一、IGF-Ⅰ治疗新生大鼠缺氧缺血脑损伤对BDNF基因表达的影响（论文文献综述）
刘璐[1]（2021）在《hUC-MSCs对缺氧缺血脑损伤幼鼠学习记忆的影响及机制初步探讨》文中提出背景:缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）是引起婴幼儿神经系统损害的常见致病因素,患儿常出现运动及认知障碍。足够的神经营养支持是治疗HIBD的关键,但目前缺乏有效的神经修复方法,导致越来越多的患儿遗留多种神经系统损害后遗症。近年来干细胞在HIBD的治疗中具有明显的神经营养作用,但具体机制不详。随着研究的深入,发现干细胞的旁分泌机制的重要性,可通过分泌多种营养因子如神经营养因子、血管生成因子等进行损伤修复。其中脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor,BDNF）是大脑中含量最多的神经营养因子,由BDNF介导的BDNF-ERK-CREB信号通路是一条神经营养通路,对学习记忆及认知功能的巩固具有重要意义,其中环磷腺苷效应元件结合蛋白（c AMP-response element binding protein,CREB）对于学习记忆的巩固作用尤为显着,因此也为干细胞治疗HIBD的机制研究提供了新的方向。目的:研究给予人脐带间充质干细胞（Human umbilical cord mesenchymal ste m cells,hUC-MSCs）干预对HIBD幼鼠学习和记忆功能的影响,并初步探讨hUC-MSCs的治疗机制。方法:（1）选取健康7日龄SD大鼠,将幼鼠分为3组（每组10只）:对照组（sham+0.9%Na Cl）,治疗组（HIBD+hUC-MSCs）,损伤组（HIBD+0.9%Na Cl）。通过缺血（右侧颈总动脉结扎离断）+缺氧（8%O2+92%N2）法制备HIBD幼鼠模型,对照组仅行假手术（sham）处理。（2）设建模当日为第0天,第7天,治疗组每只幼鼠经尾静脉注射200μL hUC-MSCs（5×106cells/ml）,对照组和损伤组每只幼鼠分别经尾静脉注射200μL 0.9%Na Cl溶液。（3）第16天开始进行水迷宫实验评估幼鼠学习、记忆功能,持续至第21天。（4）第21天取各组幼鼠脑组织额叶皮层,HE染色观察大脑前额叶皮层组织损伤情况;NeuN免疫组织化学染色检测前额叶皮层神经元的存活情况;细胞凋亡染色检测前额叶皮层神经细胞凋亡情况;蛋白印迹（Western-blot,WB）法检测前额叶皮层BDNF和p-CREB表达水平。结果:（1）建模后幼鼠出现肌张力异常、对侧偏瘫和行走时向对侧转圈等表现可初步判断建模成功。（2）水迷宫实验显示,与对照组相比,造模组幼鼠逃避潜伏时间较对照组增加,穿台次数减少,差异均有统计学意义（P<0.05）;与损伤组相比,治疗组幼鼠逃避潜伏时间较损伤组减少,穿台次数增加,差异均有统计学意义（P<0.05）。（3）HE染色显示,对照组幼鼠前额叶皮层组织形态正常,造模组均有损伤,但治疗组幼鼠前额叶皮层组织损伤较损伤组减轻。（4）免疫组织化学染色显示,与对照组相比,造模组幼鼠前额叶皮层NeuN阳性细胞数减少,差异有统计学意义（P<0.05）;与损伤组相比,治疗组幼鼠前额叶皮层NeuN阳性细胞数明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。（5）凋亡染色显示,与对照组相比,造模组前额叶皮层凋亡神经细胞数明显增多,差异有统计学意义（P<0.05）;与损伤组相比,治疗组幼鼠前额叶皮层凋亡神经细胞数明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）。（6）蛋白印迹法显示,与对照组相比,损伤组前额叶皮层BDNF和p-CREB表达水平明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）;与损伤组相比,治疗组幼鼠前额叶皮层BDNF和p-CREB表达水平增加,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1.hUC-MSCs干预能促进HIBD幼鼠学习、记忆功能的改善。2.hUC-MSCs可通过促进前额叶皮层神经元的存活,减少神经细胞凋亡以减轻HIBD幼鼠大脑损伤。3.hUC-MSCs对HIBD幼鼠学习、记忆功能的改善可能与上调了前额叶皮层BDNF、p-CREB的表达有关。
孔定[2]（2021）在《参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠HIF-1α和VEGF-A表达的影响》文中研究指明目的:探讨参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的作用,以及该作用是否与HIF-1α、VEGF-A的表达有无关系。方法:选取120只SPF级7日龄新生大鼠,将其中的30只大鼠随机设置为空白对照组（B组）,不予任何干预;另外随机选取30只大鼠设置为假手术组（K组）,手术过程仅剥离左颈总动脉而后缝合伤口,正常饲养呼吸空气;余下60只参照经典Rice法制造新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,造模后运用神经功能缺失行为学评分进行判断,符合要求者纳入实验并按照随机数字表法将其分为模型组（M组）、参附注射液治疗组（Z组）。随后将四组新生大鼠根据不同观察时间点再分为6h、12h、24h、72h、168h五个亚组,每组6只。模型组（M组）于缺氧装置中缺氧后按20ml/kg·天的剂量于右侧腹腔注射生理盐水,参附注射液治疗组（Z组）则按20ml/kg·天的剂量于右侧腹腔注射参附注射液。根据相应观察的时间点处死大鼠,称量脑重计算脑含水量,采用荧光定量PCR方法检测大脑皮质中HIF-1α及VEGF-Am RNA表达变化,进行统计学分析,采用HE染色和尼氏染色,在光学显微镜下进行各个组别的脑组织病理形态学观察。结果:1.对比空白对照组及假手术组,模型组及参附注射液治疗组缺氧后大鼠均出现不同程度的神经功能损失（P<0.05）,且有翻身不能、夹尾左旋等现象;2.造模后的脑组织病理切片均出现不同程度的改变,神经细胞排列稀松,尼氏体数量改变等,而对参附注射液治疗组病理切片的观察中发现神经细胞损伤程度较轻;3.对比空白对照组及假手术组脑含水量,模型组及参附注射液治疗组较之均有增加,且参附注射液治疗后的脑含水量较模型组有所下降;4.HIF-1αm RNA在空白对照组中及假手术组中有微量表达,模型组及参附注射液治疗组均较空白对照组和假手术组增多（P<0.05）,且呈相同时间趋势,于6h开始有大量表达,12h持续上升,于24h表达呈高峰,而后72h、168h表达量下降,参附注射液治疗组表达量在每个时间点较模型组增多（P<0.05）;5.VEGF-A m RNA在空白对照组及假手术组中有少量表达,模型组及参附注射液治疗组均较空白对照组和假手术组增多（P<0.05）,且呈相同时间趋势,于6h开始有大量表达,12h持续上升,于24h表达呈高峰,而后72h、168h表达量下降,参附注射液治疗组表达量在每个时间点较模型组增多（P<0.05）。结论:1.参附注射液治疗组较模型组病理损伤明显减轻;2.参附注射液治疗组可能减轻脑损伤急性期脑水肿症状;3.参附注射液在HIE早期起到脑保护作用,可能通过调控HIF-1α/VEGF-A通路,且呈时间相关性。
林爱金[3]（2020）在《骨髓间充质干细胞移植治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤的实验研究》文中研究说明[目的]本实验通过建立新生鼠缺氧缺血性脑损伤（Hypoxic ischemic brain damage,HIBD）模型,采用骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）脑内移植治疗,探讨其对小鼠血脑屏障（Blood brain barrier,BBB）紧密连接蛋白的影响及其对运动、认知功能及焦虑行为的影响,以期为间充质干细胞治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤提供理论依据。[方法]选取出生10天的C57BL/6小鼠随机分为四组,分别为假手术组,缺氧缺血组,安慰剂组,干细胞组。假手术组仅做颈部皮肤切开后缝合。其余三组进行左侧颈总动脉结扎,置于缺氧箱（含有8%氧气和92%氮气的混合气体）中45min。干细胞组造模24小时后通过脑立体定位仪在左侧脑室注射BMSCs,细胞量5×106/ul,5ul/只,注射时间5min,安慰剂组同一位置注射等量生理盐水。于移植后7天,通过透射电镜观察BBB超微结构,免疫印迹、免疫荧光等检测紧密连接蛋白的表达,并在出生21天后通过自由悬挂实验、新事物实验、Y迷宫实验、旷场实验以及高架十字迷宫实验等行为学实验,探究BMSCs对新生鼠HIBD的血脑屏障紧密连接蛋白及行为学的影响。[结果]1.骨髓间充质干细胞治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤对其行为学的影响:1.1上肢运动能力:自由悬挂实验,干细胞组与假手术组比较,上肢抓握能力降低（P<0.05）;缺氧缺血组及安慰剂组相比,前肢抓握能力提高（P1<0.05,P2<0.05）。1.2认知能力:1.2.1 Y迷宫实验,与假手术组相比,干细胞组新异臂停留时间及进入次数均降低,均具有统计学差异（P<0.05）;与缺氧缺血组及安慰剂组相比,干细胞组新异臂停留时间及进入次数均增加,均具有显着性差异（P<0.05）。