一、654-2在慢性肾病中的应用（论文文献综述）
高芯,李长印,段徐彬,丁选胜[1]（2021）在《脂质组学在慢性肾病研究中的应用》文中研究表明慢性肾病（CKD）常伴随心血管疾病的发生,目前,CKD已成为世界性的公共卫生问题。早期发现和监测肾功能是预防CKD发生和发展的关键。传统的肾功能生物标志物检测在早期CKD中灵敏度较低,因此迫切需要高灵敏性的诊断方法。脂质组学是研究脂质紊乱的代谢组学分支,自2003年提出以来,逐渐成为CKD早期诊断和监测的有效手段。综述近年来脂质组学在CKD及相关慢性肾损害研究中的应用进展,并对涉及的脂质紊乱进行了总结与探讨,以期为后续相关研究提供参考。
朱子璇[2]（2021）在《白介素33在糖尿病肾病慢性病程中的免疫调节作用》文中认为背景:糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy,DN）已成为慢性肾脏病及终末期肾病的首要原因,以蛋白尿为主要特征,伴随肾小球滤过率的进行性下降,但至今仍缺乏对DN发生发展机制的了解及有效的治疗手段。白介素33（Interlukin-33,IL-33）是白介素1家族中的一员,在组织损伤后由内皮细胞等释放进一步激活固有免疫系统,是一种炎症损伤的预警因子,同时其下游调控固有淋巴细胞2型（Type 2 Innate Lymphoid Cells,ILC2s）等多种固有免疫组分,且在肺、肝脏等器官中显示出了与纤维化的密切关系。炎症贯穿DN病程的始终,而肾小球硬化及间质纤维化则是与DN患者肾脏结局密切相关的因素,现尚缺乏DN等慢性肾脏病中IL-33的机制探究,结合它与炎症及纤维化的调控关系,我们假设IL-33在DN中具有介导炎症加重及纤维化的致病作用。方法:1)回顾纳入于北京协和医院肾穿刺活检诊断糖尿病肾病患者21例作为疾病组,纳入IgAN 5例,膜性肾病5例作为疾病对照组,收集尿液及肾脏标本;纳入孤立性肾癌根治术者6例,采集癌旁肾组织作为正常肾组织;纳入性别年龄匹配的健康对照者5例,收集晨尿。利用酶联免疫吸附试验测定外周IL-33水平、免疫组化半定量评估肾脏内源性IL-33情况,观察DN患者、其他慢性肾脏疾病患者及正常对照者间IL-33差异,评估DN疾病状态中肾脏内源性IL-33的表达变化。2)应用不同周龄的db/db及db/m小鼠（分为db/db疾病组及db/m对照组）、使用酶联免疫吸附试验、免疫组化半定量及免疫印迹技术共同评估不同病程阶段肾脏组织及尿液IL-33情况,进一步评估DN动物模型中内源性IL-33的表达水平及其与病程的关系;3)应用IL-33敲除小鼠STZ联合单侧肾切除模型（分为IL-33敲除C57B1/6J小鼠+STZ+单侧肾切除组（IL-33KO+STZ+Unx组）、野生型C57B1/6J小鼠+STZ+单侧肾切除组（WT+STZ+Unx组）及IL-33敲除C57B1/6J小鼠+柠檬酸钠+假手术组（对照组））进行IL-33调控作用的探究,通过肾脏特殊染色（MASSON染色、PAS染色、H&E染色）及小鼠肌酐、尿蛋白、血糖等生化指标评估IL-33敲除对于DN肾脏表型影响。4)为进一步进行机制探究,重点关注IL-33 下游ILC2 通路调控情况及其与纤维化的关系,基于免疫荧光及流式细胞术评估db/db小鼠及糖尿病肾病患者肾脏局部ILC2水平及在疾病模式下内源性IL33表达形式。结果:1)通过人类标本从患者层面验证,IL-33在糖尿病肾病组肾脏组织及尿液中均较正常肾组织明显表达升高,IL-33在糖尿病肾病组肾脏组织较正常肾组织明显表达升高（P<0.0001）,且表达水平与肾脏纤维化程度呈正相关（Spearman’sρ=0.072,P=0.007）,与具体疾病分型、球性硬化程度、炎症细胞浸润程度、蛋白尿水平及肾功能损伤程度均无明显关系。IL-33在DN病例中较正常组织明显表达增多,但IgAN病例中与糖尿病肾病组有相似升高,说明IL-33肾脏局部表达升高可能不具疾病特异性,其升高可能与疾病诱发的纤维化过程相关。此外血清中未观察到IL-33在疾病组及健康对照组间的差异（P=0.407）,但在尿液中可见糖尿病肾病组患者IL-33/Cr水平升高（P=0.017）。2)在糖尿病肾病早期动物模型中发现IL-33在DN早期出现,早于病理损伤出现,可能为预警因子,其程度随病程增加而增加。在16周龄db/db早期糖尿病小鼠动物模型中,即有IL-33在肾脏局部较对照组db/m小鼠升高（P=0.011）,这种升高早于肾功能损害及肾脏病理改变出现,39周龄db/db小鼠较24周龄db/db小鼠IL-33肾脏局部水平进一步升高（P=0.04）。同时db/db组尿液中IL-33 水平较对照组增高（P=0.030）,且39周龄db/db小鼠较24周龄db/db小鼠尿液IL-33水平有升高趋势,但尚无统计学差异（P=0.335）。3)在IL-33KO小鼠DN后期模型中,验证发现IL-33具有致病作用。STZ诱导糖尿病联合单侧肾切除的IL-33敲除的小鼠模型中,疾病模型组均可见间质纤维化、炎症细胞浸润及系膜增生等病理改变,提示DN疾病后期模型建模成功。其中,32周龄IL-33KO+STZ+Unx组较WT+STZ+Unx组高血糖水平减低（P<0.001）,尿白蛋白/肌酐水平减低（P=0.021）,整体生存延长的趋势,但尚无统计学差异（P=0.060）。同时特殊染色可见IL-33KO+STZ+Unx组较WT+STZ+Unx组肾脏纤维化、炎症细胞浸润及肾小球系膜增生均减轻。4)通过人类肾脏组织免疫荧光共染提示IL-33在疾病情况下可由成纤维细胞主要分泌,提示其与纤维化相关。人类肾脏IL-33免疫组化染色提示IL-33阳性细胞在糖尿病肾病患者及IgAN患者中与正常肾组织中表达模式具有明显区别,前者主要表达于间质炎性细胞浸润及纤维化部分,后者主要在毛细血管袢内皮细胞及大血管内皮细胞表达,进一步进行免疫荧光染色,提示疾病状态下由主要为成纤维细胞表达IL-33。5)通过流式细胞术定量,显示ILC2在db/db小鼠肾脏局部含量极低,占肾脏淋巴细胞比例约0.26-0.39%,且在不同周龄db/db组ILC2比例均低于db/m 比例（39周龄:P=0.015）,免疫荧光染色未能在糖尿病肾病患者及正常肾组织中定位ILC2细胞。结论:IL-33参与了糖尿病肾病疾病的全程,在早期即可见到IL-33肾脏局部及尿液的增多,且升高早于肾功能损害及肾脏病理改变出现,提示其可能存在作为预警因子的作用。随着病程进展,IL-33表达增多,敲除IL-33可使疾病表型得到一定好转,疾病状态下肾脏病变局部的内源性IL-33主要为成纤维细胞而非内皮细胞分泌,支持IL-33可能通过介导纤维化参与加重糖尿病肾病这一论点,提示IL-33可作为后续糖尿病肾病探究及治疗的潜在靶点。