一、55例新疆出血热的临床资料分析（论文文献综述）
黄天鹏[1]（2020）在《内蒙古羊种布鲁氏菌的追溯及其节肢动物新宿主特性研究》文中认为内蒙古呼伦贝尔地区独特的自然气候和游牧的生活环境,为蜱虫的滋生和繁殖提供了有利环境。随着全球气候环境的变化,蜱虫在干旱草原地区的活动更加频繁。众所周知,蜱虫不仅会通过直接叮咬的方式对宿主皮肤造成炎症反应,而且其可以作为多种病原体的传播媒介,其中布鲁氏菌病也可能属于蜱传疾病之一。近年来,内蒙古各地区经常发生人和动物的布鲁氏菌病,严重影响着当地畜牧业的健康发展,甚至造成严重的社会问题。本研究从2015年至2020年期间,采集呼伦贝尔地区各发育期的草原革蜱作为试验材料。应用分子生物学手段,对草原革蜱的不同性别,不同发育期和不同器官组织,在基因水平和蛋白质水平上检测了羊种布鲁氏菌的特异性基因及其产物。更为重要的是,在成蜱和蜱卵中成功分离出8株羊种布鲁氏菌,强有力的证实了草原革蜱可能是内蒙古地区羊种布鲁氏菌的天然贮存宿主之一。随后,本研究在体外培养的草原革蜱原代细胞中,将羊种布鲁氏菌的分离菌株进行蜱细胞侵染试验。通过免疫荧光和透射电镜的方法,在草原革蜱原代细胞胞浆内中检测到了有效的布鲁氏菌菌体。该试验表明,羊种布鲁氏菌可以适应蜱细胞胞内环境。本研究主要的试验结果描述如下:1.从2015—2020年期间,选择了内蒙古呼伦贝尔的牧业四旗（包括新巴尔虎旗右旗、新巴尔虎左旗、陈巴尔虎旗和鄂温克旗）和牙克石地区共23个牧区点采集蜱虫样本,并进行蜱虫种型鉴定:应用传统形态学和分子生物学相结合的方法,在呼伦贝尔地区4月下旬至6月下旬期间的优势蜱种确定为草原革蜱;根据16S rRNA基因和CO I基因绘制遗传进化树分析发现,该地区的草原革蜱与新疆、俄罗斯、河北和吉林地区的草原革蜱来源于同一祖先。2.首次在2015—2019年期间对内蒙古地区的1911只草原革蜱体内检测了布鲁氏菌的Bcsp31特异性基因。结果发现草原革蜱体内携带布鲁氏菌Bcsp31特异性基因的总阳性率最高地区可以达到87.80%。同样方法在不同发育阶段的蜱虫（包括虫卵、幼虫、若虫和成虫）体内均成功检测到布鲁氏菌特异性基因。该试验结果提示,草原革蜱体内布鲁氏菌存在周期较长,很有可能是牧区造成家畜布鲁氏菌病一直发病流行的潜在原因之一。3.以常规布鲁氏菌的分离方法,分别在饱血草原革蜱及其蜱卵中成功分离得到8株布鲁氏菌。通过布鲁氏菌的分型试验证实其中6株分离株为羊种3型布鲁氏菌:分别命名为B.melitensis IMHT1、B.melitensis IMHT2、B.melitensis IMHT3、B.melitensis IMHT4、B.melitensis IMHT5 和 B.melitensis IMHT6;其余 2 株为羊种 2型布鲁氏菌:分别命名为B.melitensis IMHT7和B.melitensis IMHT8。其中4株布鲁氏菌分离株经MLST分析结果表明:该4株布鲁氏菌属于同一 ST型,而且与内蒙古地区已知的参考菌株序列处在同一分支上,提示这些布鲁氏菌株之间存在亲缘的进化关系。将这4株布鲁氏菌的16S rRNA基因分别注册于GeneBank,注册号分别为:MT611102.1,MT611103.1,MT611104.1 和 MT611105.1。4.蜱虫的中肠和唾液腺组织是已见报道蜱传疾病将相应病原体成功进行机械性传播的关键组织。本试验在基因水平上,通过荧光定量PCR方法,成功在蜱虫的该2种组织中定量检测到布鲁氏菌Bcsp31基因的拷贝数;在蛋白质水平上,通过免疫荧光和Western Blot方法,同样上述2种组织中成功检测出布鲁氏菌BCSP31蛋白。该结果提示,草原革蜱存在牛羊群间传播布鲁氏菌病的潜在风险。5.将草原革蜱唾液腺和中肠组织的原代细胞进行分离和体外培养。通过对培养条件优化,筛选出蜱细胞最佳的培养条件。随后将已经分离到的布鲁氏菌侵染唾液腺和中肠的原代细胞。布鲁氏菌分离株侵染情况用免疫荧光和透射电镜的方法成功进行检测。该试验结果提示,布鲁氏菌分离株能够适应体外培养的蜱虫原代细胞胞内环境。总之,通过一系列连续性试验,较系统的为内蒙古地区（特别是呼伦贝尔地区）羊种布鲁氏菌在牛羊群中爆发流行原因进行溯源,并初步论证了草原革蜱是能够长期携带布鲁氏菌的节肢动物宿主,可能具有传播牛羊布鲁氏菌病的潜在风险。
丁帆,郭宪国[2]（2020）在《亚东璃眼蜱的研究现状》文中进行了进一步梳理亚东璃眼蜱是我国常见的硬蜱种类,属于体表寄生虫的范畴。与所有硬蜱相同,该蜱的生活史包括卵、幼虫、若虫和成虫四个阶段,温度等环境因素会对其寿命、产卵力和产卵高峰等产生影响。亚东璃眼蜱主要栖息于半荒漠或荒漠地区,是新疆出血热（又名克里米亚-刚果出血热）等人兽共患病的重要传播媒介和贮存宿主。本文检索、归纳和总结了国内外相关文献,对亚东璃眼蜱的鉴别特征、生活史和相关生物学特性、与疾病的关系以及监测防控方面等进行了综述,旨在为亚东璃眼蜱及相关蜱传疾病的监测和防控提供参考资料。
郗宇[3]（2020）在《新疆南疆部分地区绵羊蜱种鉴定及蜱带立克次体检测》文中研究表明为掌握新疆南疆部分地区绵羊蜱种分布情况及蜱内立克次体携带情况。2018-2019年从新疆南疆阿瓦提县、乌什县、沙雅县、库车县、新和县、阿图什、莎车县、疏附县、泽普县、叶城县、喀什市、皮山县、阿拉尔市八团、阿拉尔市十团、阿拉尔市十三团、阿拉尔市和阿拉尔市十一团采集绵羊寄生蜱虫。利用形态学及线粒体16S rDNA基因分子生物学方法对采集蜱样进行鉴定,并进行遗传进化分析。采用PCR方法对鉴别获得的所有蜱种进行立克次体外膜蛋白A基因（ompA）、外膜蛋白B基因（ompB）、柠檬酸合成酶基因（gltA）、核糖体基因（16S rRNA）、17kDa蛋白抗原（17kDa）,以及无形体核糖体16S rRNA片段进行PCR扩增,测序结果进行BLAST序列分析,应用DNA star软件和Mega 6.0软件构建遗传进化树,分析遗传进化情况。结果显示:（1）新疆南疆部分地区采集2614只寄生蜱的种类包括4属5种,硬蜱包括图兰扇头蜱、边缘革蜱、银盾革蜱、亚洲璃眼蜱,软蜱包括拉合尔锐缘蜱;（2）新疆南疆17个采样点488份蜱样本DNA中共检测出145份立克次体阳性样本和47份无形体阳性样本,总感染率分别为29.7%和9.6%;（3）新疆南疆部分地区存在康氏立克次体、饶氏立克次体、马赛立克次体和暂定巴布瑞立克次体共4种立克次体感染,各采样点立克次体感染率在0%-90%之间,各蜱种立克次体携带率为17.7%-100%;（4）新疆南疆部分地区存在嗜吞噬细胞无形体和绵羊无形体共2种无形体感染,各采样点无形体感染率在0%-72.2%之间,各蜱种无形体携带率为0%-20.6%。本试验采集的图兰扇头蜱为新疆南疆部分地区优势蜱种,蜱种发育具有遗传进化的相对保守性;病原调查结果显示新疆南疆部分地区存在立克次体高感染率现象;首次在新疆南疆绵羊寄生银盾革蜱中检出饶氏立克次体;首次在新疆南疆绵羊寄生拉合尔锐缘蜱中检出嗜吞噬细胞无形体。本试验对该地区蜱种类分布研究进行了补充,并为新疆南疆蜱传立克次体病研究及防控提供了重要的依据。