1.2.2新事物实验,与假手术组比较,干细胞组在新事物停留时间减少,旧事物停留时间增加,物体识别指数降低,均具有统计学差异（P<0.05）;与缺氧缺血组及安慰剂组相比,干细胞组在新事物停留时间增加,旧事物停留时间减少,物体识别指数提高,均具有统计学差异（P<0.05）。1.3焦虑和探索行为:旷场实验,与假手术组比较,干细胞组中央区域总路程、停留时间及进入次数均减少,差异均具有统计学意义（P<0.05）;与缺氧缺血组和安慰剂组比较,干细胞组停留时间延长,进入次数增多,差异均有统计学意义（P<0.05）。2.骨髓间充质干细胞治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤对血脑屏障紧密连接的影响:假手术组血脑屏障紧密连接完好,缺氧缺血组及安慰剂组血脑屏障紧密连接疏松,内皮细胞呈空泡样改变,而经过干细胞治疗后紧密连接疏松程度减轻3.骨髓间充质干细胞治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤对血脑屏障紧密连接蛋白的影响:与缺氧缺血组及安慰剂组相比,干细胞组血脑屏障紧密连接蛋白claudin-5、occludin、caveolin-1表达量增加,具有统计学差异（P<0.05）。[结论]1.新生鼠发生缺氧缺血性脑损伤后运动能力、认知能力下降及出现焦虑行为,骨髓间充质干细胞治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤可以改善运动及认知功能,减少焦虑行为;2.骨髓间充质干细胞治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤,紧密连接蛋白表达增加,促进血脑屏障修复;3.骨髓间充质干细胞治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤改善运动及认知功能,减少焦虑行为可能与其促进血脑屏障修复有关。
马征[4]（2019）在《新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后bFGF对神经元的作用及其机制研究》文中进行了进一步梳理[目 的]探讨新生鼠缺氧缺血性脑损伤（Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）后bFGF对神经元的保护作用及其分子机制,为新生儿缺氧缺血性脑病（Neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy,NHIE）提供潜在治疗靶标的新证据。[方 法]体内实验:建立了新生7日龄Sprague-Dawley（SD）大鼠的缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型,通过脑大体观、TTC染色、Zea-longa评分、HE染色和组织荧光染色观察缺氧/缺血（Hypoxic-ischemic,HI）后大鼠急性期（24h）的脑损伤情况。然后经NSS评分、转棒、水迷宫、矿场及Y迷宫检测大鼠HI后远期（60d）的运动、空间记忆、自主探寻及学习记忆功能是否出现障碍,通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白质印迹法（Western Blot）检测HI后24h大鼠脑组织中bFGF的mRNA和蛋白质相对表达量。体外实验:培养大鼠原代皮质神经元并经氧-葡萄糖剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）处理建立了体外HI模型,并验证了 bFGF的mRNA在体外的相对表达量变化是否与体内相同。把化学合成bFGF-siRNA三个有效片段转染PC12细胞,利用qRT-PCR筛选出最有效干扰片段,然后把最有效的片段转染原代皮质神经元,成功的干扰bFGF,通过MTT检测、细胞免疫荧光染色评价OGD前后bFGF沉默对原代皮质神经元的数量、细胞活力、轴突长度及胞体面积的影响。最后在GENEMANIA网站预测了 bFGF密切相关的分子,经qRT-PCR和Western Blot检测与bFGF相关分子的表达变化。[结 果]体内结果:1、与假手术（Sham）组比较,HI后24h大鼠出现脑肿胀、梗死面积扩大、Zea-longa评分升高（运动能力严重下降）及右侧（梗死侧）皮质神经元的数量减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。2、HI后24h经HE染色发现右侧皮质神经元出现空泡化、核固缩、排列紊乱且胞浆疏松淡染。3、与Sham组相比,HI后60d大鼠的NSS评分升高,转棒的时间变短,在水迷宫找到隐藏在水下平台的时间变长、撤掉台子后跨原平台区域的次数变少、原平台所在象限区滞留的时间和路程变短,在矿场中站立时间和理毛时间变短,在Y迷宫找到食物臂的正确率和时间减少、停留错误臂的错误率和时间延长,差异均有统计学意义（P<0.05）。4、HI后24h大鼠右侧皮质bFGF的mRNA和蛋白质的水平均升高（P<0.05）。体外结果:1、与正常组（Normal组）,缺氧（Hypoxia）后24h和OGD后24h的bFGF mRNA相对表达量显着升高（P<0.05）。2、与阴性对照组（NC组）相比,三个特异性bFGF siRNA片段-F1,F2和F3中F3片段的mRNA相对表达量最低（P<0.05）。3、把F3片段转染原代皮质神经元,结果显示在正常条件和OGD条件下,与NC组相比,bFGF-si组的bFGF mRNA相对表达量均降低（P<0.05）。4、OGD前后bFGF沉默均导致神经元细胞数量减少、细胞活力下降,胞体面积增大和轴突长度缩短,与NC组或Normal组相比均有显着性差异（P<0.05）。5、与OGD+NC组相比,在OGD+bFGF-si组中进一步减少了细胞数量并增加了细胞胞体大小（P<0.05）,但没有减少轴突长度。6、通过GENEMANIA预测出与bFGF密切相关的分子是神经生长因子（NGF）和白细胞介素-1β（IL-1β）。7、正常条件下NGF和IL-1β的mRNA相对表达量在bFGF-si组中较NC组均下调（P<0.05）,并在OGD组中mRNA和蛋白相对表达量较Normal组均上调（P<0.05）。然而,在OGD+bFGF-si组中,与OGD+NC组相比NGF的mRNA和蛋白相对表达量被下调而IL-1β被上调（P<0.05）。[结 论]bFGF表达水平在HI后24h右侧皮质中升高。在OGD条件下,bFGF升高对维持原代皮质神经元的正常细胞数量和形态至关重要,且可能与NGF上调和IL-1β下调有关。该研究的结果将为未来治疗HIE的疗法提供新的见解和分子基础。
尹向云[5]（2018）在《氙气调节脑组织中microRNA-210和HIF-1α对新生大鼠脑白质损伤的保护作用研究》文中认为第一部分3日龄新生大鼠脑白质损伤模型建立的研究目的:通过给3日龄新生大鼠腹腔内注射脂多糖及联合缺氧缺血途径制造新生鼠脑白质损伤（white matter damage,WMD）模型,探讨早产儿脑白质损伤动物模型的建模方法。方法:将3日龄Sprague-Dawley（SD）新生大鼠96只随机分为4组,分别为NS组（n=24）、LPS组（n=24）、NS+HI组（n=24）、LPS+HI组（n=24）。NS组腹腔内注射生理盐水（0.05mg/kg）后不做任何处理;LPS组腹腔内注射脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）（0.05mg/kg）后不进行缺氧缺血（Hypoxia-Ischemia,HI）处理;NS+HI组腹腔内注射等量生理盐水3小时候后,结扎其右侧劲总动脉后置于低氧箱中（8%氧气+92%氮气混合气体）1小时;LPS+HI组腹腔注射LPS（0.05mg/kg）3小时后结扎其右侧劲总动脉后置于低氧箱中（8%氧气+92%氮气混合气体）1小时。上述四组分别于处理后0h、24h、48h、72h各取6只新生鼠行多聚甲醛灌注,取右侧脑室周围脑白质组织,进行脑组织HE染色、TUNEL检测细胞凋亡,明确新生大鼠脑白质损伤情况。结果:（1）HE染色脑组织病理变化:NS组脑组织结构未见细胞坏死;LPS组和NS+HI组大鼠脑组织未见明显的细胞坏死;LPS+HI组新生鼠脑室周围脑白质组织结构疏松化,细胞结构排列紊乱,可见细胞发生核固缩,可见核碎裂。（2）TUNEL染色细胞凋亡变化:NS组几乎无细胞凋亡,LPS组和NS+HI组无明显细胞凋亡;LPS+HI组48h细胞凋亡明显,72h细胞凋亡达高峰。结论:（1）单独腹腔注射小剂量脂多糖或短时间缺氧缺血不能造成新生大鼠脑白质损伤。（2）脂多糖联合缺氧缺血可成功建立新生大鼠脑白质损伤模型。第二部分氙气对新生大鼠脑白质损伤脑组织microRNA-210和HIF-1α表达的影响目的:对3日龄脑白质损伤新生大鼠给予氙气（Xenon,Xe）干预,通过检测脑组织内microRNA-210（mi R-210）及缺氧诱导因子1α（hypoxia induced factor 1α,HIF-1α）表达水平,探讨氙气治疗新生大鼠脑白质损伤的分子基础及神经保护作用机制。方法:将3日龄Sprague-Dawley（SD）新生大鼠120只随机分为3组,分别为NS组（n=24）、LPS+HI组（n=24）、LPS+HI+Xe组（n=72）。