNP由日本科学家将其作为NIRF的一种底物于2004最先报道,PCNP是一种定位在细胞核内含有PEST的蛋白,查阅大量文献后发现,一些含有PEST序列的蛋白质大多主要参与细胞周期的调节和细胞的增殖过程。因此,我们猜测核蛋白PCNP在肿瘤的发展中起了作用。通过挖掘数据库后,我们发现核蛋白PCNP在宫颈癌、直肠癌和肺癌等一系列恶性的肿瘤中高表达。为了进一步弄清PCNP与肿瘤的关系,本课题组首先对PCNP与神经母细胞瘤的关系进行了探究,初步实验结果可发现,PCNP可抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖,减弱细胞侵袭和迁移能力,抑制异体成瘤,增强了细胞凋亡能力,不过作用的具体机制还需要进一步研究。鉴于课题组的初步研究,我们决定进一步探讨核蛋白PCNP与肺腺癌之间的关系。实验进行前,课题组通过对上海芯超芯片公司提供的肺腺癌组织芯片统计分析后发现,核蛋白PCNP在肺腺癌组织中发生了高表达,而在癌旁组织中相反,出现了低表达。接下来,我们的研究小组选择了人非小细胞肺癌的A549细胞系进行了初步的一些预实验,包括MTS、EDU、平板克隆、细胞划痕、Transwell实验以及Western blot检测Bax蛋白表达情况,初步证实,PCNP可促进细胞的增殖、迁移。为了进一步验证PCNP对于肺腺癌的具体作用,我们选择人肺腺癌A549和H1299细胞作为研究对象,重新进行了之前的实验,为的是能够更进一步地研究核蛋白PCNP与肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的关系,此外,也希望能够为肺腺癌的预防、诊断、治疗、预后提供更多的可行的理论依据。目的探究PCNP与人肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及成瘤性之间的关系,并进一步探索可能的分子机制。方法查阅数据库;通过IHC在63个人肺腺癌标本和相应的癌旁组织（国家人类遗传资源共享服务平台,中国上海）中检测到PCNP的表达水平。然后收集4个接受手术的新鲜患者标本,以检测PCNP的蛋白质水平。为了明确PCNP在肺腺癌中的临床意义,我们进一步分析了PCNP水平与肺腺癌组织芯片中性别、年龄、病理分级等其他临床病理参数的关系。用G418和嘌呤霉素进行药敏实验后,将PCNP过表达和沉默质粒及其对应的对照质粒分别转染到人肺腺癌A549和H1299两种细胞系中。分别用G418和嘌呤霉素筛选它们以获得稳定表达的细胞株。Western blot免疫印迹和RT-PCR用于验证和确认每种稳定株的成功构建,采用TUNEL实验检测细胞的凋亡能力;采用EDU增殖实验、MTS测定实验、平板克隆形成实验来检测各肺癌细胞系稳定株细胞的增殖能力;采用细胞划痕愈合实验、Transwell迁移实验、Invasion侵袭实验以及软琼脂生长实验来检测各肺癌细胞系迁移、侵袭的能力;此外,用Western blot来检测各种凋亡蛋白、STAT3/STAT5信号通路表达情况,检测PI3K/AKT/mTOR信号通路、自噬相关蛋白P62/Becline-1/Lc3,分别探讨它们之间可能的关系;将各稳定株细胞注射到裸鼠腋下,检测PCNP对肺腺癌细胞裸鼠成瘤性的影响,并将小鼠肿瘤组织进行HE染色和免疫组化分析。结果1、PCNP主要在细胞核内表达,PCNP水平在肺腺癌组织中高,但在相邻的非肿瘤组织中低,PCNP水平与肺腺癌的T分期有关。2、Western blot和RT-PCR检测肺腺癌细胞A549和H1299内PCNP表达量显示:过表达细胞组、沉默细胞组,及对照组稳定株均已构建成功。3、EDU实验、MTS实验和平板克隆实验检测A549和H1299两种细胞系增殖情况显示:PCNP增强人肺腺癌细胞的增殖能力和活力。4、细胞划痕实验、Transwell实验来检测细胞的迁移能力,采用Invasion侵袭实验、软琼脂生长实验来检测细胞的侵袭能力,结果显示:PCNP增强人肺腺癌细胞的迁移和侵袭的能力。5、TUNEL实验用来检测细胞的凋亡能力,结果显示:PCNP过表达的细胞组可抑制细胞的凋亡,沉默组相反,可促进凋亡。Western blot检测凋亡蛋白的表达量,结果与TUNEL结果相同,PCNP过表达组Cleaved Caspase3、Cleaved PARP表达水平降低,沉默组细胞表达量增多;过表达组p-STAT3、p-STAT5表达增高,沉默组降低。因此,从上述结果可以看出,PCNP抑制人肺腺癌细胞的凋亡,并可能通过STAT3信号通路介导肺腺癌细胞的凋亡。6、Western blot检测PI3K/AKT/mTOR信号通路及凋亡蛋白Beclin1、LC3、p62中蛋白表达量的变化,结果显示,与对照组相比,PCNP过表达组P-PI3K、P-AKT、P-mTOR表达量增加,沉默组表达量减少;PCNP过表达组Becline1和P62的蛋白质表达量增加,沉默组表达量减少,此外,LC3A/B的蛋白质水平呈现出相反的趋势。因此,PCNP过表达增加了自噬水平,PCNP敲低表现出相反的效果。总之,这些结果表明PCNP可能通过人肺腺癌细胞中的PI3K/Akt/mTOR途径增加细胞自噬。7、裸鼠皮下异种移植肿瘤模型实验表明PCNP促进人肺腺癌异种移植肿瘤的生长和血管生成。结论核蛋白PCNP增强人肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的能力,且可能通过STAT3/5和PI3K/Akt/mTOR信号通路调控细胞的凋亡和自噬过程,进而促进人肺腺癌的发生和发展。