刘志强[4]（2019）在《新疆北疆地区蜱种分布、分子特征及重要蜱传病原的分子检测》文中研究说明目的:蜱类是专性吸血的外寄生动物,除了直接叮咬侵袭宿主,还是多种自然疫源性病原体的传播媒介。蜱类研究在兽医学、医学、经济学和公共卫生方面都有重要的意义。准噶尔盆地是中国第二大内陆盆地,位于新疆北部,植被覆盖度较好,多为优良牧场,野生动物种群较多,为蜱类生长繁殖提供良好“生境”,相应种类繁多,对畜牧业危害极大。对北疆地区蜱种和蜱传病原开展调查研究,完善该地区蜱种与蜱传病原基础资料,为该地区蜱类种群分布解析和蜱传疾病的防控提供参考依据。方法:（1）2014年2016年连续3年在新疆北疆（环古尔班通古特沙漠）15个县市16个点采集硬蜱,形态学鉴定结合地理分布信息确定蜱种分布特点和优势蜱种种类;（2）扩增不同蜱种的16S rDNA基因,印证形态学鉴定结果;通过16S rDNA基因序列比较和构建系统进化树,确定该地区蜱类的系统进化关系。（3）通过亚洲璃眼蜱（Hyalomma asiaticum asiaticum）和亚东璃眼蜱（Hyalomma asiaticum kozlovi）线粒体全基因组的测定、注释、比对和分析,探讨亚洲璃眼蜱和亚东璃眼蜱亲缘关系和分类地位;（4）应用巢式PCR技术,对采集的蜱虫进行人粒细胞无形体、埃立克次体、莱姆螺旋体核酸检测,了解不同地区和不同蜱种携带病原阳性率,并通过人粒细胞无形体及埃立克体的线粒体16S rDNA基因、莱姆病螺旋体的5S-23S rRNA基因间隔区等标志性基因的扩增和序列分析,确定病原体基因型和系统发生关系。（5）分别从自然发病的骆驼和体表寄生的亚洲璃眼蜱虫体内分离培养伊氏锥虫,并通过PCR方法检测伊氏锥虫的18S rDNA和核糖体内转录间隔区ITS1-5.8S-ITS2基因,对分离的虫株进行鉴定,并探讨亚洲璃眼蜱是否是伊氏锥虫的传播媒介。结果:（1）2014年2016年在新疆北疆环古尔班通古特沙漠地区15个县16个采样点,共采集硬蜱11628枚,形态学鉴定隶属5属10种,即:亚洲璃眼蜱Hyalomma asiaticum asiaticum、亚东璃眼蜱Hyalomma asiaticum kozlovi、残缘璃眼蜱Hyalomma detritum.、草原革蜱Dermacentor nuttalli、森林革蜱Dermacentor silvarum、银盾革蜱Dermacentor niveus、边缘革蜱Dermacentor marginatus、图兰扇头蜱Rhipicephalus turanicus、刻点血蜱Haemaphysalis punctata和全沟硬蜱Ixodex persulcatus。其中检出一定量的亚洲璃眼蜱和亚东璃眼蜱中间型。（2）对北疆地区环古尔班通古特沙漠15个县市的16个点采集的部分硬蜱,进行16S rDNA基因的扩增,获得16个蜱序列,分属于璃眼蜱属,扇头蜱属,革蜱属和血蜱属,与形态学鉴定结果相吻合。基于16S rDNA基因构建了系统发育进化树,完善了北疆地区硬蜱的系统发育和分类的基础数据资料。（3）成功扩增了亚洲璃眼蜱和亚东璃眼蜱的的线粒体全基因序列,长度分别为14720bp和14724bp,并对线粒体基因全序列进行注释和分析,两个蜱种序列相似率达到99.65%。基因组成和排序一致,亚洲璃眼蜱和亚东璃眼蜱适合划分为同一种,应该是同种异名。（4）对新疆北疆15个县市采集的500只硬蜱进行了人粒细胞无形体、埃立克次体、莱姆螺旋体的核酸检测,各调查点都有阳性检出,埃立克次体总阳性率达到25.24%,人粒细胞无形体总阳性率达31.2%。莱姆螺旋体总阳性率为3.2%;（5）成功从克拉玛依白碱滩区骆驼和体表寄生的亚洲璃眼蜱体内分离一株锥虫,经鉴定为伊氏锥虫,结合伊氏锥虫分子生物学分析;证实亚洲璃眼蜱体内携带伊氏锥虫,可能是其传播媒介之一。结论:采集的硬蜱11628枚,形态学鉴定隶属5属10种,亚洲璃眼蜱、亚东璃眼蜱、银盾革蜱和草原革蜱为优势蜱种。基于硬蜱16S rDNA基因的鉴定,与形态学鉴定结果一致;通过线粒体全基因组测序分析,认为亚洲璃眼蜱和亚东璃眼蜱为同一物种;在北疆地区硬蜱体内都检测到人粒细胞无形体、埃立克次体和莱姆螺旋体的核酸阳性,提示该地区为此类病原的自然疫源地;分离、培养、鉴定伊氏锥虫克拉玛依株,证实亚洲璃眼蜱可携带伊氏锥虫,可能为伊氏锥虫的传播媒介之一。
刘东晓[5]（2017）在《内蒙古西部地区蜱传克里米亚刚果出血热病毒基因组和分子流行病学研究》文中提出蜱虫作为一种重要的媒介生物,其种类繁多、分布广泛,目前已发现了 83种蜱传病毒,其中不乏严重威胁公共卫生的蜱传脑炎病毒、科罗拉多蜱传热病毒等。尤其是2007年蜱媒非洲猪瘟暴发和国内2009年发现蜱媒“新型布尼亚病毒”致人死亡事件发生以来,蜱传病毒的研究引起了国内外专家和国家疾病防控部门的高度重视。内蒙古是畜牧业集中地带,伴随而来该地区有大量的蜱虫寄生,以动物为中介,蜱很容易将病毒传播给人类和其它动物,使得该地区是蜱传病毒病的潜在高危地区。因此,为了充分保障该地区牧民生命安全和畜牧业的健康发展,填补我国内蒙地区蜱虫携带病毒的本底数据的空白,调查是否具有重要人兽共患病相关的病毒并进行深入研究,本研究采集内蒙古左旗和右旗地区的动物寄生蜱虫,利用病毒宏基因组学相关技术对蜱传病毒进行研究,通过实验,获得以下结果:（1）样品采集:本实验样品采集工作于2015-2016年间完成。2015年5月,于内蒙古自治区的阿拉善盟左旗和阿拉善盟左旗与右旗交界2个采样点采集骆驼、绵羊体表寄生的亚洲璃眼蜱共计643只;2016年4月,从内蒙左右旗交界的骆驼,嘉镇乌兰呼都格嘎查采集的绵羊及骆驼血清,共计112份。（2）样品核酸检测:利用病毒宏基因组学技术对从所采集的样品进行病毒组学研究,共获得了644692条Reads,拼接出2484条Contig。通过核酸序列注释发现,其8.2%（203/2484）的contig为病毒序列,并注释到4个病毒科和4个病毒属;其中一条720bp的contig注释到克里米亚刚果出血热病毒（CCHFV）,根据这条contig设计特异性检测引物,对样品进行检测,共计从60个蜱虫样本中检测到有4个样本携带有克里米亚刚果出血热病毒基因,四株病毒分别命名为N5株,H1株,NM-18株和NM-24株,其中H1株的宿主为绵羊,其余三株的宿主为骆驼,阳性率为6.7% （4/60）。（3）克里米亚刚果出血热病毒全基因组研究:本研究通过NCBI Blast比对选择参考株对其中一株病毒（NM-18株）的全序列进行了分段扩增,共设计了 18对简并引物,并扩增出病毒的全基因组序列,其中包括S片段1672bp, ORF为1449bp,编码482个氨基酸,Gc含量为45.25%;M片段5368bp,ORF为5070bp,编码1689个氨基酸,Gc含量为43.60%; L片段12155bp,ORF为11838bp,编码3945个氨基酸,Gc含量为41.37%。与已知的克里米亚刚果出血热病毒进行系统进化分析发现,NM-18株与其他克里米亚刚果出血热病毒相比,S片段的全基因组序列同源性与同样分离自我国蜱虫的HY-13株最高,可以达到95.2%; M片段的全基因组核苷酸同源性则与分离自南非的SPU415/85株最高,可以达到91.2%; L片段的全基因组核苷酸同源性与同样分离自我国蜱虫的YL04057株同源性最高,可以达到93.7%。（4）样品血清学检测:本实验利用本实验扩增出的NM-18株克里米亚刚果出血热病毒的S片段,使用原核表达将病毒的N蛋白成功表达,大小为54kD,并成功纯化,又利用纯化成功的克里米亚刚果出血热病毒的N蛋白对来自内蒙地区共计2个采样点,2种蜱虫宿主共112份血清进行了Western blot检测,在采集的全部112份血清中,克里米亚刚果出血热病毒阳性血清共有49份,阳性率可以达到43.75%。综上所述,本研究通过病毒宏基因学技术次对内蒙古地区的蜱虫病毒组的研究,发现了蜱传重要人兽共患病病原克里米亚刚果出血热病毒的存在,成功的扩增出一株克里米亚刚果出血热病毒的全基因组序列,分析了宿主动物对该病毒的感染阳性率。为进一步建立西北地区蜱虫携带病毒的本底数据信息库奠定了基础,也为蜱媒人兽共患病毒的防控提供了理论参考。