NS组腹腔内注射等量生理盐水后不做任何处理;LPS+HI组给予腹腔注射LPS（0.05mg/kg）3小时后结扎其右侧劲总动脉后置于低氧箱中（8%氧气+92%氮气混合气体）1小时,不进行氙气干预。LPS+HI+Xe组给予腹腔注射LPS（0.05mg/kg）3小时后结扎其右侧颈总动脉,置于低氧环境中（8%氧气+92%氮气混合气体）1小时后,随机分成LPS+HI+Xe1组LPS+HI+Xe2组和LPS+HI+Xe3组（每组n=24）。分别于建模后0h、2h和5h开始给予氙气吸入（50%氙气+30%氧气+20%氮气）3h。各组大鼠分别于上述处理后0h、24h、48h、72h各取6只新生鼠给予4%多聚甲醛灌注取脑,右侧脑室周围白质组织行HE染色、TUNEL检测细胞凋亡、实时荧光定量RT-PCR法检测microRNA-210的表达及Western blot检测HIF-1a蛋白含量。结果:（1）HE染色脑组织病理变化:NS组脑组织结构未见细胞坏死;LPS+HI组新生鼠脑室周围脑白质组织疏松化,细胞结构排列紊乱,可见细胞发生核固缩,可见核碎裂;氙气干预各亚组,可见脑白质染色淡染,结构相对较完整,较少细胞变性坏死,病理变化较脑损伤组明显减轻,各亚组之间HE染色脑组织病理变化无明显差异。（2）TUNEL染色细胞凋亡变化:NS组几乎无细胞凋亡;LPS+HI组48h细胞凋亡明显,72h细胞凋亡达高峰;LPS+HI+Xe1组细胞凋亡数目明显减少,差异有统计学意义（p<0.05）。LPS+HI+Xe1组、LPS+HI+Xe2组和LPS+HI+Xe3组细胞凋亡数目无明显差异。（3）RT-PCR检测mi R-210含量:与NS组相比较,LPS+HI组在各时间点,新生大鼠脑室周围组织mi R-210的表达水平均明显增加,差异有统计学意义（p<0.05）;与LPS+HI组相比,LPS+HI+Xe1组脑组织中mi R-210的表达在48h和72h显着升高,差异有统计学意义（p<0.05）,而LPS+HI+Xe2组和LPS+HI+Xe3组脑组织中的mi R-210表达在各时间点差异无统计学意义（p>0.05）;与LPS+HI+Xe1组相比,LPS+HI+Xe2组脑组织中的mi R-210表达在24h及72h显着下降,差异有统计学意义（p<0.05）,LPS+HI+Xe3组脑组织中的mi R-210表达在0h、24h、48h及72h均显着下降,差异有统计学意义（p<0.05）。并且各组中的mi R-210在各时间点的表达水平是先升高后降低,在48小时达高峰。（4）Western blot检测HIF-1α蛋白含量:LPS+HI组新生大鼠在0h、24h、48h及72h脑组织中HIF-1α表达均较NS组显着升高,差异有统计学意义（p<0.05）;与LPS+HI组相比,LPS+HI+Xe1组、LPS+HI+Xe2组和LPS+HI+Xe3组脑组织中HIF-1α水平在0h、24小时和72h均明显升高,差异有统计学意义（p<0.05）。与LPS+HI+Xe1组和LPS+HI+Xe2组相比,LPS+HI+Xe3组脑组织中的HIF-1a表达在24h明显下降,差异有统计学意义（p<0.05）,并且各组中的HIF-1α在各时间点的表达水平是先升高后降低,在24小时达高峰。结论:（1）新生大鼠脑白质损伤后,脑室周围组织HIF-1α的表达增加,mi R-210的表达水平增加。（2）脑白质损伤新生大鼠给予吸入氙气干预后,mi R-210的表达上调,增加并稳定HIF-1α蛋白表达水平,减轻脑白质损伤,与脑损伤时间相关。（3）氙气治疗新生大鼠脑白质损伤时间窗至少为5小时,且越早干预效果越好。
王丹[6]（2018）在《中重度新生儿缺氧缺血性脑病患儿血浆中miRNA表达的变化》文中指出目的筛选出中重度新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）血浆中相关miRNA,分析在合并不同程度多脏器损伤时以及治疗前后miRNA的表达情况,观察miRNA在HIE合并多脏器损伤诊断、治疗和预后中的指导意义。方法收集2013年7月至2016年4月在嘉兴市第二医院新生儿科收治并完成随访的117例HIE患儿血浆样本,根据病情分度选取中重度组48例为病例组,30例健康足月新生儿为健康对照组,依据脏器损伤标准将病例组分为无脏器损伤、1个脏器损伤、≥2个器官损伤三组,利用miRNA芯片检测健康足月新生儿及HIE患儿血浆miRNA表达谱的差异,结合生物学信息分析,从中挑选5个miRNA进行实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）验证,比较各组血浆miRNA表达,并分析与HIE诊断、治疗和预后的关系。采用t检验、x2检验等方法进行统计学分析。结果miRNA芯片表明HIE组共有55种miRNA表达有明显差异,有29种miRNA表达上调,26种表达下调;经实时定量PCR验证,与健康对照组相比,中重度HIE组血浆miR-4472、miR-5195-3p、miR-6794-5p表达水平明显上升,对比治疗前,治疗后中重度HIE组有所下降,差异均有统计学意义（均P<0.05）;miR-4472、miR-5195-3p、miR-6794-5p在HIE合并不同程度脏器损伤时存在差异表达,合并脏器损伤中重度HIE组miR-4472、miR-5195-3p、miR-6794-5p表达水平明显上升,且脏器损伤数目越多,miRNA表达越高,差异均有统计学意义（P<0.05）;且在治疗后各分组间表达也存在差异,合并脏器损伤组上述三种miRNA亦表达上调,差异均有统计学意义（P<0.05）;对比治疗前后,中重度HIE合并脏器损伤时治疗后较前下降,差异有统计学意义（均P<0.05）;miR-4472、miR-5195-3p、miR-6794-5p在中重度HIE患儿合并多脏器损伤时（MODS）时的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.9294,0.9412以及0.9118,其中miR-5195-3p的AUC最大。结论miR-4472、miR-5195-3p和miR-6794-5p在多脏器损伤的中重度HIE患儿血浆中较无或1个脏器损伤组表达明显升高;miR-4472、miR-5195-3p和miR-6794-5p可以作为HIE合并多脏器损伤的血清标志物,以miR-5195-3p诊断价值最大,可预测是否存在MODS,以便早期进行干预;miR-4472、miR-5195-3p和miR-6794-5p可以作为中重度HIE治疗的新靶点。
程萍萍[7]（2017）在《银杏内酯B对HIBD新生大鼠脑细胞凋亡的影响及其机制研究》文中研究指明目的通过制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（Hypoxic ischemic brain damage,HIBD）实验动物模型,同时给予中药银杏内酯B（Ginkgolide B,GB）、PI3K-AKT信号通路抑制剂（LY294002）、MEK-ERK信号通路抑制剂（U0126）进行干预,观察HIBD后各组大鼠脑源性神经生长因子（Brain-derived neutrophic factor,BDNF）、磷酸化-AKT（ser473）[P-AKT（ser473）]、磷酸化-ERK1/2（P-ERK1/2）、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cleaved caspase-3,CC3）的表达水平及神经细胞凋亡情况,探讨银杏内酯B对HIBD后新生大鼠脑BDNF表达的影响,以及PI3K-AKT/MEK-ERK信号传导通路在银杏内酯B抗HIBD新生大鼠神经细胞凋亡中的作用,以期为缺氧缺血性脑损伤治疗开辟新途径和新思路,减少HIBD后遗症的发生。方法首先将160只SPF级新生7日龄SD大鼠按随机数字表法分4组:假手术组（Sham组）、缺氧缺血组（HI组）、GB低剂量组（10mg/Kg）和GB高剂量组（20mg/Kg）,其中,GB治疗组于缺氧缺血后0h、24h经腹腔给药,且各组分别于术后不同时间点（6h、12h、24h、48h）随机处死大鼠各10只,断头取脑,采用聚合酶链反应法检测BDNFmRNA及Caspase-3mRNA的表达水平,筛选出效应强度最佳时间点,即为缺氧缺血后24h,且GB高剂量组效果优于GB低剂量组。然后将另外140只SD大鼠按随机数字表法分为7组:假手术组（Sham组）、缺氧缺血组（HI组）、GB组（20mg/Kg）,LY294002组、GB+LY294002组、U0126组、GB+U0126组,每组各20只。其中,LY294002组和GB+LY294002组均于造模前30min给予LY294002（1.8mg/Kg）,U0126组和GB+U0126组均于造模前30min给予U0126（0.2mg/Kg）;参照经典Rice法制备HIBD实验动物模型,GB组、GB+LY294002组和GB+U0126组均于造模后即刻经腹腔注射银杏内酯B（20mg/Kg）,然后各组于缺氧缺血后24h断头取脑。苏木精-伊红染色法（HE染色）观察脑白质病理改变,原位切口末端标记法法（TUNEL）检测脑神经细胞凋亡情况,同时分别采用免疫组化和Western blotting对脑组织中BDNF、P-AKT（ser473）、P-ERK1/2及CC3蛋白进行定位和定量。数据以sx±表示,采用SPSS17.0软件包进行统计分析,定量资料多组间比较采用方差分析,两两比较采用LSD-t法,以α=0.05为检验水准。