背景:肾脏是单克隆免疫球蛋白沉积病（MIDD）中受累最多的器官,如不经治疗最终可发展为终末期肾病,直接影响患者生活质量及生存情况。但回顾现有研究,少有研究对肾脏病理中不可逆的慢性损伤成分与临床表现及其预后之间的关系进行评估分析。方法:回顾性纳入2001年1月至2018年12月期间于北京协和医院经肾穿刺活检诊断的单克隆球蛋白沉积病（Monoclonal Immunoglobulin Deposition Disease,MIDD）20例及肾轻链淀粉样变性（Light-chain Amyloidosis,AL）患者20例。对肾脏病理中肾小球硬化、肾小管萎缩/间质纤维化、动脉硬化等慢性病变成分分别进行半定量评分,并根据2017年提出的肾脏慢性病变分级体系对整体慢性病变进行分级评估。探究同为罕见结节硬化性肾小球病,MIDD与AL患者间临床表现及病理改变的异同,同时评价MIDD中肾脏不可逆的慢性病变与临床表现之间的关系,以及它们与ESRD进展风险的相关性。结果:与AL患者相比,MIDD患者表现出更为严重的肾功能不全（血清肌酐:193.0（117.3-356.25）vs.81.5（68.5-140.29）,P<0.001）,但低白蛋白血症较 AL 患者轻（MIDD vs.AL,33.0±6.4vs.24.9±7.6,P=0.001）。肾脏病理方面,不同于 AL 患者多表现为经典的结节硬化,MIDD患者缺血相关损伤更明显,表现为全肾小球硬化,间质纤维化倾向更为严重。同时,与AL相比,在MIDD中总体慢性损伤程度明显升高,且与肾小球滤过率独立相关（β系数（95%置信区间）:-4.618（-8.238-0.999）,P=0.017）。此外,MIDD诊断时重度间质纤维化（病变占皮质比例>75%）为患者进展为为ESRD的危险因素。结论:MIDD基线肾脏病理中总体慢性病变程度及重度间质纤维化与临床及预后密切相关。在MIDD的诊疗过程中,临床应重视MIDD慢性病变的分级评估,可能有助于指导后续治疗及评估肾脏结局。
朱威[3]（2021）在《肌肽通过抑制焦亡减轻糖尿病肾病中足细胞损伤的作用与机制》文中认为背景与目的:糖尿病肾病（DN）是糖尿病主要并发症之一,最后常常发展为终末期肾病。最新的流行病学数据表明,由DN导致的终末期肾病是糖尿病患者的主要死亡原因,造成个人家庭和社会巨大的经济负担。在DN的发展过程中,慢性炎症被认为是其关键因素。由于目前对于DN的治疗仍缺乏有效的治疗药物和关键靶点,寻找新型的更有效的DN治疗药物有重要意义。肌肽（L-Carnosine）,它是由一种具有多生物活性的二肽,是由两个氨基酸β-丙氨酸和左旋组氨酸组成的。肌肽最初是在骨骼肌中发现的,在骨骼肌中,它的存在量大于其他组织。大多数关于肌肽生理作用的研究都是在骨骼肌上进行的。然而,最近的研究表明,肌肽有可能在其他组织,包括大脑、心脏、胰腺、肾脏和癌细胞中发挥更广泛的生理作用。前期研究结果显示肌肽在肾脏疾病中可以发挥抗炎抗纤维化的作用。本课题进一步探究肌肽对糖尿病肾病中足细胞的保护作用及机制是否与调控焦亡有关,为糖尿病肾病寻找潜在的治疗靶点和新的思路。方法:体外实验:选取第6至15代之间的小鼠足细胞（MPC5）用于实验。首先通过MTT筛选药物最适治疗浓度。该实验分为五组:正常对照组,单独给药组,甘露醇对照组,高糖模型组,高糖加药组。通过Western blot检测其功能蛋白nephrin和podocin,免疫荧光观察足细胞爬片,采用Western blot和Real-time PCR检测肾脏炎症因子IL-1β和IL-18的释放。运用Western blot检测其炎症通路蛋白NLRP3和ASC的表达水平。然后运用Western blot和Real-time PCR检测焦亡关键蛋白caspase 1和GSDMD。最后运用TUNEL染色检测细胞程序性死亡水平。采用分子对接、CETSA实验验证肌肽和caspase 1的结合。通过si RNA转染沉默caspase 1表达,确认caspase 1沉默的效果后,运用Western blot,Real-time PCR检测肌肽对足细胞损伤（nephrin、podocin）、炎症（NLRP3、ASC、IL-1β和IL-18）及焦亡（GSDMD）的作用。体内实验:通过小鼠连续5d腹腔注射STZ（50mg/kg）构建糖尿病模型,给予1g/kg的肌肽治疗。该实验分为四组:正常对照组,单独加药组,STZ模型组,STZ加药组。造模成功后,检测24h尿白蛋白变化,运用HE、PAS染色观察各组肾小球形态学变化,运用透射电镜检测各组足突宽度与基底膜厚度变化。通过免疫组化以及Western blot检测肾组织内足细胞的数目（WT1）和足细胞的功能蛋白nephrin和podocin。同样采用免疫组化和Western blot检测NLRP3表达,Western blot检测ASC。通过Western blot检测炎症因子IL-1β和IL-18。最后运用免疫组化和Western blot检测肌肽靶蛋白caspase 1变化以及焦亡水平（GSDMD）变化。结果:体外实验:MTT显示,肌肽的最佳治疗浓度为40μM。Western blot和免疫荧光结果显示肌肽可以减轻高糖环境下足细胞的损伤。Western blot和Real-time PCR也表明肌肽可以减轻炎症相关蛋白NLRP3、ASC以及炎症因子IL-1β和IL-18。最后Western blot和Real-time PCR同样表明肌肽明显减少了焦亡关键蛋白caspase 1和GSDMD的表达,TUNEL染色也证实了肌肽可以减轻程序坏死的发生。通过分子对接及细胞热位移实验（CESTA）均证实了caspase 1为肌肽的可能作用靶点。免疫组化显示DN患者肾组织中caspase 1的高表达。然后我们在沉默caspase 1的细胞上,予以肌肽治疗后,Western blot和Real-time PCR结果显示沉默caspase 1后可以减轻足细胞功能损伤、炎症以及焦亡水平,但肌肽无法进一步发挥其拮抗高糖损伤的作用。体内实验:24h尿白蛋白结果表明,肌肽可以明显逆转STZ诱导的肾脏损伤。同样HE、PAS染色显示肌肽减轻肾小球形态学变化。透射电镜结果显示肌肽可以减轻STZ诱导下的足细胞足突及基底膜改变。Western blot,Real-time PCR和免疫组化证实STZ诱导的足细胞功能蛋白的损失、炎症水平以及焦亡水平的升高都可以被肌肽所拮抗。同时TUNEL染色也显示肌肽缓解了STZ诱导的程序性死亡的发生。结论:（1）体外研究显示,肌肽抑制STZ诱导的足细胞损伤、炎症反应、焦亡反应。（2）体外研究显示,经过分子对接以及细胞热位移实验（CESTA）证明肌肽可以通过靶向caspase 1发挥作用。在沉默了caspase 1的细胞中,肌肽不能进一步缓解高糖诱导的足细胞损伤、炎症反应及焦亡水平。提示肌肽可能通过caspase 1依赖性机制对STZ诱导的足细胞损伤起保护作用。（3）体内实验表明,肌肽有效抑制STZ诱导的小鼠肾脏足细胞损伤、炎症反应、焦亡的发生。本研究可为糖尿病肾病的防治提供了新的靶点与策略。