寇春[6]（2016）在《新疆准噶尔盆地周边地区蜱与鼠类携带虫媒病毒的调查研究》文中进行了进一步梳理新疆维吾尔自治区位于我国西北边陲,亚欧大陆腹地,与俄罗斯、蒙古、巴基斯坦等8家接壤,陆上对外口岸较多,与周边国家经济交往频繁。新疆地理生态环境多样,物种分布广与内地有着明显的不同,适合蜱的生长繁殖,其分布广泛,种类较多,可传播多种虫媒病毒。新疆地区时有人、畜不明原因发热和脑炎散发或流行,疑似虫媒病毒引起,但是由于种种原因,目前还没有进行过系统而深入的调查,急需加强研究。我国已知流行的4种虫媒病毒病中新疆出血热和蜱传脑炎在新疆都有发现,在新疆既往进行的虫媒病毒调查中,已经从新疆地区的全沟硬蜱、森林革蜱、亚洲璃眼蜱、边缘革蜱和草原革蜱中分别分离到蜱传脑炎病毒,东方马脑炎病毒,新疆出血热病毒、新环状病毒。从按蚊、库蚊、伊蚊中分别分离到辛德毕斯病毒,西方马脑炎病毒,辽宁病毒,Tahyna病毒等。但尚缺乏对新疆准噶尔盆地周边地区虫媒病毒的深入调查研究。为了解新疆准噶尔盆地周边地区蜱及啮齿动物（鼠）携带虫媒病毒情况,应用RT-PCR、细胞培养及生物信息学等方法对该地区蜱及啮齿动物（鼠）感染虫媒病毒情况进行了调查研究。本项研究结果对丰富新疆乃至国内虫媒病毒资源和进行新疆地区虫媒病毒病预防控制具有重要意义。主要内容包括以下方面:1.新疆啮齿动物（鼠）样本采集及携带虫媒病毒的初步检测2014-2015年在新疆准噶尔盆地周边地区乌苏、阜康、奇台、吉木萨尔和石河子149团等地区采集了1054只啮齿动物,其中2014年,2015年分别为684只和370只,主要种类有长尾黄鼠（Spermophilus undulatus）、子午沙鼠（Meriones meridianus Pallas）、大沙鼠（Rhombomys opimus）和三趾跳鼠（Dipus sagitta）。2014年鼠样本根据采集地、属种与脏器的不同分成193组。通过RT-PCR的方法对鼠中发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）、新疆出血热病毒（XHFV）、荆门病毒（JMTV）以及古尔图病毒（Guertu virus）的感染情况进行了检测。结果发现总样本中Guertu virus的S片段阳性率为9.3%,SFTSV的S片段阳性率为6.2%。Guertu virus与SFTSV主要集中在乌苏地区,主要宿主为长尾黄鼠。提示长尾黄鼠为Guertu virus与SFTSV新的宿主。2015年样本同样方法分组成136组,除检测以上4种病毒外还检测了汉坦病毒（HTV）,蜱传脑炎病毒（TBEV）与黄病毒属病毒（Flavivirus）。结果显示总样本中XHFV的阳性率为11%,SFTSV阳性率为7.4%,Guertu virus阳性率为21.3%。阳性样本主要集中在乌苏地区。根据2014-2015年对准噶尔盆地周边地区鼠样本的检测结果,提示新疆乌苏地区可能存在XHFV、SFTSV与Guertu virus的自然疫源地。2.新疆蜱中新病毒的发现、分离及在蜱中分子流行病学调查2014年在新疆乌苏地区共采集了13662只草原革蜱（Dermacentor nuttalli）。根据采集地与蜱种类不同按每组约200只左右分成68组,选取8组有代表样性的样本,经武汉中科院病毒研究所的454高通量测序,有7组样本中存在黄病毒科病毒的重叠群（Contig）。对获得的Contig利用NCBI中的BLISA工具搜索,发现所有Contig都与荆门蜱病毒（Jingmen tick virus,JMTV）的核酸序列相似性最高,在65%-84%之间。暂将该新病毒命名为新疆蜱病毒（Xinjiang tick virus,XJTV）。选取454高通量测序的3组阳性样本,利用Vero细胞对XJTV进行病毒培养和分离,细胞传至第7代后,仅在第一代培养细胞的上清中检测到有XJTV的核酸片段,同时对第一代细胞的上清及细胞制备切片进行电镜观察,发现在细胞与上清中存在90nm左右的病毒粒子。通过RT-PCR对XJTV在乌苏地区蜱中的流行情况进行检测。结果表明,2014年乌苏地区的68组草原革蜱中,检测到XJTV阳性组数54组,其阳性率达79.4%。说明草原革蜱为XJTV的媒介之一,该病毒可能在乌苏地区的蜱中广泛分布。3.新疆蜱携带XJTV基因组序列信息分析与克隆454高通量测序的Contig与JMTV基因序列比对后发现只有部分S1与S3的信息,利用获得的基因序列设计引物进行RT-PCR得到了该病毒的S1与S3全序列信息。对采自新疆羊沟地区的一份阳性样本经RNA-Seq技术（上海伯豪公司）分析获得了S2与S4的部分序列信息,通过设计特异性引物用RT-PCR的方法获得了该病毒的S2与S4全序列信息。利用RT-PCR和重叠RT-PCR的方法分别将结构蛋白S1,S2,S3与S4全基因序列克隆到p GEM-Teasy载体中,这为更好地保存病毒的基因组信息,以及对该病毒分子特性和相关基因功能等性质的研究提供了基础。4.XJTV非结构蛋白和结构蛋白的生物信息学分析利用相关生物学软件Signa IP 4.1、TMHMM、Net NGlyc1.0 Serve、Phrye、MEGA5与DNAStar等对XJTV编码的非结构蛋白（NSP1与NSP2）和结构蛋白（VP1、VP2和VP3）进行了分析。在二级结构中XJTV与黄病毒科的代表株在非结构蛋白的功能区域的motif保守性较高。利用已经解析蛋白晶体结构的登革热病毒（DENV-4）和日本脑炎病毒（JEV）作为模板模拟出XJTV的S1与S3编码蛋白的三维结构。结果发现XJTV基于二级结构保守的motif在空间位置上也与模板蛋白的motif一一对应,提示这些保守结构在病毒的生命周期中可能行使着相同的生物学功能。对结构蛋白VP1、VP2与VP3的跨膜区域、信号肽与糖基化位点进行分析预测,结果表明结构蛋白VP1、VP2与VP3分别具有病毒的包膜蛋白、衣壳蛋白和膜蛋白的功能。基于XJTV的S1与S3编码的非结构蛋白构建的系统发育进化树分析结果显示,与选择的黄病毒科的部分代表毒株相比,XJTV不属于黄病毒科已有的三个属,而与JMTV和MGTV位于进化树单独的分支中。提示XJTV可能是黄病毒科一个新的属中的毒株。5.XJTV衣壳蛋白重组表达质粒的构建及其兔多克隆抗体的制备将XJTV与JMTV编码结构蛋白的基因序列进行比较后,选取相对保守的衣壳蛋白（Capsid protein）ORF片段序列,将其构建到原核表达载体p ET28a与p ET32a中,同时构建至真核表达载体pc DNA3.1中,通过序列测定,结果表明成功获得了三种表达质粒p ET28a-CP,p ET32a-CP和pc DNA3.1-CP。将p ET28a-CP质粒转染大肠杆菌中表达纯化获得重组蛋白,用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备抗体,经检测所获得的抗体效价达1:100000以上,通过western blot检测证实了该抗体与抗原有很好的结合亲和性。构建的原核表达质粒及制备的抗体可为后续开展病毒血清学检测及XJTV的免疫学特性研究工作提供了条件。将构建的真核表达载体p CDNA3.1-CP转染入293T细胞,经IFA检测,表明VP2基因编码的衣壳蛋白在该细胞中成功表达,这为后续病毒的包装以及对哺乳动物的侵染机制研究提供了基础。