结果1聚合酶链反应（PCR）结果银杏内酯B可抑制缺氧缺血后不同时间点大鼠脑组织Caspase-3mRNA上调,同时促进缺氧缺血后BDNFmRNA表达,发挥神经保护功能。具体结果如下:与Sham组比较,缺氧缺血后6 h HI组和两治疗组大鼠脑Caspase-3mRNA开始出现升高,BDNFmRNA开始下降;12h Caspase-3mRNA进一步上升,BDNFmRNA进一步下调,至24 h分别达到峰值和谷值,随后Caspase-3mRNA呈下调趋势,BDNFmRNA也有所回升。但各时间点两治疗组Caspase-3mRNA水平均低于HI组,BDNFmRNA水平均高于HI组,且HIBD后24h差距最明显,GB高剂量组效果优于GB低剂量组。2苏木精-伊红染色（HE）结果银杏内酯B可减轻HIBD新生大鼠神经细胞水肿。具体结果如下:Sham组神经细胞形态结构基本正常,胞浆、胞核分别被染成粉红色与深蓝色;缺氧缺血后24 h,HI组神经细胞水肿较为明显,呈空泡样或气球样改变,同时可见炎性细胞浸润,血管内皮细胞明显肿胀;GB治疗组（20mg/kg）细胞水肿有所减轻,仅少部分细胞出现水泡样改变。3原位切口末端标记法（TUNEL）结果银杏内酯B可减轻HIBD新生大鼠神经细胞凋亡。具体结果如下:Sham组仅可见个别凋亡细胞;与Sham组比较,HI组和GB组（20mg/kg）凋亡细胞计数增加,差异有统计学意义（P<0.01）;与HI组比较,GB组凋亡细胞计数有所降低,差异亦有统计学意义（P<0.01）。4免疫组织化学结果银杏内酯B可抑制缺氧缺血诱导的CC3阳性细胞计数增加,同时上调BDNF和P-AKT（ser473）阳性细胞计数,减少缺氧缺血性脑损伤后神经细胞凋亡水平,且这一作用可被LY294002抑制剂所抑制。具体结果如下:与Sham组比较,HI组大鼠脑BDNF和P-AKT（ser473）阳性表达细胞减少,而凋亡因子CC3阳性表达细胞增多,差异均有统计学意义（P<0.05）;此外,与HI组比较,GB组（20mg/Kg）BDNF和P-AKT（ser473）阳性细胞增多,CC3阳性细胞减少,差异亦均有统计学意义（P<0.05）;然而,各组间大鼠脑P-ERK1/2阳性细胞计数均较少,且差异无统计学意义（P>0.05）。与GB（20 mg/kg）治疗组比较,LY294002组和GB+LY294002组大鼠脑BDNF和P-AKT（ser473）阳性细胞减少,CC3阳性细胞增多,差异均有统计学意义（P<0.05）;而LY294002组和GB+LY294002组相比,上述蛋白阳性细胞计数差异无统计学意义（P>0.05）。与U0126组比较,GB组和GB+U0126组大鼠脑BDNF阳性表达细胞增多,而CC3阳性表达细胞减少,差异均有统计学意义（P<0.05）;与GB组比较,GB+U0126组BDNF及CC3阳性细胞计数无明显变化,而P-ERK1/2阳性细胞数减少,差异有统计学意义（P<0.05）。5蛋白印记结果银杏内酯B可抑制缺氧缺血诱导的CC3蛋白表达水平增加,同时上调脑组织中BDNF和P-AKT（ser473）蛋白表达水平,发挥抗缺氧缺血脑损伤神经细胞凋亡的作用,且这一作用可被LY294002抑制剂所抑制;而P-ERK1/2蛋白表达水平对银杏内酯B功能的发挥无明显的影响。具体结果如下:与Sham组比较,HI组大鼠脑BDNF及P-ATK（ser473）蛋白表达有所下调,凋亡因子CC3表达明显上调,差异均有统计学意义（P<0.05）;与HI组比较,GB组（20mg/Kg）大鼠脑BDNF及P-ATK（ser473）蛋白表达量增多,CC3蛋白表达有所减低,差异亦均有统计学意义（P<0.05）;然而,以上各组P-ERK1/2蛋白表达水平均较低且无明显变化趋势;与GB组（20mg/Kg）相比,LY294002组和GB+LY294002组大鼠脑BDNF和P-AKT（ser473）蛋白表达量明显降低,凋亡因子CC3蛋白含量明显升高,差异均具有统计学意义（P<0.05）,而LY294002组和GB+LY294002组相比,上述蛋白的表达量无明显变化,差异不具有统计学意义（P>0.05）;与U0126组比较,GB和GB+U0126两组大鼠脑BDNF和P-AKT（ser473）蛋白表达水平均上调,凋亡因子CC3蛋白表达水平均下调,差异具有统计学意义（P<0.05）;而U0126组和GB+U0126组大鼠脑P-ERK1/2蛋白表达水平极低,与GB组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论1银杏内酯B能够抑制缺氧缺血后新生大鼠脑组织Caspase-3mRNA上调及BDNFmRNA下调,且于HIBD后24h抑制程度最明显,GB高剂量组效果优于GB低剂量组;2银杏内酯B能够下调缺氧缺血后新生大鼠脑CC3蛋白表达水平,减轻脑损伤后神经细胞凋亡;3银杏内酯B能够促进HIBD后新生大鼠脑BDNF分泌,发挥神经保护作用;4 PI3K/AKT信号通路在银杏内酯B抗缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经细胞凋亡的过程中起着重要作用;而MEK/ERK信号通路对银杏内酯B神经保护作用的发挥无明显的影响。
宋名杨[8]（2016）在《丰富环境对HIBD新生大鼠海马CA1区BDNF及细胞凋亡的影响》文中研究表明目的：观察丰富环境对HIBD新生大鼠海马CA1区BDNF及细胞凋亡的影响,探讨丰富环境治疗HIBD的相关机制。方法：采用随机数字表法将7日龄Sprague-Dawley清洁级新生大鼠分为假手术组、模型组及丰富环境组,各组又分为术后14d、28d两个亚组（n=6）。参照Rice-Vannucci经典方法改良建立新生大鼠HIBD动物模型。模型组及假手术组置于标准环境中饲养,丰富环境组予以丰富环境干预治疗。术后14d、28d应用Morris水迷宫试验检测大鼠学习记忆能力,免疫组化法检测大鼠海马CA1区BDNF蛋白的阳性表达情况,TUNEL法检测海马CA1区细胞凋亡情况。结果：1.各组大鼠学习记忆能力：在术后14d、28d时间点上,与假手术组相比,模型组逃避潜伏期延长（P<0.05）,穿越平台次数减少（P<0.05）,差异具有统计学意义；与模型组相比,丰富环境组逃避潜伏期缩短（P<0.05）,穿越平台次数增多（P<0.05）,差异具有统计学意义。2.各组大鼠BDNF蛋白阳性表达变化：在术后14d、28d时间点上,与假手术组相比,模型组大鼠海马CA1区可见BDNF蛋白阳性表达升高,差异具有统计学意义（P<0.0 5）；与模型组相比,丰富环境组大鼠海马CA 1区BDNF蛋白阳性表达更加明显,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.各组大鼠凋亡细胞阳性表达变化：在术后14d、28 d时间点上,与假手术组相比,模型组凋亡细胞阳性表达升高,差异具有统计学意义（P<0.05）；与模型组相比,丰富环境组凋亡细胞阳性表达显着下降,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：1.丰富环境可以改善HIBD大鼠学习记忆的能力。2.丰富环境可以上调HIBD大鼠海马CA 1区BDNF蛋白表达,下调HIBD大鼠海马CA1区凋亡细胞阳性表达。
田雨光[9]（2016）在《基因修饰脐带间充质干细胞hUC-MSCs-pIGF-1在脑损伤修复中的功能研究》文中研究说明研究背景脑损伤是指来源于外来因素对头部所造成的严重创伤,其预后常常较差,死亡率在4%-7%之间,重度脑损伤的死亡率高达50%-60%。常见的脑损伤包括新生儿缺血缺氧性脑损伤（Neonatal hypoxic ischemic brain damage,NHIBD）、高原缺氧缺血脑损伤（Plateau hypoxic ischemic brain damage,PHIBD）、放射性脑损伤（Radiation brain injury,RBI）等。新生儿缺血缺氧性脑损伤是导致新生儿死亡的主要原因,常常可以引起慢性神经系统损伤。该病病死率高,病情重,致残率高。随着生命维持技术和新生儿抢救水平的提高,重度窒息儿、早产儿和各种脑部损伤的新生儿存活率大大提高,这使得NHIBD的患病率不仅没有减少,反而有升高的趋势,目前已成为新生儿残疾的主要原因,对新生儿身心发育和生活质量造成了恶劣的影响。高原缺氧缺血脑损伤是一种高原特发病,常常发生在高海拔地区。因其起病急、并发症多、病情重、处理不及时、发病快、病死率极高,因此是一种严重威胁急进高原人群生命安全的危重病。随着高原地区的开发建设,急进高原的人数急剧增加,高原脑水肿的发病人数和死亡人数越来越多,不仅制约了高原地区的发展和建设,也严重影响高原居民的健康和生命安全。放射性脑损伤是指放射性疗法在治疗脑部疾病或者人体接触高剂量射线辐射时所产生的副作用,可引起急性和慢性毒性,使有诸如疲劳、头痛、呕吐、腹泻等不良反应,并会伴有免疫功能退化、白细胞数量下降等并发症,导致一些患者不得不放弃治疗。现在对于放射性脑损伤的发生机制还不是很清楚,所以缺少有效的治疗方法和治疗药物。神经细胞和星形胶质细胞被证实在哺乳动物大脑中可以发挥自我更新的功能,因此神经生物学的研究成为中枢神经系统损伤的研究热点,其中细胞替代疗法已经成为商业活动和研究机构所关注的一大焦点。越来越多的证据表明,通过移植干细胞治疗受损部位可能是治疗脑损伤后功能障碍的最有希望的治疗方案之一。当疾病或创伤所引起的神经功能缺失可以通过引入新的细胞来替代丧失的神经元和胶质细胞,或者引入的细胞可以通过神经营养作用来增加受损神经细胞的可塑性以及存活率来发挥作用,也即所谓的替代疗法。