童小琴[7]（2019）在《基于多组学探讨HNRNPU在肝细胞癌中的表达及意义》文中指出目的:肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是常见的恶性消化系统肿瘤,是全球第六大恶性肿瘤,在全球肿瘤相关死亡因素中排名第四,其发病率和死亡率高,并且十分容易转移和复发。最新的全球癌症统计数据显示2018年全球范围内肝癌新发病例数为84.1万例,肝癌死亡病例数为78.2万例,其中几乎50%以上的发病例数和死亡病例数来自于我国。尽管过去十几年来已经识别了许多与HCC发生发展有关的基因,但HCC形成过程中的具体机制仍不明确,本研究通过对来自GEO数据库的HCC相关数据集进行的生物信息学分析,识别出与HCC发生显着相关的基因和通路,并在TCGA数据库中进行验证,随后进行细胞学实验探讨HCC形成的具体分子机制。方法:我们分析了来自GEO数据库的6个HCC相关数据集（GSE14520GPL571,GSE14520GPL3921,GSE41804GPL570,GSE45267GPL570,GSE60502GPL96、GSE6764GPL570）,通过Meta分析和Pathway分析筛选出与HCC的发生发展密切相关的基因HNRNPU,进一步分析HNRNPU在HCC组织和正常组织中的表达差异,HNRNPU表达水平与HCC患者多种临床病理特征的关系以及HNRNPU表达水平预测HCC发生与否的能力。此外,还通过细胞学实验分析HNRNPU在HCC发生发展过程中的分子机制以及shHNRNPU对HCC细胞增殖的影响。结果:生物信息学分析结果提示HNRNPU的表述水平与肝细胞癌的发生发展相关,HNRNPU在肝细胞癌组织中的表达水平高于正常组织中的表达水平且差异有统计学意义（P1<0.001,P2<0.001,P3<0.001,P4<0.001,P5=0.001,P6<0.001）,对TCGA数据集的分析也验证了这一结论（t=-7.232,P<0.001）。此外,使用固定效应模型对这6个微阵列数据进行Meta分析的结果同样表明HNRNPU在肝细胞癌组织中高表达,差异具有显着性（SMD=1.61;95%CI=1.43-1.78;P<0.001）。HNRNPU在低年龄组的表达水平显着高于高年龄组（t=3.216,P=0.001）,在G3-G4组的表达水平显着高于G1-G2组（t=-5.701,P<0.001）。ROC曲线表明用HNRNPU表达水平预测HCC的发生与否有较高的诊断价值（AUC=0.796）。此外,本研究还发现HNRNPU可通过影响细胞周期、代谢、发育通路中相关基因的表达,从而影响HCC的发生发展。细胞学实验表明,敲低HNRNPU在SMMC7721和Huh7中的表达,能显着抑制HCC细胞的增殖(PHuh7=0.00016,PSMMC7721=0.00036)。结论:HNRNPU在肝细胞癌组织中显着高表达,HNRNPU表达水平与细胞增殖、HCC发生发展密切相关。本研究认为HNRNPU或许可作为生物标记物,为HCC的预防、早期诊断、治疗提供新的策略,提高患者生存率。
秦娥,沈巨信,周国忠[8]（2016）在《非小细胞肺癌患者呼出气冷凝液中不均一核糖核蛋白A2/B1检测的临床意义》文中提出目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者呼出气冷凝液中核内不均一核糖核蛋白（hnRNP）A2/B1检测价值。方法收集NSCLC患者37例为NSCLC组,其中鳞癌17例,腺癌20例,TNM分期的Ⅰ期Ⅱ期12例,Ⅲ期Ⅳ期25例,另收集同期健康体检者25例为对照组,采集空腹血清和呼出气冷凝液（EBC）标本,采用ELISA方法检测血清及EBC中hnRNP A2/B1。结果 NSCLC组血清、EBC中hnRNP A2/B1水平均高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。鳞癌组和腺癌组血清hnRNP A2/B1水平差异无统计学意义（P<0.05）,鳞癌组EBC中hnRNP A2/B1水平高于腺癌组,差异有统计学意义（P<0.01）。Ⅲ期Ⅳ期血清hnRNP A2/B1高于Ⅰ期Ⅱ期,差异有统计学意义（P<0.05）,Ⅰ期Ⅱ期EBC中hnRNP A2/B1水平高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论检测血液及EBC中hnRNP A2/B1水平对肺癌有辅助诊断价值,其中EBC中hnRNP A2/B1水平检测对早期肺癌的诊断有一定临床意义。