李阳[7]（2014）在《新疆出血热病毒M、S基因DNA疫苗的免疫效果及糖蛋白抗原表位的初步分析》文中提出克里米亚刚果出血热（Crimean—Congo hemorrhagic fever，CCHF）是CCHF病毒引起的一种蜱传出血热传染病，病死率高达50％，分布在世界三十多个国家，已成为危害人类身体健康的重要传染病之一。在我国于1965年分离得到该病毒，又称新疆出血热病毒（Xinjiang hemorrhagic fever，XHFV），目前已分离到多株病毒,但一直未得到对其切实有效的诊断方法及治疗手段。XHFV S基因编码核蛋白（nucleoprotein，NP）是病毒诱导机体发生免疫反应的主要抗原，而M基因编码的糖蛋白（glycoproteins，GP）在CCHFV的感染与致病过程中起着重要作用。因此，研究XHFV核蛋白NP及糖蛋白GP（包括Gn，Gc）片段的抗原性和免疫原性对于加快我国XHFV诊断技术和疫苗的研究具有重要推动作用。本研究构建了XHFVS和M基因重组DNA疫苗并检测了其免疫效果；同时，利用改良生物合成肽法将XHFV79121株糖蛋白Gc片段的截短的16肽基因构建到原核表达载体pXXGST-1上进行诱导表达，用制备的抗XHFV糖蛋白兔多抗对多肽进行抗原活性的免疫印迹（Western Blot）分析，确定了Gc上可能存在的抗原表位。本研究主要取得了以下结果：1.为筛选XHFV核蛋白（NP）的优势抗原表位，通过诱导表达及纯化获得YL04057株的6种融合蛋白NP（aa1-482）、NP2（aa170-305）、NP2-（caa235-305）、NP2-c-1（aa237-256）、NP2-c-2（aa250-265）、NP2-c-3（aa260-276），分别用重组蛋白对羊血清进行间接ELISA法检测，以间接免疫荧光法（IFAT）检测结果为参照标准进行对比，结果发现，NP2蛋白的敏感性为73.3%，特异性为100%，总符合率为87.9%，NP2-c蛋白的敏感性为66.7%，特异性为94.4%，总符合率为81.8%。结果表明NP2和NP2-c的抗原性较强，提示这两种抗原可以作为研发新型XHF诊断试剂的候选抗原表位。2.选取YL04057株核蛋白全长NP（1-482aa）及抗原性较强的基因片段NP2（170-305aa）与糖蛋白（Gn，Gc）基因片段，分别或嵌合构建至真核表达载体PVAX1上，获得5种重组质粒：pVAX1-NP，pVAX1-NP2，pVAX1-Gn，pVAX1-Gc及pVAX1-Gc-NP2。以pVAX1为对照组，分别用空载体和重组质粒免疫Balb/c小鼠，并用ELISA法、淋巴细胞增殖实验以及细胞因子水平的检测基因免疫小鼠后产生的应答效果。结果显示，pVAX1-NP2组鼠的血清抗体效价能够达到1：6400；pVAX1-NP2及pVAX1-Gc-NP2组与对照组相比，小鼠脾脏T淋巴细胞增殖效果明显（P<0.01），这两个实验组的IFN-γ表达水平也很高，可以达到865.15pg/mL及1727.205pg/mL，与对照组相比具有极显着的差异（P<0.01）；pVAX1-NP2及pVAX1-Gn组IL-4的表达水平为19.11pg/mL和20.07pg/mL，与对照组的9.35pg/mL相比也有显着差异（P<0.05）。pVAX1-NP2及pVAX1-Gc-NP2实验组效果最好，提示这两个重组基因片段可作为XHFV的候选DNA疫苗。3.对XHFV79121株糖蛋白（Gc）氨基酸序列进行生物信息学分析，以α螺旋，β折叠，转角，疏水性，松散型及B细胞线性抗原表位的预测等多项指标设计10个含有预测抗原表位的16肽，合成后分别构建至pXXGST-ST载体上。为制备兔抗多克隆抗血清，将YL04057株编码糖蛋白M基因C端截短成Gc1及Gc2基因片段，构建至pET-28a原核表达载体，并诱导表达纯化制备兔抗Gc1及Gc2多克隆抗体。利用多抗通过Western blot法对重组表达的16肽进行抗原性分析，结果显示，其中6个16肽能够与抗血清特异性结合，表明获得了6个具有抗原表位的多肽（Gc116-131，Gc228-243，Gc362-377，Gc370-385，Gc505-520，Gc513-528）。通过保守性分析，发现首次鉴定出的XHFV糖蛋白的6个抗原表位具有较强的保守性（达到81.25%以上），这为XHFV检测试剂盒及表位肽疫苗的研制提供了基础资料。
王晓宏[8]（2012）在《脑炎/脑膜炎及出血热病原体多重PCR-Mass ARRAY检测技术的建立》文中指出人类文明的进步并未阻止传染病的肆虐,进入二十一世纪,传染病的防治仍是人类必须面对的巨大挑战。对传染病病原学的研究始终是一项具有重大意义的任务。近年来,生物学技术的迅速发展也使得传染病病原体的检测与鉴定技术得到飞速发展,每一项技术的革新对生命科学领域来说都是一次跨越。目前,众多分子生物学方法已成功应用于病原体检测中,如PCR技术、基因芯片技术、分子杂交技术等。相对于传统检测技术而言,新一代分子生物学技术具有操作简单、耗时短、检测效率高等特点,但是也存在相应的不足,如何避免这些不足并开发新技术已成为目前科研工作者的首要任务。在本研究中,我们将最初用于基因分型、突变位点检测、耐药位点分析等方面的多重PCR-Mass ARRAY技术应用于传染病病原体的高通量检测中,以15种可引起脑炎/脑膜炎症状的病原体以及16种可引起病毒性出血热的病毒为研究对象,建立脑炎/脑膜炎以及出血热病毒的多重PCR-Mass ARRAY检测技术,实现此类病原体的多重、高通量、高特异性以及高灵敏度检测,服务于流行病学调查研究以及传染病病原体大规模筛查与鉴定。实验方法：针对拟检测病原体,使用生物信息学方法对待检病原体的基因组序列进行分析,确定各病原体的保守序列；以保守序列为参考序列,设计PCR-Mass ARRAY的扩增引物组合和延伸引物组合（每种病原体包括一对扩增引物和一条延伸引物）；使用无菌双蒸水、正常人基因组DNA以及人工重组质粒对引物体系的特异性以及可重复性进行验证；使用梯度稀释的质粒对该体系的灵敏度进行测定。在优化并建立了脑炎/脑膜炎以及出血热病毒的多重PCR-Mass ARRAY检测技术体系之后,使用6种脑炎培养病毒以及14份脑炎症状的临床标本对该体系的实际检测效果进行评价。同时,使用实时荧光定量PCR技术、Sanger测序法对同批样本进行平行检测,以评价多重PCR-Mass ARRAY技术的灵敏度以及准确性。结果与结论：（1）建立的脑炎/脑膜炎病原体多重PCR-Mass ARRAY检测技术具有很高的特异性,最终确定的检测体系不出现假阳性和非特异延伸；对梯度稀释后的重组质粒进行多重PCR-Mass ARRAY检测,确定各质粒的检测灵敏度,脑炎/脑膜炎病原体质粒的灵敏度范围为100copies/μl—10000copies/μl,且只有两种病原体的灵敏度为10000copies/μl;6种脑炎纯病毒的检测结果显示各病毒cDNA均可检出,没有假阳性,Sanger测序结果与多重PCR-Mass ARRAY的检测结果一致；对14份脑炎症状的临床样本多重PCR-Mass ARRAY检测结果显示,有3份样本检测到流行性乙型脑炎（JEV）,其余样本各种病原体检测均为阴性。使用荧光定量PCR法对同批样本进行平行检测,检出两份JEV,这两份样本的PCR-Mass ARRAY结果也为JEV阳性,应用Sanger测序法对3份阳性样本进行鉴定,证实3份样本均为JEV阳性,证明PCR-Mass ARRAY技术的灵敏度高于荧光定量PCR技术。（2）建立的16种出血热病毒多重PCR-Mass ARRAY检测技术同样具有很好的特异性与可重复性；分别使用梯度稀释的出血热病毒重组质粒对该技术的灵敏度进行测试,测试结果显示质粒的灵敏度范围为10copies/μl—100copies/μl,大部分质粒灵敏度为100copies/μl,证明所建立的出血热病毒多重PCR-Mass ARRAY技术具有很高的灵敏度。上述实验结果表明：多重PCR-Mass ARRAY在脑炎／脑膜炎病原体以及出血热病毒的检测中具有良好的特异性与可重复性,并具有比较高的灵敏度与准确度。因此,该技术适合应用于流行病学调查研究与传染病病原体的大规模筛查中。
相大鹏,师永霞,李小波[9]（2009）在《新疆出血热的研究进展》文中进行了进一步梳理克里米亚-刚果出血热（Crimean Congo hemorrhagic fever,CCHF）于1944年发现于俄国的克果米亚,它是由克里米亚-刚果出血热病毒（Crimean Congo hemorrhagic fever virus,CCHFV）引起的,是一种流行于中国新疆南部、俄国北部、中东、南部欧亚大陆及非洲撒哈拉地区的烈性传
阿不力提甫·阿不力孜,努尔比亚·吾不力阿西木,塔依尔·吾不力[10]（2007）在《2003年巴楚县2例新疆出血热病例诊治报告》文中指出
二、55例新疆出血热的临床资料分析（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、55例新疆出血热的临床资料分析（论文提纲范文）