现在各种类型的干细胞,如神经干细胞,胚胎干细胞和间充质干细胞已经被用于移植研究,并进行相应的中枢神经系统损伤治疗。胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESC）由于存在明显道德伦理障碍和胎儿组织来源不足等问题,尽管移植后对脑损伤的大鼠功能恢复有治疗作用,但是因为其在体内容易成瘤限制了其在人体当中的应用。最新的研究结果表明诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells,iPS）与ESC一样,具有全能性,但是它同样存在体内形成肿瘤的危险。神经干细胞（Neural stem cells,NSC）是一种用来移植治疗脑损伤的理想细胞,它既可以分泌多种神经营养因子又可以分化成神经细胞,但是大量神经干细胞的来源问题仍然限制了它的应用。人间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）被认为是良好的脑损伤移植治疗的备选细胞。在临床研究和实验中骨髓间充质干细胞（bone mairow mesenchymal stem cells,BM-MSC）是目前使用较为广泛的种子细胞。但抽取骨髓是一个具有高度侵入性的过程中,并且有损伤存在感染的风险,而且其扩增能力和分化的潜能都会随着年龄的增加而降低,因此寻找BM-MSC的替代细胞已经成为一个研究热点。人脐带间充质干细胞（Umbilical cord Mesnchymal Stem Cells,UC-MSCs）的发现给脑损伤患者带来了新的希望。UC-MSCs具有多向分化的潜力。在一定条件诱导下,可分化成脂肪细胞、心肌细胞、成骨细胞、软骨细胞、神经细胞等,是理想的组织工程种子细胞,具有很强的定向分化和增殖能力。与其他类型干细胞相比较,脐带间充质干细胞具有以下优点:更原始的干细胞,更强的增殖分化能力;免疫原性弱;干细胞易于分离;安全性较高。目前脐带间充质干细胞已成为国内外研究的热点。对于MSCs的应用研究主要集中在以下两个方面:一是通过体外分离培养并大量扩增MSCs并将其直接移植到神经系统病变部位,从而起到修复作用;二是将MSCs作为载体,将有治疗作用的特定基因克隆到MSCs而制作基因修饰间充质干细胞,通过移植达到基因治疗和细胞替代的双重功效。研究表明胰岛素样生长因子-l（Insulin-like growth factor-1,IGF-1）是一种多肽类激素,由70个氨基酸组成的单链碱性多肽分子,分子量为7649。它来源于体内许多细胞,通过自分泌、旁分泌和内分泌等多种机制与IGF-1受体（IGF-1R）结合从而发挥多种功能。最近研究发现,IGF-1不仅对大脑发育、生长、髓鞘的形成有重要的作用,还能够在体外诱导血管和神经内皮细胞的分化、增殖及调节细胞活性,对许多中枢疾病发挥着保护作用,因此越来越得到广大国内外学者的关注。基因修饰MSCs治疗作为基因介入治疗方法的一种,它可以通过基因修饰的方法使间充质干细胞表达外源性基因,然后将其移植到受损部位分泌大量治疗性神经营养因子,以防止神经元死亡并促进神经再生与功能恢复的一种治疗方法。本文选择IGF-1对MSCs进行基因修饰构造基因工程脐带间充质干细胞,通过细胞移植探讨对脑损伤修复的作用及其机制的研究尚无报道。本课题旨在寻求新的MSCs来源,构造基因工程修饰脐带间充质干细胞hUC-MSCs-pIGF-1,通过对移植hUC-MSCs-pIGF-1的NHIBD、PHIBD、RBI大鼠模型以及RBI西藏小型猪模型进行效果评估,探讨基因修饰脐带间充质干细胞hUC-MSCs-pIGF-1对脑损伤修复的作用,从而为临床应用hUC-MSCs-pIGF-1治疗脑损伤奠定理论基础。研究目的1、对西藏小型猪IGF-1基因进行系统的研究,为下一步基于西藏小型猪IGF-1基因的研究提供分子基础和实验依据。2、研究人脐带来源的间充质干细胞体外培养及鉴定的方法,观察脐带间充质干细胞传代、分化和增殖的规律,建立合适的体外稳定培养体系。3、化学合成法构建质粒pIRES2-EGFP-IGF-1并通过慢病毒转染MSCs以建立基因修饰后的hUC-MSCs-pIGF-1干细胞系,为脑损伤修复的治疗打下基础。4、构建SD大鼠新生儿缺血缺氧模型、高原缺氧缺血模型、放射脑损伤模型以及西藏小型猪放射脑损伤疾病动物模型。5、探讨基因修饰脐带间充质干细胞hUC-MSCs-pIGF-1在脑损伤修复中的功能,为临床应用基因修饰干细胞移植治疗脑损伤提供理论支持。研究方法1、采用PCR-SSCP和PCR产物测序的方法进行西藏IGF-1基因的分型及SNP位点的寻找。同时对西藏小型猪IGF-1基因进行克隆测序分析,通过实时荧光定量PCR对不同年龄段西藏小型猪IGF-1基因在脑内的相对表达量进行测定分析。2、人脐带间充质干细胞的分离及鉴定:购自广东省脐带血造血干细胞库的MSCs细胞,以1 × 106/ml密度接种到培养瓶中,加入含有B27、EGF和bFGF的无血清DMEM/F12培养基,37℃、5%条件下培养细胞,3天后半量换液。待细胞培养至第7天,离心收集间充质干细胞,使用胰蛋白酶消化法和机械法相结合的方法进行传代,以5×105/ml将传代后的间充质干细胞接种于新培养瓶,置37℃、5%条件下继续培养。倒置显微镜动态观察细胞生长情况。采用流式细胞仪对脐带间充干细胞 CD90 FITC,CD105 PE,CD73 PE,CD45 FITC,CD34进行表面抗原检测。3、通过基因合成的方法合成质粒pIRES2-EGFP-IGF-1,并进行测序鉴定。通过慢病毒转染脐带间充质干细胞,建立基因修饰间充质干细胞hUC-MSCs-pIGF-1,利用体外RT-PCR的方法检测IGF-1的表达。4、新生SD大鼠缺血缺氧脑病模型的制备及治疗效果评价:通过结扎单侧颈动脉构建新生SD大鼠缺血缺氧脑病模型,模型构建成功后在脑立体定位仪引导下向左侧侧脑室注射MSCs。7d龄SPF级SD大鼠85只,其中取20只为正常对照组65只进行HIBD动物模型制作。将造模后存活的60只大鼠随机分成模型对照组,MSCs移植组和MSCs-IGF-1移植组,每组20只,每一组再随机分成5d组,7d组,14d组,21d组,每组5只。采用行为学检测（水迷宫）的方法对所有动物进行检测;HE染色结果观察缺血区细胞形态和结构;通过Nestin免疫细胞化学染色观察间充质干细胞增殖,分化及在大鼠脑内分布情况;Brdu荧光标记法观察侧脑室阳性细胞的表达情况;统计相关区域阳性细胞数。5、SD大鼠高原脑损伤模型的制备及治疗效果评价:48只10d龄SD大鼠,采用完全随机方法分成对照组（8只）、2000 m海拔高原组（8只）、4000 m海拔高原组（8只）、6000m海拔高原组（24只）,其中6000m高原组又分为实验组、MSCs移植组和MSCs+IGF-1移植组,每组8只。实验组大鼠置于高原低压环境模拟仓结合运动的方法制作新生儿高原脑缺氧缺血模型,运动方式为在舱内游泳槽进行60 min/d的游泳运动,且在高原低压环境模拟仓内生活时间每天不得少于20小时。每组大鼠分别在第3、7、11、15d用Zea Longa 5分制评分标准进行行为学评分并且于第15d采集静脉血,在扫描电镜下观察红细胞形态。每组处死后取脑组织进行HE染色和TTC染色。TTC观察梗塞面积的变化;通过Nestin免疫细胞化学染色观察间充质干细胞增殖,分化及在大鼠脑内分布情况;Brdu荧光标记法观察侧脑室阳性细胞的表达情况;统计相关区域阳性细胞数。6、SD大鼠放射脑损伤模型的制备及治疗效果评价:54只成年雄性SD大鼠随机分为4个实验组和对照组。每组各9只,实验组腹腔注射3%戊巴比妥后分别接受2Gy、5Gy、10Gy单次全身X线照射,其中10Gy组又分为实验组、MSCs移植组和MSCs+IGF-1移植组,每组9只。并于放射后72h处死,取脑组织进行组织病理的观察。扫描电镜下观察红细胞形态。通过Nestin免疫细胞化学染色观察间充质干细胞增殖,分化及在大鼠脑内分布情况;Brdu荧光标记法观察侧脑室阳性细胞的表达情况;统计相关区域阳性细胞数。7、西藏小型猪放射脑损伤模型的制备:36只成年雄性西藏小型猪随机分为实验组和对照组。对照组9只,实验组27只,接受10 Gy单次X线照射。实验组的西藏小型猪又被分为3个亚组,每组9只,分别于放射后6h,24h,72h进行PET/CT扫描然后处死取脑组织进行组织病理及超微结构的观察。免疫组化法检测脑内IGF-1和IGF-1R的表达情况。研究结果:1、所测序列中西藏小型猪IGF-1存在1个突变位点T40C。将GenBank中搜索到猪的IGF-1基因的cDNA序列与西藏小型猪IGF-1基因的编码区与进行比对分析发现,在440bp、455pb处发生了 G→A、C→T的突变,该位点的突变引起了组氨酸变成精氨酸、亮氨酸转变成丝氨酸。同时研究发现IGF-1基因在0、0.1、0.25、0.5、1、2、3岁各个年龄阶段脑组织中均有表达。且IGF-1基因在0.25岁时达到峰值。2、hUC-MSC首次传代后发现细胞生长速度较原代细胞快,大约在第3d可以达到80%汇合,继续进行传代培养。当细胞传到第3代后细胞形态基本保持一致。冻存细胞后复苏成活率可达90%,复苏后细胞状态未见明显改变。细胞表面抗原检测发现hUC-MSCs表达间充质干细胞的表面抗原（CD90,CD105,CD73）,不表达血液和内皮系统的表面抗原（CD34和CD45）。说明传代的MSC具有间充质干细胞的抗原特性。3、目的基因IGF-1与质粒pIRES2-EGFP连接产物pIRES2-EGFP-IGF-1经XhoI/EcoRI双酶切后,1%琼脂糖凝胶电泳显示在5236bP处和579bp处各有一条亮带,结果与质粒载体及目的基因大小相符,证明所构建的载体pIRES2-EGFP大小及方向正确。