阿丽米热·阿不都热依木[4]（2021）在《实时剪切波弹性成像技术评估慢性肾病分期的诊断价值》文中研究说明目的:研究实时剪切波弹性成像技术（shear wear elastography,SWE）在慢性肾脏疾病（chronic kidney disease,CKD）的无创诊断及分期中的临床价值。方法:采用法国Aix Plore型彩色多普勒超声诊断仪实时剪切波弹性成像技术检测临床确诊为CKD患者60例及健康体检人群45例的肾脏弹性模量值,检测病例组血肌酐（Serum creatinine,SCr）、24h尿蛋白（24h UP）、肾小球滤过率（e GFR）等生化指标,并根据血肌酐数值及病理结果均进行CKD分期。比较病例组及对照组人群左、右肾中下部肾实质的杨氏模量值（YM）,以及病例组不同分期左、右肾中下部实质杨氏模量值的差异。结果:病例组患者双肾中下部肾实质杨氏模量值明显高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;CKD1期患者于CKD2期患者左、右肾脏中下部杨氏模量值比较,差异无统计学意义（P<0.05）;CKD3、4、5期患者左、右肾中下部实质杨氏模量值比较,差异有统计学意义（P<0.05）,随着慢性肾病患者病情的加重,其肾实质各个区域杨氏模量值也会逐渐增加,差异有统计学意义（P<0.05）。病例组据病理结果分轻、中、重组,轻度与对照组双肾杨氏模量值比较,差异无统计学意义（P>0.05）;中度及重度双肾中下部肾实质杨氏模量值均高于对照组差异有统计学意义（P<0.05）。病例组肾脏杨氏模量值与血肌酐（Scr）具有相关性,差异有统计学意义（P<0.05）;病例组杨氏模量值与肾小球滤过率（e GFR）具有相关性,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:SWE能够实时对慢性肾病患者的弹性模量值进行定量检测,并且该技术在无创诊断和病情分析中有着重要的应用价值。
朱自强[5]（2020）在《多肽AcSDKP减少马兜铃酸诱导的小鼠肾小管间质纤维化》文中认为研究目的目前,临床上各种原发性或继发性肾脏疾病进展至终末期肾病（end stage renal disease,ESRD）后还无法进行人为逆转。肾小管间质纤维化是ESRD进展的决定性因素之一。本研究主要探讨,在马兜铃酸诱导肾脏纤维化之后,氨基端乙酰化丝氨酰-门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸多肽（N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline,AcSDKP）能否减少已经形成的肾小管间质纤维化,及其主要机制。研究方法第一部分:本研究首先建立小鼠马兜铃酸肾病肾小管间质纤维化自身对照实验模型。C57BL/6小鼠在接受单次肾切除术后,给予5天5mg/kg/day的马兜铃酸（aristolochic acid,AA）腹腔注射。通过深度测序检测马兜铃酸（AA）组和自身对照组肾脏标本中mi RNA和m RNA的全基因组表达谱的变化。部分显着差异表达mi RNA（Defferently expressed mi RNA,DE mi RNA）和m RNA（Defferent expressed m RNA,DE m RNA）经实时RT-PCR验证。利用Gene Ontology（GO）和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）软件对差异表达DE m RNA的细胞功能和富集信号通路进行分析。第二部分:建立马兜铃酸急性肾病小鼠模型。AA组与AA+AcSDKP组C57BL/6小鼠腹腔注射马兜铃酸（AA）（10 mg/kg/day）5天后,对照组同期腹腔注射生理盐水。第6天,AA+AcSDKP组多肽AcSDKP腹腔注射15天,AA组与对照组同期进行生理盐水腹腔注射。HE染色法和马松（Masson）染色法分别检测肾脏组织损伤与纤维化的改变。对小鼠的血清肌酐、血尿素（Blood Urea Nitrogen,BUN）与尿微量白蛋白进行生化检测。实时荧光RT-PCR检测小鼠肾脏促纤维化因子的基因Serpine1（plasminogen activator inhibitor-1（PAI-1）蛋白的基因）、extracellular matrix degradation inhibitory factor-1（TIMP-1）、extracellular matrix degradation inhibitory factor-3（TIMP-3）、interleukin-11（IL-11）与transforming growth factor beta 1（TGFβ1）的m RNA水平变化。Western blot检测小鼠肾脏以及小鼠肾脏原代成纤维细胞体外培养的细胞与细胞培养上清中的PAI-1蛋白水平。免疫组化检测肌成纤维细胞标志物Alpha-smooth muscle actin（α-SMA）蛋白以及免疫细胞标志物inducible nitric oxide synthase（i NOS）（巨噬细胞/单核细胞标志物）、Leukocyte differentiation antigen 4（CD4）（T Helper淋巴细胞标志物）与Leukocyte differentiation antigen 8（CD8）（细胞毒性T淋巴细胞标志物）。免疫荧光法分别检测凋亡相关蛋白Fas、Bax以及bcl-2与肌成纤维细胞标志物α-SMA在小鼠肾脏中共表达的变化。第三部分:建立马兜铃酸慢性肾病小鼠模型。AA组与AA+Ac SDK组的C57BL/6小鼠腹腔注射马兜铃酸（5 mg/kg/day）4星期,对照组腹腔注射生理盐水。休息16周后,AA+AcSDKP组给予多肽AcSDKP腹腔注射4星期,AA组与对照组同期给予生理盐水腹腔注射。HE染色法和马松（Masson）染色法检测肾脏组织病理学与纤维化的改变。小鼠的血清肌酐与尿素以及与尿微量白蛋白进行生化检测。实时荧光RT-PCR检测小鼠肾脏促纤维化因基因Serpine1（PAI-1蛋白基因）、TIMP-1、TIMP-3、IL-11与TGFβ1的m RNA表达水平变化。Western blot检测小鼠肾脏的PAI-1蛋白水平。免疫组化检测肌成纤维细胞标志物α-SMA蛋白以及免疫细胞标志物i NOS（巨噬细胞/单核细胞标志物）、CD4（T Helper淋巴细胞标志物）与CD8（细胞毒性T淋巴细胞标志物）。