（1）内蒙古羊种布鲁氏菌的追溯及其节肢动物新宿主特性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 关于布鲁氏菌及布鲁氏菌病的概述 |
| 1.2 布鲁氏菌病流行情况 |
| 1.2.1 世界性布鲁氏菌病流行情况 |
| 1.2.2 我国布鲁氏菌病流行情况 |
| 1.2.3 内蒙古地区布鲁氏菌病流行情况 |
| 1.3 布鲁氏菌病分子生物学检测方法 |
| 1.3.1 限制性基因长度多态性 |
| 1.3.2 实时定量PCR (Real-time PCR) |
| 1.3.3 普通PCR鉴定 |
| 1.3.4 多位点序列分型(MLST) |
| 1.3.5 多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA) |
| 1.4 蜱虫与布鲁氏菌病 |
| 1.5 蜱 |
| 1.5.1 蜱的栖息特点 |
| 1.5.2 蜱的分类 |
| 1.6 蜱传疾病 |
| 1.6.1 蜱传细菌性疾病 |
| 1.6.2 蜱传病毒性疾病 |
| 1.6.3 蜱传寄生虫性疾病 |
| 1.7 蜱虫唾液腺和中肠组织在病原传播中的作用 |
| 1.7.1 唾液腺与病原体传播相关性 |
| 1.7.2 中肠与病原体传播相关性 |
| 1.8 本研究目的与意义 |
| 2 试验一 羊种布鲁氏菌的溯源及其分离与分型试验 |
| 2.1 主要材料 |
| 2.1.1 菌株来源 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 蜱虫样本的采集 |
| 2.2.2 蜱虫传统形态学观察 |
| 2.2.3 草原革蜱的孵化 |
| 2.2.4 蜱虫基因组DNA的提取 |
| 2.2.5 蜱虫线粒体16S rRNA基因和COI基因的扩增与分析 |
| 2.2.6 蜱虫体内布鲁氏菌Bcsp31基因的检测 |
| 2.2.7 布鲁氏菌的分离与培养 |
| 2.2.8 布鲁氏菌分离株的种属鉴定 |
| 2.2.9 布鲁氏菌分离株的分子生物学鉴定 |
| 2.2.10 布鲁氏菌分离株的全基因组分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 蜱虫采集结果 |
| 2.3.2 蜱虫传统形态学鉴定结果 |
| 2.3.3 草原革蜱的16S rRNA基因和COI基因序列遗传进化树结果 |
| 2.3.4 蜱虫体内布鲁氏菌Bcsp31基因的检测结果 |
| 2.3.5 蜱虫体内布鲁氏菌分离结果 |
| 2.3.6 布鲁氏菌分离株的分型鉴定结果 |
| 2.3.7 布鲁氏菌分离株的全基因组分析结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 3 试验二 草原革蜱不同发育阶段及其不同组织中布鲁氏菌的检测试验 |
| 3.1 主要材料 |
| 3.1.1 主要试剂 |
| 3.1.2 主要仪器设备 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 蜱虫的人工孵化及其基因组DNA的提取 |
| 3.2.2 蜱虫中肠和唾液腺基因组DNA的提取 |
| 3.2.3 蜱虫不同发育阶段及不同组织中布鲁氏菌Bcsp31基因的检测 |
| 3.2.4 蜱虫中肠和唾液腺中布鲁氏菌Bcsp31基因的定量检测 |
| 3.2.5 重组质粒pGEX-Bcsp31的构建与鉴定 |
| 3.2.6 重组菌pGEX-Bcsp31的原核表达 |
| 3.2.7 多克隆抗体的制备 |
| 3.2.8 蜱虫中肠和唾液腺中布鲁氏菌特异性蛋白的检测 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 蜱虫不同发育阶段中布鲁氏菌Bcsp31基因的检测结果 |
| 3.3.2 蜱虫中肠和唾液腺中布鲁氏菌Bcsp31基因的检测结果 |
| 3.3.3 蜱虫中肠和唾液腺中布鲁氏菌Bcsp31基因的定量检测结果 |
| 3.3.4 重组质粒pGEX-Bcsp31的构建与鉴定结果 |
| 3.3.5 重组蛋白的检测与纯化结果 |
| 3.3.6 蜱虫中肠和唾液腺中布鲁氏菌特异性蛋白的检测结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 4 试验三 蜱虫原代细胞的培养及布鲁氏菌分离株的侵染试验 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 主要试剂 |
| 4.1.2 主要仪器设备 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 草原革蜱中肠和唾液腺原代细胞的培养 |
| 4.2.2 蜱虫细胞的形态学鉴定 |
| 4.2.3 蜱虫细胞的分子生物学鉴定 |
| 4.2.4 布鲁氏菌分离株侵染蜱细胞试验 |
| 4.2.5 免疫荧光检测试验 |
| 4.2.6 透射电镜检测试验 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 蜱虫细胞培养条件的筛选结果 |
| 4.3.2 草原革蜱中肠和唾液腺原代细胞的形态学鉴定结果 |
| 4.3.3 草原革蜱传代细胞的分子生物学鉴定结果 |
| 4.3.4 免疫荧光检测试验结果 |
| 4.3.5 透射电镜检测试验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 5 全文讨论 |
| 6 全文结论 |
| 7 创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（2）亚东璃眼蜱的研究现状（论文提纲范文）
| 1 璃眼蜱属概况 |
| 2 亚东璃眼蜱的鉴别特征 |
| 2.1 亚东璃眼蜱形态特征 |
| 2.1.1 雌蜱 |
| 2.1.2 雄蜱 |
| 2.1.3 若蜱 |
| 2.1.4 幼蜱 |
| 2.2 与亚洲璃眼蜱指名亚种的区别 |
| 3 亚东璃眼蜱的生活史及相关生物学特性 |
| 3.1 生活史 |
| 3.2 相关生物学特性 |
| 4 亚东璃眼蜱与疾病的关系 |
| 4.1 新疆出血热(XHF) |
| 4.2 Q热 |
| 4.3 土拉菌病 |
| 5 监测与防控 |
（3）新疆南疆部分地区绵羊蜱种鉴定及蜱带立克次体检测（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 蜱的分类起源 |
| 1.2 蜱的系统分类学假说 |
| 1.3 蜱概述 |
| 1.3.1 蜱的生活史 |
| 1.3.2 蜱的吸血习性与宿主关系 |
| 1.3.3 蜱的生殖和繁育 |
| 1.3.4 蜱的形态特征 |
| 1.3.5 蜱的危害 |
| 1.4 常见的蜱传疾病 |
| 1.5 我国无形体研究进展 |
| 1.6 我国立克次体研究进展 |
| 第2章 新疆南疆部分地区绵羊蜱种形态学及分子生物学鉴定 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 蜱样采集 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 试剂配制 |
| 2.1.5 物种鉴定参考序列 |
| 2.1.6 形态学鉴定 |
| 2.1.7 分子生物学鉴定 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 蜱种形态学鉴定 |
| 2.2.2 蜱种分子生物学鉴定 |
| 2.3 讨论 |
| 第3章 新疆南疆部分地区绵羊寄生蜱携带立克次体检测 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 样品来源 |