同时测序发现目的基因符合genebank序列表明表达载体pIRES2-EGFP-IGF-1成功构建。pIRES2-EGFP-IGF-1质粒转染脐带间充质干细胞后48小时,荧光共聚焦拍照可见明显的GFP的细胞。实时荧光定量PCR显示转染后IGF-1的相对表达量具有显着性差异（P<0.05）,表达均有上调的现象,且pIRES2-EGFP-IGF-1转染的脐带间充质干细胞的表达量更高。4、HE染色结果和水迷宫结果显示单侧结扎颈总动脉和低氧处理后可成功构建HIBD模型。MSCs-IGF-1移植HIBD动物模型后,用免疫荧光对BrdU示踪结果显示,MSCs移植组和MSCs-IGF-1移植组均可见到BrdU 阳性细胞,且移植7d后,MSCs移植组和MSCs-IGF-1移植组间进行比较,BrdU 阳性率差异显着。Nestin免疫组化方法提示MSCs-IGF-1移植组和MSCs移植组Nestin阳性细胞上升较快,移植后14d时达峰,后逐渐下降。移植7d后,各组间Nestin 阳性细胞表达量均有显着性差异。水迷宫结果显示MSCs-IGF-1移植组明显优于模型对照组。5、HE染色、神经病学评分、TTC染色及血细胞扫描电镜结果表明高原结合运动可以成功构建高原缺氧缺血脑损伤动物模型,且在6000m海拔高度脑损最为明显。MSCs-IGF-1移植高原脑损伤动物模型后在海拔6000m组MSCs移植组和MSCs-IGF-1移植组均可见到BrdU 阳性细胞。移植11d后,MSCs移植组和MSCs-IGF-1移植组间进行比较,BrdU 阳性率差异显着。移植7d后,各组间Nestin 阳性细胞表达量均有显着性差异。6、HE染色、血细胞扫描电镜结果表明当辐射剂量在5Gy时大鼠便可出现明显的临床症状,但脑部HE染色结果提示大脑部分损伤较轻,选用10Gy剂量组后大鼠脑部损伤明显,有典型的病理变化。因此选用10Gy作为构建放射脑损伤模型的标准。MSCs移植组和MSCs-IGF-1移植组均可见到BrdU阳性细胞,移植48h后,MSCs移植组和MSCs-IGF-1移植组间进行比较,BrdU 阳性率差异显着,且各组间Nestin阳性细胞表达量均有显着性差异。7、采用10Gy全身放射构建模型后,HE结果和扫面电镜结果均可见放射后72h淋巴结明显破坏,PET/CT结果显示在1OGy的辐射剂量下观察时间点因素对脑FDG摄取的影响具有显着性差异,SUV值与时间成正比。免疫组化结果显示放射性损伤后10Gy照射后,与对照组比较,西藏小型猪脑组织中IGF-1表达水平显着下调（p<0.05）,而IGF-1R的表达水平与对照组比较没有统计学差异（p>0.05）,该结果提示IGF-1在西藏小型猪脑损伤动物模型中有着重要作用为下一步实验开展小型猪细胞移植做铺垫。
房明东[10]（2016）在《基于“肾—脑”相关理论探讨六味地黄汤对新生大鼠HIBD的作用机制研究》文中研究表明研究背景新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxiac-ischemic encephalopathy,HIE）是指由于围生期窒息引起的缺氧缺血性脑损伤（hypoxiac-ischemic brain damage,HIBD）,临床上表现为一系列中枢神经异常症状[1],如意识障碍、惊厥、肌张力改变等,并且在治疗后常遗留不同程度的神经系统后遗症。目前国内外对HIE的发病机制仍然不完全清楚,能量代谢障碍、氧自由基损伤、钙离子超载、兴奋性氨基酸的毒性作用、炎症反应、细胞凋亡等机制是目前研究较多的方面。治疗方面,在基本的“三支持”、“三对症”之上,除了传统的高压氧、亚低温、脑细胞代谢激活剂等疗法和药物治疗之外,神经营养因子、自由基清除剂、促红细胞生成素、干细胞移植疗法等新兴药物和疗法的研究正受到大家的青睐,但并未在临床广泛使用。中医药治疗HIE的报道日渐增多,也取得了一些疗效,比如丹参注射液、川芎嗪等有大量报道,证明其临床疗效。然而却日渐陷入“中药西用”的境地：多数的报道都是运用活血化瘀药治疗HIE或者单纯依据中药药理指导临床,缺少了中医辨证论治的理念；此外,将HIE病位限定于脑,也缺少了中医的整体观念。而中医“肾-脑”相关既有丰富理论支持,又有广泛临床实践,所以,本研究尝试用补肾代表方六味地黄汤以治疗西医学脑病HIE。研究目的跳出以往中医药研究HIE的思路和模式,基于中医学藏象学说中“肾与脑”的密切联系,运用六味地黄汤治疗新生大鼠HIBD,观察其治疗效果并探讨其作用机制,不仅为中医“肾-脑”相关、上病下取等理论提供了科学依据,也为中医学治疗现代脑病提供新的思路和治疗模式。文献研究文献研究列举了与HIE相似的中医儿科病名,如胎弱、梦生,等等,对其病因病机、治疗原则进行阐述。进而认为这些胎病的发生主要有两个原因：胎内因素和外感因素。而内因是本,外因是标,所以补肾固本、填精益髓、调理内因,是治疗胎病的最佳手段。在此基础上,从历史源流、物质基础、经络联属、临床研究、实验研究五个方面充分论证了“肾-脑”相关的合理性。最后对于六味地黄汤的现代药理研究以及其治疗现代脑病的进展也进行了论述。实验研究实验一：健康SPF级7日龄SD大鼠88只,雌雄不限,体重15±2克。实验动物随机分为2组,第一组56只,运用经典Rice-Vannucci模型方法进行常规造模处理；第二组32只,为实验对照组。第一组造模成功后再随机分为两组,即HIBD模型组（A组,n=32）、六味地黄汤组（C组,n=24）,实验对照组设为假手术组（B组,n=32）。A组和B组再随机分成4个亚组,每组分别在造模完成2h、Id、3d、7d进行动物处死。C组则随机分为3个亚组,分别在造模完成给药后1d、3d、7d进行动物处死。中药组灌胃量为0.3ml/10g体积,每天1次,连续灌胃7d。模型组和假手术组则予同等剂量生理盐水灌胃。密切观察各组大鼠行为能力变化情况。各组分别在预先设定时间点断头取脑,石蜡切片行HE染色观察脑组织的病理变化。实验二、实验三在分组、造模灌胃方法、处死时间上均同实验一。实验二在断头取脑之前采用股动脉采血,分离血清。采用酶联免疫吸附法（Elisa）测定不同时间点样品中丙二醛,超氧化物歧化酶,神经元特异性烯醇化酶（MDA, SOD, NSE）的水平。实验三则采用逆转录聚合酶链式反应法（RT-PCR）测定脑组织中HIF-1α的基因表达情况。实验结果1.行为能力改变：造模过程中以及造模后都会出现很多行为能力的改变,尤其是对侧肢体运动障碍,夹尾右旋,后期眼睑下垂、睁眼困难等改变具有特征性。假手术组无类似情况。药物组初期也有行为能力的改变,而后期逐渐消失2.HE染色：模型组病侧海马锥体细胞数量减少,排列紊乱,细胞核溶解、消失,细胞体变小,海马区域部分细胞可见水肿、空泡样变；假手术组也存在很轻微的病理改变,后期逐渐修复。药物组在初期的病理改变同模型组,后期逐渐恢复,与假手术组接近。3.NSE：模型组血清NSE水平2h即明显升高,且随时间逐渐升高,假手术组变化不明显,中药组则逐渐下降,与模型组相比,第3d、7d差异有统计学意义（p<0.05,p<0.01）4.MDA：模型组与假手术组MDA水平在2h无明显变化,1d时中药组与模型组相比有显着差异（p<0.01）,而与假手术组接近,但在此后各时间点中药组与模型组差异不明显。5. SOD:SOD水平在2h无明显变化,而在1d、3d、7d时,模型组与中药组相比,具有显着差异（p<0.01）,中药组SOD水平与假手术组接近。6. HIF-1 α:模型组HIF-1α的基因表达在2h即增强,1d时下降,随后又逐渐上升。与中药组相比,在3d、7d时具有显着差异（p<0.05）。中药组HIF-1α基因表达水平与假手术组接近。研究结论1. “肾-脑”相关,补肾治脑,具有丰富的理论支持和广泛的临床实践,这为六味地黄汤治疗治疗HIBD提供了理论支持。2.六味地黄汤能促进病变脑组织的修复,降低血清NSE浓度,提高脑组织SOD活性,并能下调HIF-1α的基因表达,对MDA含量也有一定的下调作用。3.六味地黄汤对新生大鼠HIBD损伤确有治疗作用。其作用机制与HIF-1α有关：通过提高SOD活性,降低MDA水平,然后通过二者对HIF-1α的调节机制从而下调HIF-1α的表达,保护缺氧缺血脑组织,促进受损神经元修复,降低血清NSE浓度。
二、IGF-Ⅰ治疗新生大鼠缺氧缺血脑损伤对BDNF基因表达的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、IGF-Ⅰ治疗新生大鼠缺氧缺血脑损伤对BDNF基因表达的影响（论文提纲范文）
（1）hUC-MSCs对缺氧缺血脑损伤幼鼠学习记忆的影响及机制初步探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩略词表 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 实验动物及饲养 |
| 1.2 实验仪器及耗材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2.方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 HIBD幼鼠模型建立 |
| 2.3 hUC-MSCs治疗 |
| 2.4 水迷宫实验 |
| 2.5 脑组织取材及石蜡切片制备 |
| 2.6 HE染色 |
| 2.7 免疫组织化学染色 |
| 2.8 TUNEL凋亡染色 |
| 2.9 组织蛋白提取及冻存 |
| 2.10 组织蛋白浓度检测 |
| 2.11 蛋白印迹法(WB) |