免疫荧光法分别检测凋亡相关蛋白Fas、Bax以及bcl-2与肌成纤维细胞标志物α-SMA在小鼠肾脏中共表达的变化。结果第一部分:马兜铃酸诱导的小鼠肾小管间质纤维化模型中肾脏mi RNA与m RNA表达谱的改变HE染色法和马松（Masson）染色法结果显示马兜铃酸诱导小鼠肾脏组织损伤和肾小管间质纤维化。AA治疗组和自身对照组mi RNA与m RNA的全基因组表达谱发生显着改变,分别有82个显着差异表达的DE mi RNA和4605个显着差异表达的DE m RNA,部分经实时荧光RT-PCR验证。其中,促纤维化的mi R-21家族、mi R-433家族和mi R-132家族显着升高;而抗纤维化的mi R-122-5p和let-7a-1-3p明显降低。本研究使用GO与KEGG软件分析细胞功能和DE m RNA富集的通路。本研究还分析发现了767对反向调控的DE mi RNA与其DE m RNA靶点,并构建上述DE m RNA靶点富集的KEGG信号通路相关的DE mi RNA-DE m RNA反向调控网络。此外,差异表达的DE m RNA分析提示TIMP-1与PAI-1可能是细胞外基质降解的关键抑制因子,为后续研究提供了一部分新的思路与研究对象。第二部分:多肽AcSDKP减少小鼠马兜铃酸急性肾病中已经形成的肾小管间质纤维化。在急性马兜铃酸肾病模型中,多肽AcSDKP能够显着减少经已经形成的肾小管间质纤维化、肾小管病变与肾功能受损。与对照组相比较,AA组中小鼠肾脏中细胞外基质降解的抑制因子TIMP-1与PAI-1以及促纤维化因子TGFβ1与IL-11的m RNA水平显着上调,PAI-1蛋白水平显着上调;肌成纤维细胞（α-SMA+）、巨噬/单核细胞（i NOS+）、T Helper淋巴细胞（CD4+）与细胞毒性T淋巴细胞（CD8+）的数量显着升高。马兜铃酸还诱导小鼠肾脏肌成纤维细胞的凋亡抵抗显着增加。与对照组相比,AA组中肌成纤维细胞（α-SMA+）的凋亡抑制蛋白bcl-2显着上调,促凋亡蛋白Fas、Bax以及Bax/bcl-2的比值也显着下调。后续的多肽AcSDKP给药能够显着降低马兜铃酸诱导的上述变化。与AA组相比较,在AA+AcSDKP组中,细胞外基质降解的抑制因子TIMP-1与PAI-1与促纤维化因子IL-11的m RNA水平显着下降,PAI-1的蛋白水平显着下降;在肌成纤维细胞（α-SMA+）中,凋亡抑制蛋白bcl-2显着下降,而促凋亡蛋白Fas、Bax以及Bax/bcl-2的比值均显着上升;肌成纤维细胞（α-SMA+）、巨噬/单核细胞（i NOS+）、T Helper淋巴细胞（CD4+）与细胞毒性T淋巴细胞（CD8+）的数量均显着下降。此外,在体外培养的小鼠肾脏原代成纤维细胞与细胞培养上清中,多肽AcSDKP还能够抑制TGFβ1诱导的PAI-1蛋白的表达上调。第三部分:多肽AcSDKP减少小鼠马兜铃酸慢性肾病中已经形成的肾小管间质纤维化。在马兜铃酸慢性肾病模型中,多肽AcSDKP也能够显着减少马兜铃酸诱导的已经形成的肾小管间质纤维化、肾小管病变与肾功能受损。与对照组相比较,在AA组中,马兜铃酸能够显着增高细胞外基质的降解抑制因子TIMP-1与PAI-1的m RNA水平,促纤维化因子TGFβ1与IL-11的m RNA水平,以及PAI-1蛋白水平;在肌成纤维细胞（α-SMA+）中显着上调凋亡抑制蛋白bcl-2,显着下调促凋亡蛋白Fas、Bax以及Bax/bcl-2的比值;还能够显着增加肌成纤维细胞（α-SMA+）、巨噬细胞/单核细胞（i NOS+）、T Helper淋巴细胞（CD4+）与细胞毒性T淋巴细胞（CD8+）的数量。与AA组相比较,在AA+AcSDKP组中,多肽AcSDKP能够显着降低TIMP-1、PAI-1、TGFβ1与IL-11的m RNA水平,PAI-1蛋白水平;显着降低肌成纤维细胞凋亡抵抗（bcl-2表达下调,Fas、Bax表达上调,Bax/bcl-2比值上升）;并且显着下降肌成纤维细胞（α-SMA+）、巨噬细胞/单核细胞（i NOS+）、T Helper淋巴细胞（CD4+）与细胞毒性T淋巴细胞（CD8+）的数量。结论本研究新发现,在马兜铃酸诱导形成纤维化之后,多肽AcSDKP能够显着减少肾小管间质纤维化,并发现:1)马兜铃酸诱急性肾病中肾脏mi RNA与m RNA全基因组表达谱发生显着改变,并提示TIMP-1与PAI-1可能是细胞外基质降解的关键抑制因子;2)在急性与慢性马兜铃酸肾病模型中,多肽AcSDKP能够减少已经诱导形成的肾小管间质纤维化;3)多肽AcSDKP一方面能够显着降低马兜铃酸诱导的肌成纤维细胞与免疫细胞数量的增加,肌成纤维细胞凋亡抵抗的增强,以及促纤维化因子IL-11的m RNA水平的显着上调,从而减少细胞外基质成分的合成;另一方面,还能够显着降低细胞外基质的降解抑制因子PAI-1与TIMP-1的m RNA水平的大幅度上调,从而解除对细胞外基质降解的抑制,促进细胞外基质的降解。
韦晓[6]（2020）在《膳食辣椒素及代谢手术改善糖尿病肾病的机制》文中提出背景和目的:糖尿病肾病是糖尿病主要并发症之一,最为常见并且最为严重。糖尿病肾病已经成为慢性肾病,以及终末期肾病的主要发病原因。在世界范围内和中国,糖尿病及糖尿病肾病的发病率都在逐渐上升,是一项极大的社会负担。目前针对糖尿病肾病的主要治疗措施是严格控制血糖,以及辅助控制血压,改善生活方式等。严格控制血糖虽然能部分延缓白蛋白尿的发生,但是在长时间的观察随访中,并不能阻止或改善糖尿病肾病的发生发展,在多年后肾小球滤过率依然大幅降低,甚至增加全因或者心血管原因的死亡率。使用胰岛素在1型或者2型糖尿病患者进行血糖控制,甚至增加低血糖事件发生的风险。因此,探索血糖控制或胰岛素方案之外的糖尿病肾病治疗措施十分必要。有报道发现食辣人群相比于不食辣人群在肾脏疾病发生和进展上有不同程度的减缓作用,但是尚无相关机制的研究。辣椒素通过激活体内一种瞬时受体电位（Transient receptor potential,TRP）通道TRPV1发挥作用。TRP通道是一类可以透过多种阳离子,包括Ca2+,Mg2+等的非选择性阳离子通道,参与调节与Ca2+相关的多种细胞行为。而肾脏中存在TRPs通道的表达,参与肾脏功能的调控。TRPV1可以被包括辣椒素在内的多种内源性和外源性因素激活,膳食辣椒素激活TRPV1后,增加细胞内的瞬时Ca2+内流,参与调控多种组织的生理功能。有报道TRPV1参与调控急性肾损伤,但是其对糖尿病肾病的影响尚未有研究。有报道TRPV1在脂肪等组织中,可以激活AMPK。但是TRPV1在肾脏中是否能激活AMPK及其相关可能通路尚无报道。另外,近年来人们也关注到另外一种治疗方法,代谢手术,对糖尿病肾病的治疗效果。代谢手术最初应用于肥胖的治疗,现在已经广泛应用于2型糖尿病的治疗。