| 3.1.2 主要仪器及试剂 |
| 3.1.3 DNA提取 |
| 3.1.4 PCR扩增 |
| 3.1.6 琼脂糖凝胶电泳 |
| 3.1.7 PCR产物阳性样本克隆 |
| 3.1.8 测序及构建遗传进化树 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 PCR产物电泳结果 |
| 3.2.2 感染率统计分析 |
| 3.2.3 序列比对分析 |
| 3.2.4 遗传进化树分析 |
| 3.3 讨论 |
| 第4章 总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（4）新疆北疆地区蜱种分布、分子特征及重要蜱传病原的分子检测（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.研究的目的和意义 |
| 2 国内外研究进展 |
| 2.1 蜱分类及进化的研究进展 |
| 2.2 蜱传疫病的研究进展 |
| 2.3 蜱虫线粒体基因组的研究进展 |
| 3 研究内容与技术路线 |
| 3.1 研究内容 |
| 3.2 技术路线 |
| 第二章 试验研究 |
| 试验一 北疆地区硬蜱的调查研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2.结果 |
| 2.1 硬蜱的统计结果 |
| 2.2 硬蜱的形态学鉴定 |
| 2.3 优势蜱种的分布 |
| 3 讨论 |
| 3.1 北疆地区蜱种的分布 |
| 3.2 亚洲璃眼蜱和亚东璃眼蜱的区分 |
| 4 小结 |
| 试验二 基于16S rDNA基因对北疆地区硬蜱系统进化分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 16S rDNA基因的扩增结果 |
| 2.2 线粒体16S rDNA基因扩增序列分析 |
| 2.3 蜱种系统发育分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 分子生物学技术在蜱分类中的应用 |
| 3.2 新疆蜱种的变化 |
| 4 小结 |
| 试验三 亚洲璃眼蜱和亚东璃眼蜱线粒体基因组的测定分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 形态学鉴定 |
| 2.2 线粒体基因分段扩增 |
| 2.3 两种璃眼蜱的线粒体基因组 |
| 2.4 基于线粒体基因组系统发育分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验四 蜱媒人粒细胞无形体、埃立克次体和莱姆螺旋体的检测 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 PCR扩增结果 |
| 2.2 人粒细胞无形体、埃立克体和莱姆疏螺旋体检测结果 |
| 2.3 3种病原体测序及分型 |
| 3 讨论 |
| 3.1 人粒细胞无形体、埃立克次体病的流行情况 |
| 3.2 莱姆螺旋体病的流行情况 |
| 4 小结 |
| 试验五 亚洲璃眼蜱中锥虫的分离与鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 蜱虫鉴定 |
| 2.2 血液涂片 |
| 2.3 血涂片染色 |
| 2.4 动物接种试验 |
| 2.5 PCR扩增与测序结果 |
| 2.6 序列分析 |
| 2.7 系统发育关系分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 伊氏锥虫病流行情况 |
| 3.2 伊氏锥虫的传播媒介 |
| 3.3 伊氏锥虫系统发生分析 |
| 4 小结 |
| 第三章 全文总结 |
| 第四章 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 石河子大学博士研究生学位论文导师评阅表 |
（5）内蒙古西部地区蜱传克里米亚刚果出血热病毒基因组和分子流行病学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 第一章 克里米亚刚果出血热病毒分子生物学的研究进展 |
| 1.1 克里米亚刚果出血热的简介 |
| 1.2 流行病学和生态学 |
| 1.3 克里米亚刚果出血热病毒的分子生物学研究 |
| 1.4 病毒的传播媒介 |
| 1.5 病毒的理化性质 |
| 1.6 克里米亚刚果出血热病毒的亲缘关系与地理分布 |
| 1.7 诊断、治疗和疫苗 |
| 1.8 国内的研究进展及本研究的意义 |
| 第二章 内蒙古西部地区蜱虫病毒宏基因组学研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 克里米亚刚果出血热病毒全基因组研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 克里米亚刚果出血热病毒血清学研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附表 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（6）新疆准噶尔盆地周边地区蜱与鼠类携带虫媒病毒的调查研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1 新疆地区虫媒病毒调查研究状况 |
| 1.1 新疆主要虫媒病毒 |
| 1.2 新疆虫媒病毒研究的发展与展望 |
| 2 黄病毒研究进展 |
| 2.1 基因组及复制周期 |
| 2.2 黄病毒的检测方法 |
| 2.3 黄病毒属主要诊断抗原的研究进展 |
| 2.4 黄病毒的流行情况 |
| 3 研究的目的及意义 |
| 参考文献 |
| 第二章 新疆地区啮齿动物（鼠）携带虫媒病毒的分子生物学初步检测及分离 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 采集时间与采集地点 |
| 1.2.2 采集方法 |
| 1.2.3 样品研磨 |
| 1.2.4 RNA的提取 |
| 1.2.5 cDNA的制备 |
| 1.2.6 引物设计与合成 |
| 1.2.7 PCR |
| 1.2.8 病毒的分离与检测 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 新疆蜱中新病毒的发现、分离及蜱中分子流行病学调查 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 采集时间与采集地点 |
| 1.2.3 样本研磨 |
| 1.2.4 RNA的提取 |
| 1.2.5 cDNA的合成 |
| 1.2.6 454高通量测序检测样本的准备 |
| 1.2.7 PCR检测 |
| 1.2.8 组织细胞培养法分离病毒 |
| 1.2.9 电镜观察 |
| 2 结果 |
| 2.1 捕蜱数量及种类 |
| 2.2 454高通测序结果 |
| 2.3 蜱样本分毒结果 |
| 2.4 电镜观察实验 |
| 2.5 蜱样本中XJTV的流行病学调查 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 新疆蜱携带XJTV基因组序列信息分析与克隆 |
| 前言 |
| 1 材料及方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 454高通量测序序列分析与拼接 |
| 1.2.2 RNA-seq高通测序序列分析与拼接 |