| 3.统计分析 |
| 结果 |
| 1.实验时间流程图 |
| 2.hUC-MSCs干预促进学习记忆功能改善 |
| 3.hUC-MSCs干预减轻脑组织损伤 |
| 4.hUC-MSCs干预促进神经元的存活 |
| 5.hUC-MSCs干预减轻神经细胞凋亡 |
| 6.hUC-MSCs干预上调BDNF、p-CREB的表达 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 BDNF-ERK-CREB在干细胞治疗脑损伤疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（2）参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠HIF-1α和VEGF-A表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词 |
| 引言 |
| 第一部分 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 仪器与设备 |
| 1.2 主要实验试剂及来源 |
| 1.3 实验动物 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 造模 |
| 2.3 Zea-Longa神经功能损失评分 |
| 2.4 给药方案 |
| 2.5 采取标本 |
| 2.6 脑组织病理观察 |
| 2.7 检测标本HIF-1α和VEGF-Am RNA的表达 |
| 2.8 脑含水量比较 |
| 2.9 统计学分析 |
| 第二部分 实验结果 |
| 1 新生大鼠造模后的评价 |
| 1.1 缺氧时形态观察 |
| 1.2 神经功能评估 |
| 2 脑含水量结果 |
| 3 脑组织病理切片观察 |
| 3.1 HE染色观察 |
| 3.2 尼式染色观察 |
| 4 脑组织HIF-1α和VEGF-AmRNA的相对表达量 |
| 讨论 |
| 1 中医对于新生儿缺氧缺血性脑病的认识 |
| 2 新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型的建立与评估 |
| 3 参附注射液在新生儿缺氧缺血性脑病的研究 |
| 4 HIF-1α/VEGF-A信号通路在缺氧缺血脑损伤中的作用 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 传统医学与现代医学对新生儿缺氧缺血性脑损伤的研究进展 |
| 参考文献 |
（3）骨髓间充质干细胞移植治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 血脑屏障与新生儿缺氧缺血性脑损伤关系的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（4）新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后bFGF对神经元的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表(以字母顺序排列) |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 脑缺氧缺血诱导新生7天大鼠急性期、远期脑损伤及bFGF表达升高 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 HI诱导新生7天大鼠急性期神经功能障碍、脑组织肿胀及梗死 |
| 2 HI诱导新生7天大鼠急性期梗死侧皮质神经元形态及数量的改变 |
| 3 HI诱导新生7天大鼠远期空间记忆、运动功能、自主探寻和学习记忆能力受损 |
| 4 HI后24h bFGF在梗死侧皮质中mRNA和蛋白质的相对表达量升高 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 bFGF在体外OGD条件下对原代皮质神经元有保护作用并且可能与NGF和IL-1β的表达变化有关 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 OGD诱导原代皮质神经元中bFGF表达量增加 |
| 2 成功筛选有效的bFGF siRNA片段 |
| 3 成功在原代皮质神经元中干扰bFGF的表达 |
| 4 OGD或bFGF沉默可以诱导原代皮质神经元的细胞数量和细胞活力减少 |
| 5 在OGD条件下,bFGF干扰影响了原代皮质神经元的形态和神经元轴突的生长 |
| 6 NGF和IL-1β在正常和OGD条件下bFGF表达干扰后的神经元中表达动态 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 新生儿缺氧缺血性脑病中细胞因子治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（5）氙气调节脑组织中microRNA-210和HIF-1α对新生大鼠脑白质损伤的保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 3日龄新生大鼠脑白质损伤模型建立的研究 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品和试剂 |
| 1.3 主要实验仪器及设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验动物的分组与处理 |
| 2.2 HE染色及TUNEL检测评价脑白质损伤 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 氙气对新生大鼠脑白质损伤脑组织microRNA-210和HIF-1α表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品和试剂 |
| 1.3 主要实验仪器及设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验动物的分组与处理 |
| 2.2 HE染色及TUNEL检测评价脑白质损伤 |
| 2.3 RT-PCR检测miR-210 的表达 |
| 2.4 WB检测HIF-1α蛋白的表达水平 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
（6）中重度新生儿缺氧缺血性脑病患儿血浆中miRNA表达的变化（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 主要试剂和仪器 |
| 1.3 研究方法 |
| 1.4 统计学处理 |
| 结果 |
| 2.1 病例组与对照组基本数据 |
| 2.2 芯片检测结果 |
| 2.3 HIE患儿差异表达的miRNA |
| 2.4 生物学信息分析结果 |
| 2.5 实时PCR结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 附录A 个人简历 |
| 附录B 科研成果 |
| 附录C 综述 |
| 参考文献 |
（7）银杏内酯B对HIBD新生大鼠脑细胞凋亡的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略语对照 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 主要仪器设备 |
| 2.2 主要试剂及耗材 |
| 2.3 主要试剂配制 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 实验动物及分组 |
| 3.2 HIBD动物模型制备 |
| 3.3 各药物的应用 |
| 3.4 标本的取材及制备 |
| 3.5 实时荧光定量PCR |
| 3.6 苏木素-伊红（Hematoxylin-eosin，HE）染色 |
| 3.7 免疫组织化学染色 |
| 3.8 原位末端切口标记（Terminal deoxynucleotidyl transferase mediated d UTP nick end labeling，TUNEL）法检测 |
| 3.9 Western blotting实验 |
| 3.10 统计学分析 |
| 4 结果 |
| 4.1 模型鉴定 |
| 4.2 PCR结果 |
| 4.3 HE染色结果 |
| 4.4 TUNEL染色结果 |
| 4.5 免疫组织化学结果 |
| 4.6 Western blotting结果 |
| 5 讨论 |
| 5.1 Caspase-3 与脑损伤 |
| 5.2 BDNF与脑损伤 |
| 5.3 PI3K-AKT信号通路与脑损伤 |
| 5.4 MEK-ERK信号通路与脑损伤 |
| 5.5 银杏内酯B在脑损伤中的应用 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述部分 脑源性神经生长因子在脑损伤后神经细胞凋亡中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介及攻读硕士期间发表的论文和研究成果 |
| 致谢 |
（8）丰富环境对HIBD新生大鼠海马CA1区BDNF及细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 1 现代医学对HIBD的认识 |