在世界范围内以及中国,近年来施行的代谢手术的主要目的已经从肥胖变为代谢相关疾病,包括糖尿病,施行的最主要术式也变为Roux-en-Y胃旁路术（Roux-en-Y Gastric Bypass）。关于代谢手术对于糖尿病肾病的改善效应已经在部分回顾性研究中得到证实。在部分伴有糖尿病肾病的患者进行手术后,糖尿病肾病得到显着改善,尿蛋白降低,肾小球滤过率恢复。而且在手术前肾功能已经严重损伤的患者,手术也具有显着的效果,而且十分安全。但是手术改善糖尿病肾病的机制尚无报道。在糖尿病肾病的发生与发展中,足细胞线粒体功能障碍是十分重要的一环。在糖尿病状态下,足细胞的线粒体功能严重缺陷,能量生成不足。而线粒体的Ca2+稳态是线粒体功能维持的基础。线粒体发生Ca2+超载会导致线粒体功能的严重损伤。线粒体相关内质网膜（Mitochondria-associated ER membrane,MAM）是线粒体与内质网之间的连接通道,允许Ca2+从内质网进入线粒体,对调节线粒体的Ca2+稳态十分重要。在一些糖尿病靶器官中,MAM的形成参与线粒体Ca2+稳态的调节。但是MAM在糖尿病肾病中的作用尚未得到研究。有报道AMPK在心脏中可以调控MAM的形成,但是在肾脏中,AMPK对MAM的作用,尚未有报道。AMPK在糖尿病肾病治疗中的可能作用被广泛报道。目前认为糖尿病状态下AMPK的活性被抑制。但是糖尿病状态下,线粒体功能缺陷,能量生成不足,AMPK应该被激活,但是大量研究报道AMPK活性被抑制,这其中的机制鲜有研究。探索AMPK活性被抑制的机制对于糖尿病以及糖尿病肾病的治疗都具有重大意义。本文的目的在于:1,辣椒素改善糖尿病肾病的机制。2,AMPK与MAM在辣椒素改善糖尿病肾病改善中的作用。3,代谢手术改善糖尿病肾病的机制。4,研究AMPK在糖尿病状态下未激活的机制。材料方法:本研究由两部分组成,第一部分,在db/db小鼠以及TRPV1敲除小鼠,探索TRPV1对糖尿病肾病的作用,以及AMPK和MAM在其中的作用机制。第二部分,在糖尿病大鼠和AMPKα2敲除小鼠中,进行RYGB手术干预,探索AMPK在糖尿病状态被抑制以及RYGB手术改善糖尿病肾病的机制。具体内容如下:1.在db/db小鼠和TRPV1 KO糖尿病小鼠以及对照小鼠中,以膳食辣椒素干预16周,观察肾脏功能指标,尿白蛋白,肾小球滤过率,血肌酐,尿素氮。观察肾脏病理结构。2.检测WT和TRPV1 KO糖尿病小鼠的线粒体功能,数量的变化。检测线粒体和内质网的Ca2+稳态,在电镜中观察足细胞中MAM的形成。3.检测辣椒素干预后,对糖尿病小鼠肾小球和足细胞AMPK,nephrin,podocin,CaMKKβ蛋白表达变化的影响,进一步通过转染Ca MKKβsi RNA,以及用CaMKKβ抑制剂干预足细胞,检测辣椒素激活AMPK的机制。4.检测辣椒素干预后,小鼠肾小球和足细胞Fundc1蛋白和MAM蛋白表达和复合体完整性。进一步在足细胞系过表达Func1,检测Fundc1蛋白对MAM蛋白表达和复合体完整性的影响。5.检测AMPK对Fundc1蛋白表达,Fundc1蛋白启动子区域与ZF5蛋白结合对Fundc1蛋白转录的影响。6.在SD大鼠以STZ诱导糖尿病,4周后对糖尿病大鼠进行RYGB手术,观察大鼠的肾脏功能指标,尿白蛋白,肾小球滤过率,血肌酐,尿素氮。观察肾脏病理结构。检测手术对大鼠线粒体功能,数量,AMPK,PGC1-α的表达的影响。7.为了检测AMPK在手术效果中的作用,分别在WT和AMPKα2敲除小鼠中,以STZ诱导糖尿病,然后进行手术干预,以及在手术后的糖尿病大鼠中,以微渗透泵给与AMPK抑制剂CC,观察肾功能指标变化。8.检测手术对大鼠肾皮质AMP/ATP的比例的影响。9.对糖尿病大鼠和手术后大鼠肾皮质进行microarray m RNA芯片检测,探索与AMPK相关的变化通路。10.检测糖尿病大鼠和手术后大鼠肾皮质NADPH含量变化,NADPH合成酶H6PD表达的变化。在细胞中验证NADPH对AMPK活性的影响。在大鼠注射H6PD的r AAV,在体验证NADPH含量对AMPK活性的影响,对肾脏功能的影响。结果:1.db/db小鼠和STZ诱导的糖尿病WT小鼠肾功能下降,膳食辣椒素干预的db/db和WT小鼠,肾功能改善,而TRPV1 KO小鼠肾功能没有改善。2.糖尿病小鼠足细胞线粒体钙超载,MAM形成显着增多,而辣椒素干预的小鼠,线粒体钙超载改善,MAM减少。3.激活TRPV1后,肾小球和足细胞系的AMPK磷酸化,nephrin和podocin的表达增加。给与CaMKKβ的siRNA或抑制剂后,AMPK磷酸化,nephrin和podocin的表达下调。4.激活TRPV1后,肾小球和足细胞系的Fundc1表达下调,Fundc1过表达后,MAM形成增多,线粒体钙超载。5.AMPK激活后显着抑制Fundc1表达以及启动子区域与ZF5蛋白的结合。6.在糖尿病大鼠,手术后可以显着改善肾功能和线粒体功能,并且肾小球AMPK磷酸化和PGC1-α表达上调。7.手术对糖尿病肾病的改善效应在AMPK抑制剂CC干预大鼠或AMPKα2基因敲除后显着减弱。8.糖尿病大鼠以及手术后大鼠肾皮质AMP/ATP比例升高。9.手术后大鼠NADPH合成酶H6PD表达下调,肾皮质NADPH含量减少。在足细胞系中,NADPH显着抑制AMPK活性。10.糖尿病大鼠在给与H6PD shRNA rAAV后,AMPK磷酸化上调,肾功能显着恢复。结论:1.辣椒素激活TRPV1可以显着改善足细胞线粒体功能及糖尿病肾病。2.辣椒素激活TRPV1,促进瞬时Ca2+内流,通过上调CaMKKβ表达激活AMPK,AMPK进一步抑制Fundc1表达从而抑制MAM的形成,改善线粒体Ca2+稳态。3.糖尿病大鼠肾皮质AMPK活性被抑制,代谢手术可改善肾小球线粒体功能及改善糖尿病肾病,其机制与代谢手术致H6PD表达下调,NADPH生成减少以及AMPK被激活有关。