韩姣,曾凡军[9]（2016）在《异质性胞核核糖核蛋白与肺癌发生发展的关系》文中认为肺癌发生于支气管黏膜上皮,亦称支气管癌。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率明显升高,在男性癌症患者中,肺癌已居首位,在发达国家31%的男性癌症患者死于肺癌;女性发病率也迅速升高,25%的女性癌症患者死于肺癌,甚至超过乳腺癌[1]。目前,对于肺癌的筛查仍然没有一种确切的方法,胸透和痰细胞学很常用,但是敏感度不高[2]。随
龙颖颖,古艳,李羲,颜春松[10]（2012）在《非小细胞肺癌患者癌组织、外周血中hnRNP A2/B1 mRNA的表达变化》文中认为目的观察非小细胞肺癌（NSCLC）组织与外周血中异质性胞核核糖核蛋白A2/B1（hnRNP A2/B1）mR-NA表达变化,并探讨其临床意义。方法采用RT-PCR法检测57例NSCLC患者（肺癌组）癌组织与外周血单个核细胞中的hnRNP A2/B1 mRNA,以30例肺部良性病变患者（良性组）为对照。结果肺癌组癌组织与外周血单个核细胞中hnRNP A2/B1 mRNA分别为（0.82±0.49）、（0.69±0.48）μg/μL,良性组分别为（0.16±0.25）、（0.13±0.20）μg/μL;两组比较,P均<0.05。NSCLC患者TNM分期Ⅰ～Ⅱ期者癌组织与外周血单个核细胞中hnRNP A2/B1 mRNA分别为（0.68±0.45）、（0.57±0.47）μg/μL,均低于Ⅲ～Ⅳ期的（0.93±0.49）、（0.78±0.4）μg/μL,P均<0.05。NSCLC患者癌组织与外周血单个核细胞中hnRNP A2/B1 mRNA的表达呈正相关（r=0.941,P<0.05）。结论 NSCLC患者癌组织与外周血单个核细胞中hnRNP A2/B1 mRNA表达增加,且二者呈正相关关系;外周血单个核细胞hnRNP A2/BmRNA检测有助于NSCLC的诊断及病理分期。
二、异质性胞核核糖核蛋白A2/B1与肺癌的早期诊断（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、异质性胞核核糖核蛋白A2/B1与肺癌的早期诊断（论文提纲范文）
（1）敲低HNRNPDL基因抑制体外肺腺癌细胞的恶性表型（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词中英文对照 |
| 第一章 引言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 细胞的来源及培养 |
| 2.2 Affymetrix基因表达谱芯片技术筛选差异基因—β-榄香烯作用于肺腺癌A549 细胞起到增殖抑制作用的差异基因 |
| 2.3 高内涵细胞功能学筛选(HCS)单靶点筛选 |
| 2.4 shHNRNPDL慢病毒载体的构建及细胞转染 |
| 2.5 Western Blot验证HNRNPDL敲除效率 |
| 2.6 PCR验证HNRNPDL的敲除效率 |
| 2.7 CCK-8 验证HNRNPDL敲除后对肺腺癌细胞的增殖影响 |
| 2.8 划痕实验测定HNRNPDL对肺腺癌细胞的迁移影响 |
| 2.9 流式细胞术检测HNRNPDL对肺腺癌细胞系的周期和凋亡的影响 |
| 2.10 数据分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 β-榄香烯作用于肺腺癌细胞起到增殖抑制作用的差异基因 |
| 3.2 高内涵细胞功能学筛选(HCS)单靶点筛选 |
| 3.3 WesternBlot和 PCR验证慢病毒敲低HNRNPDL的 效率 |
| 3.4 敲低 HNRNPDL 对 A549 和 NCI-H1299 细胞的增殖的影响 |
| 3.5 敲低 HNRNPDL 对 A549 和 NCI-H1299 细胞的迁移的影响 |
| 3.6 敲低 HNRNPDL 对 A549 和 NCI-H1299 凋亡和细胞周期的影响 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 综述 |
| 第六章 结论 |
| 第七章 展望与不足 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 |
（2）RNA结合蛋白在膀胱癌中的生物学功能及预后价值（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 英文缩略词汇表 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 RNA 结合蛋白在肿瘤中的功能和发展前景 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（3）肺泡巨噬细胞Lkb1对其自稳的调控及肿瘤表观遗传学相关研究（论文提纲范文）