| 1.1 病因学 |
| 1.2 发病机制 |
| 1.3 HIBD的治疗 |
| 2 丰富环境与HIBD |
| 2.1 突触重塑 |
| 2.2 神经元 |
| 2.3 神经营养因子 |
| 3 BDNF与HIBD |
| 4 细胞凋亡与HIBD |
| 实验研究 |
| 1 材料及方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 指标检测及方法 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组大鼠学习记忆能力 |
| 2.2 各组大鼠海马CA1区BDNF的阳性表达结果 |
| 2.3 各组大鼠海马CA1区细胞凋亡结果 |
| 讨论 |
| 1 HIBD动物模型的选择及建立 |
| 1.1 实验动物及日龄的选择 |
| 1.2 HIBD模型的选择 |
| 2 干预方法的选择及制定 |
| 3 丰富环境对HIBD大鼠学习记忆能力的影响 |
| 4 丰富环境对HIBD大鼠海马CA1区BDNF的影响 |
| 5 丰富环境对HIBD大鼠海马CA1区细胞凋亡的影响 |
| 6 本课题的不足及展望 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
| 个人简介 |
（9）基因修饰脐带间充质干细胞hUC-MSCs-pIGF-1在脑损伤修复中的功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 西藏小型猪IGF-1基因功能的研究 |
| 第一节 西藏小型猪IGF-1基因多态性的研究 |
| 第二节 西藏小型猪IGF-1基因的克隆测序分析 |
| 第三节 西藏小型猪IGF-1基因在不同年龄阶段脑组织中表达的差异分析 |
| 参考文献 |
| 第二部分 慢病毒载体转染hUC-MSCs构建基因工程干细胞 |
| 第一节 MSCs的分离、培养和鉴定 |
| 第二节 IGF-1基因质粒表达载体pIRES2-EGFP-IGF-1的构建及转染 |
| 参考文献 |
| 第三部分 脑损伤动物模型的构建及治疗效果评价 |
| 第一节 新生大鼠缺血缺氧模型的制备及治疗效果评价 |
| 第二节 高原大鼠缺氧缺血模型的制备及治疗效果评价 |
| 第三节 大鼠急性放射性脑损伤模型的制备及治疗效果评价 |
| 第四节 西藏小型猪急性放射性脑损伤模型的制备及模型评价 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文 |
| 英文缩写词表 |
| 致谢 |
（10）基于“肾—脑”相关理论探讨六味地黄汤对新生大鼠HIBD的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写一览表 |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1. 现代医学对HIE的认识及治疗现状 |
| 1.1 定义 |
| 1.2 流行病学研究 |
| 1.3 HIE的诊断标准及临床分度 |
| 1.3.1 国际诊断标准 |
| 1.3.2 国内诊断标准 |
| 1.3.3 临床分度 |
| 1.4 HIE的发病机制 |
| 1.4.1 能量代谢障碍 |
| 1.4.2 氧自由基损伤 |
| 1.4.3 钙离子超载 |
| 1.4.4 兴奋性氨基酸的毒性作用 |
| 1.4.5 细胞凋亡 |
| 1.4.6 炎症反应及细胞因子的作用 |
| 1.4.7 一氧化氮(NO)的作用 |
| 1.5 HIE的治疗现状 |
| 1.5.1 基础治疗：三支持和三对症 |
| 1.5.2 其他疗法 |
| 1.5.3 小结 |
| 2. 中医药对HIE的认识及治疗 |
| 2.1 与HIE相似的中医病名 |
| 2.1.1 胎怯、胎弱 |
| 2.1.2 不啼、梦生、草迷、闷脐生 |
| 2.1.3 胎惊、胎搐 |
| 2.1.4 五软五迟 |
| 2.1.5 小结 |
| 2.2 中医药治疗HIE的现状 |
| 2.2.1 单味中药提取物 |
| 2.2.2 中药复方制剂 |
| 2.2.3 推拿 |
| 2.2.4 针刺 |
| 2.2.5 小结 |
| 2.2.6 中医药治疗HIE的研究展望 |
| 3. 中医“肾-脑”相关性研究 |
| 3.1 “肾-脑”相关的历史源流 |
| 3.2 “肾-脑”相关的物质基础 |
| 3.3 “肾-脑”相关的经络联属 |
| 3.4 “肾-脑”相关的临床研究 |
| 3.5 “肾-脑”相关的实验研究 |
| 3.6 小结 |
| 4. 六味地黄汤与现代脑病的研究 |
| 4.1 六味地黄汤简介 |
| 4.2 六味地黄汤治疗脑病的现代药理学基础 |
| 4.3 六味地黄汤治疗现代脑病的研究 |
| 4.4 小结 |
| 第二部分 动物实验研究 |
| 实验一 SD新生大鼠HIBD模型的制备、鉴定以及药物对其的影响 |
| 1. 前言 |
| 2. 实验材料及仪器 |
| 3. 实验方法 |
| 3.1 HIBD动物实验模型制作 |
| 3.2 造模后处理 |
| 3.3 灌胃 |
| 3.4 标本提取 |
| 3.5 HE染色方法 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 动物行为学观察 |
| 4.2 脑组织病理学观察 |
| 5. 讨论 |
| 实验二 六味地黄汤对新生大鼠HIBD后NSE、MDA、SOD的影响 |
| 1. 前言 |
| 1.1 氧自由基损伤与新生大鼠HIBD |
| 1.2 MDA、SOD与新生大鼠HIBD |
| 1.3 NSE与新生大鼠HIBD |
| 2. 实验材料及仪器 |
| 3. 实验方法 |
| 3.1 实验动物造模、灌胃及标本采取 |
| 3.2 Elisa法检测MDA、SOD、NSE实验步骤 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 血清NSE值 |
| 4.2 脑组织匀浆MDA、SOD值 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 NSE实验结果讨论 |
| 5.2 MDA、SOD实验结果讨论 |
| 实验三 六味地黄汤对新生大鼠HIBD后HIF-1α的影响 |
| 1. 前言 |
| 1.1 HIF-1α对HIF-1的作用 |
| 1.2 常氧和缺氧对HIF-1α稳定性的影响 |
| 1.3 HIF-1α对新生大鼠HIBD的双重作用 |
| 1.4 抗氧化剂对HIF-1α表达的影响 |
| 2. 实验材料及仪器 |
| 3. 实验方法 |
| 3.1 实验动物造模、灌胃及标本采取 |
| 3.2 RT-PCR法检测HIF-1α实验步骤 |
| 4. 实验结果 |
| 5. 讨论 |
| 6. 综合分析讨论 |
| 6.1 思考：HIF-1α对HIBD是保护作用还是损伤作用? |
| 6.2 发现：HIF-1α在HIBD中的双相表达及作用 |
| 6.3 推测：六味地黄汤调节HIF-1α表达的机制 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 存在问题与研究展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附件一 综述 HIF-1a在HIE中的作用 |
| 综述参考文献 |
| 附件二 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
四、IGF-Ⅰ治疗新生大鼠缺氧缺血脑损伤对BDNF基因表达的影响（论文参考文献）
- [1]hUC-MSCs对缺氧缺血脑损伤幼鼠学习记忆的影响及机制初步探讨[D]. 刘璐. 湖北医药学院, 2021(01)
- [2]参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠HIF-1α和VEGF-A表达的影响[D]. 孔定. 湖南中医药大学, 2021
- [3]骨髓间充质干细胞移植治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤的实验研究[D]. 林爱金. 昆明医科大学, 2020(02)
- [4]新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后bFGF对神经元的作用及其机制研究[D]. 马征. 昆明医科大学, 2019(06)
- [5]氙气调节脑组织中microRNA-210和HIF-1α对新生大鼠脑白质损伤的保护作用研究[D]. 尹向云. 青岛大学, 2018(07)
- [6]中重度新生儿缺氧缺血性脑病患儿血浆中miRNA表达的变化[D]. 王丹. 蚌埠医学院, 2018(02)
- [7]银杏内酯B对HIBD新生大鼠脑细胞凋亡的影响及其机制研究[D]. 程萍萍. 郑州大学, 2017(02)
- [8]丰富环境对HIBD新生大鼠海马CA1区BDNF及细胞凋亡的影响[D]. 宋名杨. 黑龙江中医药大学, 2016(08)
- [9]基因修饰脐带间充质干细胞hUC-MSCs-pIGF-1在脑损伤修复中的功能研究[D]. 田雨光. 南方医科大学, 2016(04)
- [10]基于“肾—脑”相关理论探讨六味地黄汤对新生大鼠HIBD的作用机制研究[D]. 房明东. 成都中医药大学, 2016(05)