徐丽婷[7]（2020）在《AOPP在糖尿病肾病肾小管间质纤维化中的作用及其机制研究》文中提出研究背景和目的糖尿病肾病（Diabetic nephropahy,DN）是糖尿病患者最常见血管并发症之一,其发病率在全球范围内呈逐年上升趋势,已经成为严重威胁人类健康的全球性公共卫生问题。终末期氧化蛋白产物（Advanced oxidation protein products,AOPP）是氧化应激过程中形成的蛋白质产物。有研究表明,糖尿病动物模型中AOPP蓄积能促进肾组织纤维化。蛋白激酶C（Protein kinase C,PKC）系统,又称为磷脂肌醇信号途径,在多种细胞线粒体损伤、激活氧化应激、促进纤维化过程中发挥关键作用。有研究证实,DN中AOPP蓄积可以通过激活PKC信号通路触发足细胞损伤,PKC在DN纤维化中发挥重要作用。DN发病机制复杂,尚未完全阐明,目前缺乏特异的治疗方法。因此,进一步深入研究DN发病机制,积极探索延缓其进展的新治疗策略具有重要的现实意义。足细胞损伤、肾小球纤维化是DN发生发展的关键因素。通过查阅文献,我们发现肾小管间质纤维化（Tubulointerstitial fibrosis,TIF）在DN中发挥重要作用,其机制研究日益受到重视。但TIF机制复杂,尚未完全阐明。本研究旨在探讨DN中AOPP蓄积对肾小管间质纤维化的作用及其可能机制。方法1、选取行肾活检的DN患者33例和薄基底膜肾病患者10例。收集患者血及尿液标本,分析肾损害相关指标。免疫组化检测肾组织相关分子表达,Masson’s trichrome染色评估TIF。Pearson分析DN患者肾组织AOPP蓄积及pPKCη表达与肾损伤相关指标（Scr,尿NAG,eGFR）的相关性。2、我们设计了如下几组细胞实验,实验1:HK-2细胞分别用MNA、NG、HG浓度的糖干预;实验2:以5,15,30mM浓度的葡萄糖干预72小时;实验3:以30mM葡萄糖分别干预12,36,72小时;实验4:HK-2细胞用HG培养1周后,AOPP分别以50,100,200μg/mL浓度干预72小时;实验5:HK-2细胞用HG培养1周,AOPP（200μg/mL）干预72小时,最后分别使用PKC抑制剂（Go6983,Myr和Rottlerin）干预72小时。上述实验完成后收集细胞,使用 Western blot 检测 AOPP、CD36、Fibronectin、pPKCη和 pPKCδ蛋白表达。3、STZ糖尿病大鼠,经AOPP干预,用PKC抑制剂（Go6983、Myr和Rottlerin）治疗,分组如下:（1）正常对照组（NC）;（2）糖尿病对照组（DMRSA）;（3）糖尿病大鼠AOPP干预组（DMAOPP）;（4）糖尿病大鼠AOPP及PKCη抑制剂治疗组（DMAOPP+Myr）;（5）糖尿病大鼠AOPP及PKC非选择性抑制剂治疗组（DMAOPP+Go6983）;（6）糖尿病大鼠AOPP及PKCδ抑制剂治疗组（DMAOPP+Rottlerin）。12周后免疫组化检测肾组织检测相关分子表达;天狼星红染色观察肾组织病理改变。分析大鼠肾损害相关指标。结果1、DN患者肾小管上皮细胞空泡样变伴AOPP蓄积;DN患者肾组织pPKCη表达增加,伴随Fibronectin表达上调,小管间质纤维化加重;AOPP蓄积及pPKCη表达增加均预示着DN患者肾功能下降,AOPP可能通过激活PKC通路加重小管间质纤维化,损伤肾功能。2、HG 条件下 HK-2 细胞 AOPP、CD36、pPKCη和 Fibronectin 的蛋白表达呈时间、浓度依赖方式梯度上调;外源性增加AOPP干预进一步增加CD36、pPKCη和Fibronectin的蛋白表达,加重细胞纤维化;抑制PKCη,CD36及Fibronectin表达下降,细胞纤维化减轻。3、AOPP加重糖尿病大鼠肾功能损伤,明显诱导肾组织pPKCη及Fibronectin的表达,加重TIF;抑制PKCη,则可减轻大鼠肾功能损伤,抑制Fibronectin表达,减轻TIF。结论糖尿病肾病中AOPP可通过激活PKCη促进小管间质纤维化。
贺明娟[8]（2020）在《MYDGF对糖尿病肾病小鼠足细胞损伤的保护作用及机制研究》文中研究表明研究背景糖尿病肾病是糖尿病重要的微血管并发症之一,已成为导致终末期肾病（end stage of renal disease,ESRD）的主要病因。足细胞是一种高度分化的肾实质细胞,它与肾小球内皮细胞、肾小球基底膜共同构成了肾小球滤过屏障。糖尿病肾病早期就会出现足细胞功能和结构的损伤,进而引起足细胞凋亡及脱落,导致肾小球滤过屏障完整性被破坏和蛋白尿生成。足细胞的损伤伴随着蛋白尿的产生,并参与了糖尿病肾病的发生发展。因此,它既是糖尿病肾病进展的重要因素,也是临床治疗的重要靶点。髓源性生长因子（myeloid-derived growth factor,MYDGF）,是一种由C19orf10基因编码的分泌蛋白,主要由骨髓来源的单核细胞和巨噬细胞产生。我们前期研究发现,MYDGF能够促进肠道L细胞合成和分泌GLP-1,从而改善2型糖尿病小鼠的糖脂代谢。但是,MYDGF在糖尿病肾病中的作用尚不明确。研究目的探索MYDGF对糖尿病肾病小鼠足细胞损伤的作用及作用机制。研究方法体内实验,以C57BL/6小鼠为原型制作MYDGF+/-小鼠模型,使其交配获得同窝出生的野生型和MYDGF-/-小鼠。第一部分,探索MYDGF基因敲除对糖尿病肾病小鼠蛋白尿及足细胞损伤的影响。第二部分,探索外源性增加MYDGF对糖尿病肾病小鼠蛋白尿及足细胞损伤的影响。主要检测包括ELISA法检测尿蛋白/肌酐比值,PAS染色分析肾小球形态,蛋白免疫印迹检测肾小球中足细胞特异性蛋白和信号通路蛋白的表达,免疫荧光染色分析足细胞凋亡。电子显微镜观察足细胞的形态。第三部分,探索MYDGF对足细胞的作用机制。肾脏进行siRNA/AKT干扰后,观察小鼠的尿蛋白及足细胞损伤的情况。体外实验,选取非糖尿病野生型小鼠足细胞和肾小球组织,高糖培养后,加入 100ng/mL 的重组 MYDGF（recombinant MYDGF,rMYDGF）,实验结束后,流式细胞仪检测足细胞凋亡情况,提细胞内蛋白进行蛋白免疫印迹分析。研究结果体内实验结果显示MYDGF基因敲除加重糖尿病肾病小鼠蛋白尿、肾小球损伤和足细胞损伤,而外源性增加MYDGF能改善糖尿病肾病小鼠中蛋白尿、肾小球损伤和足细胞损伤。体外培养非糖尿病野生型小鼠源性足细胞（MPC5）和非糖尿病野生型小鼠的肾小球组织结果显示,rMYDGF可以增加足细胞内特异性蛋白Nephrin蛋白表达水平,减少足细胞凋亡。机制方面,MYDGF可能通过激活AKT/BAD信号通道来保护足细胞。结论及创新性本实课题首次发现MYDGF可以改善糖尿病肾病中足细胞损伤,降低蛋白尿的产生,延缓糖尿病肾病的进展。该发现为寻找糖尿病肾病提供了新的治疗靶点与实验基础。