| 1.2.3 XJTV序列的 5'与 3'两端序列信息的获取 |
| 1.2.4 XJTV每节段中的片段克隆到pGEM-Teasy |
| 1.2.5 XJTV每节段全长克隆至pGEM-Teasy载体中 |
| 1.2.6 序列的拼接及分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 454高通量测序结果分析 |
| 2.2 RNA-seq高通量测序结果分析 |
| 2.3 XJTV全序列信息的克隆 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五章 XJTV序列的生物信息学分析 |
| 前言 |
| 1 方法 |
| 1.1 基因序列选取 |
| 1.2 二级结构预测 |
| 1.3 三级结构预测 |
| 1.4 系统发育进化分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 XJTV二级结构分析结果 |
| 2.1.1 糖基化位点分析 |
| 2.1.2 信号肽分析 |
| 2.1.3 跨膜区域 |
| 2.1.4 黄病毒科保守的模体分析 |
| 2.2 非结构蛋白三级结构预测 |
| 2.3 NS3与NS5的进化分析 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第六章 XJTV的CP蛋白基因原核与真核载体构建及抗体制备 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 CP蛋白基因引物的设计、合成与PCR反应 |
| 1.2.2 重组表达载体的构建 |
| 1.2.3 CP蛋白的原核表达 |
| 1.2.4 真核质粒转染实验 |
| 1.2.5 重组CP蛋白的大量诱导及纯化 |
| 1.2.6 重组CP蛋白兔多克隆抗体的制备 |
| 1.2.7 Western Blotting分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 CP蛋白基因原核与真核质粒构建结果 |
| 2.2 重组CP蛋白基因原核表达结果 |
| 2.3 重组CP基因在真核细胞中表达结果 |
| 2.4 Western Blotting检测抗重组CP蛋白的兔多克隆抗体 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）新疆出血热病毒M、S基因DNA疫苗的免疫效果及糖蛋白抗原表位的初步分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1 XHF 的检测、治疗和疫苗研究概况 |
| 1.1 XHF 的检测 |
| 1.2 XHF 的治疗 |
| 1.2.1 一般治疗措施 |
| 1.2.2 利巴韦林 |
| 1.2.3 抗体治疗 |
| 1.2.4 其他抗病毒治疗 |
| 1.3 XHF 的疫苗 |
| 2 XHF 核蛋白结构及功能特点 |
| 3 XHF 糖蛋白结构及功能特点 |
| 4 M 基因进化树及遗传特异性 |
| 5 病毒抗原表位的基本研究方法 |
| 5.1 抗原表位的分类 |
| 5.2 病毒抗原表位的预测方法 |
| 5.3 抗原肽的合成方法 |
| 5.4 病毒抗原表位的筛选、鉴定方法 |
| 参考文献 |
| 第二章 新疆出血热病毒核蛋白优势表位抗原的筛选 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 材料和试剂 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.2.1 主要试剂 |
| 1.2.2 主要溶液配方 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 XHFV NP 蛋白及其截短蛋白的的诱导表达 |
| 2.2 原核表达融合蛋白的纯化 |
| 2.2.1 His 标签蛋白的纯化 |
| 2.2.2 GST 标签蛋白的纯化 |
| 2.2.3 PAGE 胶蛋白微量回收 |
| 2.2.4 Bradford 法测量蛋白浓度 |
| 2.3 间接 ELISA 法筛选优势抗原表位 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 重组蛋白的诱导及纯化 |
| 3.2 间接 ELISA 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 重组新疆出血热病毒 S 和 M 基因疫苗的构建及免疫效果 |
| 摘要 |
| 引言 |
| 1 材料和试剂 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.2.1 主要试剂 |
| 1.2.2 培养基和主要溶液配方 |
| 2 方法 |
| 2.1 病毒总 RNA 的提取 |
| 2.2 DNA 疫苗的构建与鉴定 |
| 2.2.1 S, M 基因的克隆与鉴定 |
| 2.2.2 大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 |
| 2.2.3 重组真核质粒的转化和筛选： |
| 2.2.4 重组质粒的大量提取及纯化 |
| 2.3 小鼠免疫 |
| 2.4 MTT 法检测淋巴细胞增殖 |
| 2.5 细胞因子 IFN-γ,IL-4 水平的检测 |
| 2.6 ELISA 法检测小鼠血清中抗体效价 |
| 2.7 Western Blotting 检测 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 重组质粒的酶切及 PCR 鉴定 |
| 3.2 脾 T 淋巴细胞增殖反应分析 |
| 3.3 细胞因子水平的检测结果 |
| 3.4 小鼠血清的抗体水平检测结果 |
| 3.5 Western blot 分析抗体的特异性 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 新疆出血热病毒 M 基因编码蛋白分段表达及其抗原性的初步研究 |
| 摘要 |
| 引言 |
| 1 材料和试剂 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 Gc1 和 Gc2 蛋白的表达，纯化及多克隆抗体的制备 |
| 2.1.1 原核表达载体的构建 |
| 2.1.2 r-Gc1，r-Gc2 融合蛋白的优化表达及纯化 |
| 2.1.3 兔抗 rGc1，rGc2 多克隆抗体的制备 |
| 2.1.4 多克隆抗体效价的测定 |
| 2.2 XHFV Gc 蛋白生物信息学分析 |
| 2.3 改良生物合成肽策略 |
| 2.4 XHFV Gc 蛋白 16 肽融合蛋白表达载体的构建 |
| 2.5 XHFV Gc 蛋白 16 肽融合蛋白的表达 |
| 2.6 Western blot 检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 Gc 蛋白的生物信息学分析 |
| 3.2 pET-28a-Gc1 及 pET-28a-Gc2 原核表达载体的构建和鉴定 |
| 3.3 r-Gc1，r-Gc2 融合蛋白的优化表达及纯化 |
| 3.4 抗 rGc1，rGc2 多克隆抗体的滴度测定 |
| 3.5 Western blot 分析抗体的特异性 |
| 3.6 16 肽的诱导表达 |
| 3.7 Western blot 分析 16 肽的抗原性 |