| 课题一: 肺泡巨噬细胞Lkb1对其自稳的调控 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 Cd11c~(Cre)Lkb1~(f/f)条件敲除小鼠的建立及其免疫表型的鉴定 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论与总结 |
| 第二部分 代谢相关检测及Cd11c~(Cre)Lkb1~(f/f)小鼠AM挽救实验 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论与总结 |
| 第三部分 Lkb1缺陷的肺泡巨噬细胞中重要的信号通路及基因 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论与总结 |
| 参考文献 |
| 课题二: 胃癌与黑色素瘤表观遗传学相关研究 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 胃癌患者DNA甲基化亚分型及预后评估模型的构建 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论与总结 |
| 第二部分 黑色素瘤患者DNA甲基化亚分型及预后评估模型的构建 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论与总结 |
| 第三部分 m6a调控基因在黑色素瘤患者中的表达情况及意义 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论与总结 |
| 参考文献 |
| 综述 肺泡巨噬细胞 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 一、流式抗体信息（均来自Biolegend公司) |
| 二、缓冲液配制 |
| 三、缩略词表 |
| 在读期间发表的论文 |
| 致谢 |
（4）PTBP1等基因在肝癌细胞恶性增殖中的作用及与相关中医证候的关系（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 若干应激相关基因干扰序列表达载体的构建 |
| 1.1 .材料 |
| 1.1.1 .实验仪器 |
| 1.1.2 .实验试剂 |
| 1.1.3 .实验耗材 |
| 1.2 .方法 |
| 1.2.1 .制备干扰片段 |
| 1.2.2 .制备载体 |
| 1.2.3 .载体与插入片段的连接 |
| 1.2.4 .重组质粒转化感受态细胞 |
| 1.2.5 .挑取氨苄青霉素抗性单菌落扩增培养及测序鉴定 |
| 1.2.6 .中量制备 |
| 1.3 .结果 |
| 1.4 .讨论 |
| 第二部分 脂质体质粒转染不同肝癌细胞的方法学优化 |
| 2.1 .材料 |
| 2.1.1 .实验仪器 |
| 2.1.2 .实验试剂 |
| 2.1.3 .实验耗材 |
| 2.2 .方法 |
| 2.2.1 .细胞培养 |
| 2.2.2 .细胞转染 |
| 2.2.3 .细胞增殖检测:MTT法 |
| 2.2.4 .RT-q PCR |
| 2.3 .结果 |
| 2.4 .讨论 |
| 第三部分 候选基因在肝癌细胞恶性增殖中的作用及对细胞周期和凋亡的影响 |
| 3.1 .材料 |
| 3.1.1 .实验仪器 |
| 3.1.2 .实验试剂 |
| 3.1.3 .实验耗材 |
| 3.2 .方法 |
| 3.2.1 .细胞培养 |
| 3.2.2 .细胞转染 |
| 3.2.3 .细胞增殖检测:MTT法 |
| 3.2.4 .RT-q PCR |
| 3.2.5 .Western blot |
| 3.2.6 .流式细胞仪检测细胞周期 |
| 3.2.7 .流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 3.3 .结果 |
| 3.4 .讨论 |
| 3.4.1 .候选基因功能检测的国内外进展 |
| 3.4.2 .候选基因与相关中医证候的关系 |
| 3.4.3 .PTBP1 等基因在SMMC-7721 细胞恶性增殖中的作用 |
| 3.4.4 .PTBP1 等基因对SMMC-7721 细胞周期和凋亡的影响 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录一 文献综述 PTBP1 研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录二 发表文章情况 |
| 附录三 参加学术会议情况 |