王思微[9]（2020）在《血清microRNA-217在特发性膜性肾病中表达与中医证型分布的研究》文中进行了进一步梳理目的:特发性膜性肾病（idiopathic membranous nephropathy,IMN）是一种自身免疫性肾病。至今为止,病理肾穿刺活检是该病诊断的金标准。M型磷酯酶A2受体（phospholipase A2 receptor,PLA2R）被证实在IMN的肾小球足细胞中表达,受到广泛关注。本研究利用实时荧光定量PCR（q RT-PCR）技术检测IMN患者中血清micro RNA-217（mi RNA-217）的表达水平,分析IMN患者mi RNA-217含量变化,并研究mi RNA-217与IMN患者中医证型之间的关系、mi RNA-217与抗PLA2R抗体的相关性分析,探索新型的IMN的血清学标记物。材料与方法:1.选择辽宁中医药大学附属医院自2018年7月至2019年9月患者共153例,其中经皮穿刺肾活检确诊为IMN患者48例、非IMN其他肾病患者44例及健康对照组43例,检测全部研究对象的血清肌酐（Cr）、尿素氮（Bun）、尿酸（UA）、血清胱抑素C（Cys C）、总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、前白蛋白（PA）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、估算肾小球滤过率（e GFR）、白细胞计数（WBC）、血红蛋白（Hb）、尿微量白蛋白（m ALB）、24小时尿蛋白定量（24 h UTP）、血清抗PLA2R抗体及全部患者的病理结果。2.应用q RT-PCR技术检测IMN组、非IMN组与健康对照组血清mi RNA-217的表达水平,用2-△△CT法进行mi RNA相对表达量的计算;3.由专业医师按照诊断标准,对IMN组与非IMN其他肾病组患者患者进行症候的收集,判断患者的中医证型;4.应用SPSS 17.0对全部数据进行统计学分析。结果:1.IMN组UA、TG、TC、LDL-C、ALB、TP、Cys C、m ALB、24h UTP高于正常对照组（P<0.05）;IMN组TG、TC、LDL-C、TP、ALB、m ALB、24h UTP、估算e GFR高于非IMN组（P<0.05）;IMN组Bun、Cr、GLU低于非IMN组（P<0.05）;非IMN组Bun、Cr、UA、TG、TC、Cys C、m ALB、24h UTP、GLU高于正常对照组（P<0.05）;非IMN组估算e GFR低于正常对照组（P<0.05）。2.在中医证型本虚证方面,IMN本虚证证型构成比从高至低分别是脾肾气虚证25例（52.08%）、气阴两虚证9例（18.75%）、脾肾阳虚证6例（12.50%）、肺肾气虚证4例（8.33%）、肝肾阴虚证4例（8.33%）;非IMN组共44例,本虚证证型构成比从高至低为气阴两虚证15例（34.09%）、脾肾气虚证14例（31.82%）、脾肾阳虚证6例（13.64%）、肺肾气虚证5例（11.36%）、肝肾阴虚证4证（9.09%）。两组本虚证构成比不同,差异有统计学意义（P<0.05）;在标实证方面,证型构成比从高至低分别是血瘀证39例（81.25%）、水湿证33例（68.75%）、湿热证16例（33.33%）、湿浊证7例（14.58%）;非IMN组共44例,本虚证证型构成比从高至低分别是血瘀证35例（79.55%）、水湿证28例（63.64%）、湿热证11例（25.00%）、湿浊证10例（22.73%）。两组标实证的构成比不同,差异无统计学意义（P>0.05）。3.应用q RT-PCR方法对目的基因mi RNA-217与内参基因hsa-mi R-16进行检测,用2-△△CT法进行mi RNA相对表达量。IMN组与非IMN肾病组相对于对照组的倍数分别为0.15与2.22;其中INM组患者mi RNA-217相对表达量显着低于对照组（P<0.05）,非IMN肾病组mi RNA-217相对表达量显着高于对照组（P<0.05）。m i RNA-217 ROC曲线下面积（AUC）为0.936,敏感度为81.2%,特异性为79.4%。mi RNA-217的相对表达量与抗PLA2R抗体的量成负相关（r=-0.841,P<0.01）。4.IMN组mi RNA-217与病理情况分析,mi RNA-217在Ⅰ期患者中表达相对较Ⅱ、Ⅲ期高,肾脏组织中Ig G阳性占93.75%,mi RNA-217的相对表达量在Ig G阳性患者中较低,肾脏组织中抗PLA2R抗体的阳性率为83.33%,mi RNA-217的相对表达量在抗PLA2R抗体阳性患者中较低;在电镜检测方面,mi RNA-217的相对表达量在有电子致密物沉积的患者中较低。5.IMN组中医证型本虚证与mi RNA-217分析,脾肾气虚患者mi RNA-217相对表达量高于其他证别,与脾肾阳虚证、肝肾阴虚证、气阴两虚证相比差异有显着性（P<0.05）;气阴两虚证患者mi RNA-217相对表达量最低,与脾肾气虚证、肺肾气虚证患者相比差异有显着性（P<0.05）;脾肾气虚证与肝肾阴虚证患者mi RNA-217相对表达量低于脾肾气虚证与肺肾气虚证,差异有显着性（P<0.05）。结论:1.IMN患者血清mi RNA-217表达下调,血清mi RNA-217可能是IMN诊断的良好标志物;血清mi RNA-217在病理情况较重的IMN患者中有更低表达。2.IMN患者的中医证型存在分布差异,本虚证以脾肾气虚证较高,标实证以血瘀证较高;3.血清mi RNA-217的表达在脾肾气虚证中较高,在气阴两虚证中较低。4.血清mi RNA-217与血清抗PLA2R抗体呈负相关。
王新斌[10]（2020）在《基于miRNA探讨右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠的增敏作用及机制研究》文中提出研究背景与目的:激素抵抗型肾病综合征（SRNS）致病因素复杂,临床治疗较为棘手,疗效不尽如人意,随着病情的变化,常易发展为终末期肾病而危及患者的生命。足细胞损伤与慢性肾病发生、发展密切关联,足细胞相关蛋白、基因突变及表达异常是SRNS发生的关键环节。有研究表明,miRNA表达失调与肾病有关,成熟的Dicer酶可以通过一些非编码的微小RNA来介导调节SD分子的应答。故调控Dicer-miRNA通路,使SD分子的表达得以改善,减少蛋白尿。右归丸可通过减毒增敏来减缓SRNS肾病足细胞的损伤,发挥减少尿蛋白和保护肾脏的作用,其分子机制尚未完全阐明。方法:1.64只雄性SPF级Wistar大鼠适应性饲养1周,按体重随机分为空白组（Control,12只）和造模组（52只）。造模成功后随机分为模型组（Model）;泼尼松组（PAT）;泼尼松+右归丸高、中、低组（PAT+YGh、PAT+YGm、PAT+YGl）。一次性尾静脉注射阿霉素6mg/kg（10mg/支,用0.9%氯化钠溶液2ml稀释成浓度为5mg/ml）,同时给予臀部肌肉注射氢化可的松25mg/kg/d（50mg/支,用0.9%氯化钠2ml溶液稀释成浓度为25mg/ml）,2周,复制阿霉素肾病肾阳虚证模型。空白组大鼠左右后肢交替肌注等剂量生理盐水。2.各组大鼠成功造模2周后,固定时间灌胃,持续6周。分别于造模前、造模后14天、药物干预后14、28、42天代谢笼收集各实验大鼠24小时尿液标本,记录尿量。实验第55天晚上8点测定大鼠自主活动,开启自主活动仪测定5min的活动次数与抬头次数。第56天各组实验大鼠心脏采血,全自动生化分析仪检测血生化指标。