| 3.8 16 肽抗原表位的保守性分析 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（8）脑炎/脑膜炎及出血热病原体多重PCR-Mass ARRAY检测技术的建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1. 引言 |
| 1.1 脑炎/脑膜炎病原体简介 |
| 1.1.1 虫媒性脑炎/脑膜炎病毒 |
| 1.1.2 脑炎/脑膜炎细菌 |
| 1.2 病毒性出血热病原体简介 |
| 1.2.1 拉沙热病毒(lassa fever virus.Lassa) |
| 1.2.2 胡宁病毒(junin virus.Junin) |
| 1.2.3 马秋波病毒(machupo virus.Machupo) |
| 1.2.4 汉坦病毒(hanta virus.Hanta) |
| 1.2.5 新疆出血热病毒(crimeancongo hemorrhagic fever virus.CCHFV) |
| 1.2.6 马尔堡病毒(marburg virus.Marburg) |
| 1.2.7 埃博拉病毒(ebola virus.Ebola) |
| 1.2.8 登革病毒(dengue virus.DENV) |
| 1.2.9 裂谷热病毒(rift valley fever virus.RVFV) |
| 1.2.10 肺综合征出血热病毒(sin nombre virus.SNV) |
| 1.2.11 黄热病毒(yellow fever virus.YFV) |
| 1.3 病原体检测技术 |
| 1.3.1 传统生物学技术 |
| 1.3.2 现代分子生物学技术 |
| 1.4 多重PCR-Mass ARRAY简介 |
| 1.4.1 MALDI TOF MS |
| 1.4.2 Mass ARRAY |
| 1.4.3 iPLEX基因型分析法的工作原理 |
| 1.4.4 多重PCR-Mass ARRAY的优势及应用 |
| 1.5 研究内容与意义 |
| 2. 膜炎/脑膜炎病原体多重PCR-Mass ARRAY检测技术的建立 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 样本 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 设备与耗材 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 脑膜炎病原体保守序列分析与筛选 |
| 2.2.2 内参基因的选择 |
| 2.2.3 引物的设计、配制与测试 |
| 2.2.4 质粒构建及验证 |
| 2.2.5 病毒培养液的预处理 |
| 2.2.6 临床标本的预处理 |
| 2.3 多重PCR-Mass ARRAY检测技术的建立 |
| 2.3.1 前PCR扩增 |
| 2.3.2 SAP消化 |
| 2.3.3 iPLEX延伸反应 |
| 2.3.4 树脂纯化 |
| 2.3.5 质谱检测 |
| 2.4 多重PCR-Mass ARRAY检测技术的特异性与灵敏度 |
| 2.4.1 峰图判读分析 |
| 2.4.2 特异性结果分析 |
| 2.4.3 灵敏度结果分析 |
| 2.4.4 重复性结果分析 |
| 2.5 病毒培养物的检测步骤与结果分析 |
| 2.5.1 纯病毒标本多重PCR-Mass ARRAY实验标准流程 |
| 2.5.2 纯病毒标本多重PCR-Mass ARRAY实验结果分析 |
| 2.6 临床标本检测步骤与结果分析 |
| 2.6.1 脑炎临床标本cDNA多重PCR-Mass ARRAY实验标准流程 |
| 2.6.2 临床标本多重PCR-Mass ARRAY实验结果分析 |
| 2.7 小结 |
| 2.7.1 特异性 |
| 2.7.2 灵敏度 |
| 2.7.3 实用性 |
| 3. 出血热病原体多重PCR-Mass ARRAY检测技术的建立 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 出血热病毒质粒标准品 |
| 3.1.2 试剂 |
| 3.1.3 设备与耗材 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 出血热病毒保守序列分析、筛选以及内参基因的选择 |
| 3.2.2 引物设计及测试 |
| 3.2.3 构建重组质粒 |
| 3.2.4 方法特异性、灵敏度及重复性验证 |
| 3.3 出血热病毒多重PCR-Mass ARRAY检测技术的建立 |
| 3.3.1 前PCR扩增 |
| 3.3.2 SAP消化 |
| 3.3.3 iPLEX延伸反应 |
| 3.3.4 树脂纯化 |
| 3.3.5 质谱检测 |
| 3.4 实验结果分析 |
| 3.4.1 特异性结果分析 |
| 3.4.2 出血热病毒重组质粒灵敏度结果分析 |
| 3.4.3 体系重复性结果分析 |
| 3.5 小结 |
| 3.5.1 特异性 |
| 3.5.2 灵敏度 |
| 3.5.3 可重复性 |
| 4. 讨论与结论 |
| 4.1 讨论 |
| 4.1.1 病原体保守序列选择的关键点 |
| 4.1.2 引物设计的关键点 |
| 4.1.3 实验结果的判定 |
| 4.2 结论 |
| 4.2.1 脑炎/脑膜炎病原体多重PCR-Mass ARRAY检测 |
| 4.2.2 出血热病原体多重PCR-Mass ARRAY检测 |
| 4.2.3 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间科研成果 |
（9）新疆出血热的研究进展（论文提纲范文）
| 1 生物学性状 |
| 1.1 病毒形态和结构 |
| 1.2 抵抗力 |
| 1.3 基因组成和抗原组成 |
| 2 临床特征 |
| 3 流行病学 |
| 4 实验室检测技术 |
| 4.1 病毒的分离与鉴定 |
| 4.2 血清学检查 |
| 4.3 分子生物学检测 |
| 5 诊断标准 |
| 6 治疗 |
| 7 预防 |
| 8 生物安全要求 |
（10）2003年巴楚县2例新疆出血热病例诊治报告（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料来源: |
| 1.2 方法: |
| 2 结果 |
| 2.1 病例1: |
| 2.2 病例2: |
| 3 讨论 |
四、55例新疆出血热的临床资料分析（论文参考文献）
- [1]内蒙古羊种布鲁氏菌的追溯及其节肢动物新宿主特性研究[D]. 黄天鹏. 内蒙古农业大学, 2020
- [2]亚东璃眼蜱的研究现状[J]. 丁帆,郭宪国. 中国病原生物学杂志, 2020(10)
- [3]新疆南疆部分地区绵羊蜱种鉴定及蜱带立克次体检测[D]. 郗宇. 塔里木大学, 2020(11)
- [4]新疆北疆地区蜱种分布、分子特征及重要蜱传病原的分子检测[D]. 刘志强. 石河子大学, 2019(05)
- [5]内蒙古西部地区蜱传克里米亚刚果出血热病毒基因组和分子流行病学研究[D]. 刘东晓. 宁夏大学, 2017(02)
- [6]新疆准噶尔盆地周边地区蜱与鼠类携带虫媒病毒的调查研究[D]. 寇春. 新疆大学, 2016(06)
- [7]新疆出血热病毒M、S基因DNA疫苗的免疫效果及糖蛋白抗原表位的初步分析[D]. 李阳. 新疆大学, 2014(02)
- [8]脑炎/脑膜炎及出血热病原体多重PCR-Mass ARRAY检测技术的建立[D]. 王晓宏. 陕西师范大学, 2012(02)
- [9]新疆出血热的研究进展[J]. 相大鹏,师永霞,李小波. 中国医药生物技术, 2009(01)
- [10]2003年巴楚县2例新疆出血热病例诊治报告[J]. 阿不力提甫·阿不力孜,努尔比亚·吾不力阿西木,塔依尔·吾不力. 地方病通报, 2007(05)