（5）miR-423-5p、HNRNPA1在肝细胞癌中的临床意义及分子机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一章 miR-423-5p在肝细胞癌中的临床意义及分子功能机制研究 |
| 前言 |
| 实验材料及方法 |
| 第一节 miR-423-5p在肝细胞癌中的临床价值及功能研究 |
| 1 引言 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二节 miR-423-5p靶基因筛选及TGFBR3表达在肝癌中的临床价值及功能研究 |
| 1 引言 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三节 miR-423-5p在肝癌进展中分子作用机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第一章 全章结论 |
| 第一章 文献综述 MicroRNA-423在人类癌症中的调节机制和功能作用 |
| 第二章 HNRNPA1在HBV阳性肝细胞癌中的临床价值及分子机制研究 |
| 前言 |
| 实验材料及方法 |
| 第一节 HNRNPA1在HVB阳性肝癌肝切除患者中的预后价值研究 |
| 1 引言 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二节HNRNPA1在HBV阳性肝细胞癌中的初步分子机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二章 全章结论 |
| 第二章 文献综述 HNRNPA1蛋白在消化系统肿瘤中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（6）核蛋白PCNP对人肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 1 引言 |
| 2 材料、试剂与仪器设备 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.2 抗体 |
| 2.3 主要仪器设备 |
| 2.4 主要试剂配置 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 组织芯片结果统计与分析 |
| 3.1.1 组织样本 |
| 3.1.2 免疫组织化学染色 |
| 3.2 稳定株构建 |
| 3.3 细胞药敏实验 |
| 3.4 感受态的制备及质粒提取 |
| 3.5 细胞培养 |
| 3.5.1 细胞复苏 |
| 3.6 细胞转染 |
| 3.6.1 细胞冻存 |
| 3.7 RT-PCR |
| 3.7.1 提取mRNA |
| 3.7.2 RNA反转录及RT-PCR |
| 3.8 EDU细胞增殖检测法 |
| 3.9 Tunel细胞凋亡检测法 |
| 3.10 免疫印迹杂交 |
| 3.10.1 配制SDS-PAGE凝胶 |
| 3.10.2 蛋白电泳 |
| 3.10.3 蛋白印迹 |
| 3.10.4 免疫杂交与显色 |
| 3.11 蛋白提取及BCA法测蛋白浓度 |
| 3.11.1 蛋白提取 |
| 3.11.2 BCA法测蛋白浓度 |
| 3.12 Transwell法检测细胞迁移能力 |
| 3.13 Invasion检测细胞侵袭能力 |
| 3.14 平板克隆 |
| 3.15 软琼脂克隆形成实验 |
| 3.16 裸鼠成瘤实验 |
| 3.17 HE染色 |
| 3.18 免疫组化染色 |
| 3.19 MTS细胞增殖实验 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 人肺腺癌组织中PCNP蛋白水平高于邻近非肿瘤组织 |
| 4.2 成功构建稳定的PCNP过表达及沉默的人肺腺癌细胞株 |
| 4.3 PCNP增强人肺腺癌细胞的增殖能力和活力 |
| 4.4 PCNP增强人肺腺癌细胞的迁移和侵袭能力 |
| 4.5 PCNP通过信号转导和转录激活因子(STAT)3/5 通路抑制人肺腺癌细胞的凋亡 |
| 4.6 PCNP通过人肺腺癌细胞中PI3K/Akt/mTOR途径增加细胞自噬 |
| 4.7 PCNP促进裸鼠中人肺腺癌异种移植肿瘤的生长和血管生成 |
| 5 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间参加的学术会议及研究成果 |
（7）基于多组学探讨HNRNPU在肝细胞癌中的表达及意义（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 肝细胞癌概述 |
| 1.2 基因芯片技术 |
| 1.3 高通量测序 |
| 1.4 生物信息学分析 |
| 1.5 hnRNPs |
| 1.6 研究意义 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 数据来源 |
| 2.1.1 Gene Expression Omnibus |
| 2.1.2 The Cancer Genome Atlas |
| 2.2 数据分析软件及工具 |
| 2.2.1 R |
| 2.2.2 Mev软件 |
| 2.2.3 Web Gestalt网站 |
| 2.2.4 Review Manager |
| 2.2.5 基因表达差异分析 |
| 2.3 GEO数据集的筛选与处理 |
| 2.4 HNRNPU表达水平与HCC患者临床病理特征的关系 |
| 2.5 HNRNPU-sh RNA数据下载与分析 |
| 2.6 HNRNPU对HCC细胞的生物学影响 |
| 2.6.1 材料 |
| 2.6.2 主要溶液的配制 |
| 2.6.3 细胞培养 |
| 2.6.4 质粒构建 |
| 2.6.5 细胞转染 |
| 2.6.6 细胞增殖实验 |
| 2.6.7 总RNA提取 |
| 2.6.8 q RT-PCR |
| 第3章 结果 |
| 3.1 Spliceosome通路中HNRNPU与HCC发生发展密切相关 |
| 3.2 HNRNPU在肝癌与癌旁组织中表达水平差异分析和meta分析 |
| 3.3 HNRNPU表达与临床病理特征的关系 |
| 3.4 HNRNPU导致HCC的分子机制 |
| 3.5 HNRNPU对HCC细胞的生物学影响 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录A |
| 附录B |
| 综述 |
| 参考文献 |
（8）非小细胞肺癌患者呼出气冷凝液中不均一核糖核蛋白A2/B1检测的临床意义（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 资料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 EBC收集 |
| 1.2.2 血清收集 |
| 1.2.3 检测指标 |
| 1.3 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 NSCLC组和对照组血清及EBC中hnRNP A2/B1水平比较 |
| 2.2 不同病理类型EBC中hnRNP A2/B1水平的比较 |
| 2.3 不同临床分期NSCLC血清及EBC中水平比较 |
| 3 讨论 |
（9）异质性胞核核糖核蛋白与肺癌发生发展的关系（论文提纲范文）
| 1 hnRNPs的结构及功能 |
| 2 hnRNPs与肿瘤 |
| 3 hnRNPs与肺癌 |
| 3.1 hnRNP A/B家族与肺癌 |
| 3.2 hnRNP C与肺癌 |
| 3.4 hnRNP L与肺癌 |
| 4 展望 |
（10）非小细胞肺癌患者癌组织、外周血中hnRNP A2/B1 mRNA的表达变化（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 临床资料 |
| 1.2 hnRNP A2/B1基因检测方法 |
| 1.2.1 RNA的提取 |
| 1.2.2 RT-PCR 取RNA |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
四、异质性胞核核糖核蛋白A2/B1与肺癌的早期诊断（论文参考文献）
- [1]敲低HNRNPDL基因抑制体外肺腺癌细胞的恶性表型[D]. 王丽娜. 延安大学, 2021(09)
- [2]RNA结合蛋白在膀胱癌中的生物学功能及预后价值[D]. 吕昌乐. 大理大学, 2021(09)
- [3]肺泡巨噬细胞Lkb1对其自稳的调控及肿瘤表观遗传学相关研究[D]. 李腾达. 北京协和医学院, 2021(02)
- [4]PTBP1等基因在肝癌细胞恶性增殖中的作用及与相关中医证候的关系[D]. 彭磊. 上海中医药大学, 2019(03)
- [5]miR-423-5p、HNRNPA1在肝细胞癌中的临床意义及分子机制研究[D]. 柯瑞盛. 福建医科大学, 2019(07)
- [6]核蛋白PCNP对人肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响[D]. 洪亚. 河南大学, 2019(01)
- [7]基于多组学探讨HNRNPU在肝细胞癌中的表达及意义[D]. 童小琴. 南昌大学, 2019(01)
- [8]非小细胞肺癌患者呼出气冷凝液中不均一核糖核蛋白A2/B1检测的临床意义[J]. 秦娥,沈巨信,周国忠. 中国卫生检验杂志, 2016(22)
- [9]异质性胞核核糖核蛋白与肺癌发生发展的关系[J]. 韩姣,曾凡军. 广东医学, 2016(10)
- [10]非小细胞肺癌患者癌组织、外周血中hnRNP A2/B1 mRNA的表达变化[J]. 龙颖颖,古艳,李羲,颜春松. 山东医药, 2012(34)