3.实验第56天,局麻摘取双肾,将大鼠左侧肾脏切除取上下级分别加入4%戊二醛、4%多聚甲醛固定液固定组织,用于电镜、光镜、免疫荧光镜;右肾储存于-70oC冰箱,肾小球cRNA提取,用于基因芯片检测及RT-PCR相互验证。4.HE、PAS、PASM-Masson观察肾组织病理变化;免疫组化、western-blotting、real-time PCR等方法检测肾组织中dicer、nephrin、podocin、CD2AP、synaptopodin、Bax?Bcl-2?caspase-3蛋白及mRNA的表达。结果:1.大鼠一般状态造模后第7d大鼠腹腔中出现少量腹水,同时每日排出尿量减少,精神状态欠佳,食量减少,体重停止增长且下降。2周大鼠腹水明显增多,出现大量尿蛋白,且24h尿蛋白定量>100mg/kg,同时大鼠出现嗜睡、反应迟钝,有弓背耸肩现象,蜷卧少动,体毛发灰发暗,大便稀溏等中医阳虚体征。提示SRNS模型大鼠复制成功。2.血肌酐、血尿素氮、总蛋白、白蛋白、24h尿蛋白、血脂检测结果各干预组均有不同程度的改善,右归丸中剂量组减少尿蛋白量、降低血脂疗效优于各干预组,各治疗组血肌酐、血尿素氮降低有统计学意义（p<0.05）。3.肾小球病理形态改变光镜下空白组肾小球结构形态稳定;模型组肾小球略显肿胀,基底膜不规则增厚,系膜细胞轻度增生,肾小管内出现透明的管型;各治疗组肾小球病理形态的改变介于空白组与模型组之间。电镜下发现足细胞有足突融合、消失的改变,空白组足细胞未发现异常改变;且在电镜下,右归丸中剂量组对减轻足细胞融合,足细胞恢复效果明显。4.miRNA芯片分析结果模型组与空白组相比较,差异表达的miRNA 23个,且高表达miRNA 15个、低表达miRNA 8个;与模型组比较,右归丸干预组中高表达的miRNA9个,低表达miRNA 6个,其中SRNS肾病大鼠模型组织中rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P表达上调,rno-mir-205表达下调,经右归丸治疗后,上调的rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P得到抑制,而下调的rno-mir-205得到增强。通过real-time PCR对特异基因相互验证结果显示:模型组rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P与空白组rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P表达量比分别为1.94、2.53倍;rno-mir-205表达量其模型组与空白对照组的比值为0.28,所得结果与基因芯片接近,证实以上所筛选miRNA是SRNS最有代表性的miRNA。5.Dicer酶、SD蛋白分子的检测结果SRNS大鼠肾组织中Dicer酶免疫荧光强度、蛋白与mRNA表达均上调,而nephrin、podocin、CD2AP与synaptopodin结果相反,二者呈负相关。提示dicer酶通过Dicer-miRNA负向调控足细胞裂隙孔膜相关蛋白分子,同时骨架蛋白表达减少及足细胞的凋亡与miRNA有一定的相关性。6.右归丸干预后dicer、nephrin、podocin、CD2AP免疫荧光、蛋白与核酸的表达结果与模型组比较,右归丸组肾组织Dicer酶免疫荧光强度减弱,呈线状分布,核酸与蛋白表达下降,而SD相关分子免疫荧光表达增强,呈颗粒状分布,mRNA与蛋白表达量均升高。7.细胞凋亡相关因子免疫荧光、蛋白与mRNA的表达检测结果与空白组比较,模型组Bax、caspase-3免疫荧光强度均增强,蛋白及mRNA表达均升高（p<0.05）,而Bcl-2表达降低（p<0.05）,各干预组对Bax/Bcl-2、caspase-3表达水平均有改善,但右归丸干预各组Bax、caspase-3蛋白及mRNA表达下调,Bcl-2蛋白和mRNA表达明显上升（p<0.01）。说明右归丸通过骨架蛋白及细胞凋亡因子发挥保护足细胞作用,这一作用与右归丸对类固醇激素的增敏作用有关。结论:1.本实验在复制激素抵抗型肾病综合征动物模型时采用“病证结合”的方式,即单次尾静脉注射阿霉素6mg/kg建立FSGS肾病模型,同时肌注氢化可的松25mg/kg,造成肾阳虚证,成功地模拟典型的SRNS临床病证,效果确切。2.基因芯片对SRNS大鼠肾组织中miRAN筛选显示,SRNS肾病大鼠皮质中23个miRNAs特异性表达,其中15个高表达,8个低表达,Fold Change从0.3到3.4。筛选出SRNS特征性miRNA:rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P的表达显着上调,提示这些miRNA可能参与足细胞损伤。rno-mir-205在激素抵抗型肾病综合征模型大鼠中低表达,提示miRNA可能通过抑制足细胞凋亡和增强激素对药物的敏感性而发挥作用。3.SRNS肾病大鼠足细胞裂孔隔膜分子及骨架蛋白的表达是通过Dicer酶介导miRNA负向来调控。足细胞的损伤及足细胞的凋亡还可能通过Dicer-miRNA来参与。提示Dicer-miRNA是防治SD蛋白分子与尿蛋白异常的靶向点。4.右归丸可下调激素抵抗型肾病综合征模型大鼠Dicer表达,同时右归丸对SRNS肾病大鼠足细胞裂孔隔膜分子nephrin、CD2AP、podocin及骨架蛋白synaptopodin表达的影响可能是通过Dicer-miRNA途径来调控。提示Dicer、rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P可能是右归丸治疗SRNS肾病,维护保护肾小球滤过屏障,保护足细胞,减少蛋白尿的靶点。5.右归丸可抑制SRNS大鼠肾组织中Bax升高,Bcl-2的下降,修复足细胞Bax/Bcl-2平衡态,降低凋亡标志性蛋白caspase-3活性,改善足突融合,从而维持足细胞数目的稳定,保护足细胞免于凋亡。6.右归丸各剂量组均可改善激素抵抗型肾病综合征蛋白尿、改变低蛋白血症、降低胆固醇和甘油三酯的水平,减轻足细胞足突融合、降低或减少细胞膜外基质积聚、肾小球系膜增生及肾小管上皮细胞变性等发挥减毒增敏作用。然右归丸中剂量组疗效显着。
二、654-2在慢性肾病中的应用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、654-2在慢性肾病中的应用（论文提纲范文）
（1）脂质组学在慢性肾病研究中的应用（论文提纲范文）
| 1 文献检索与分析 |
| 2 脂质组学在慢性肾病中的应用 |
| 2.1 脂肪酰基类脂质及其在慢性肾病中的脂质组学研究 |
| 2.2 甘油酯类脂质及其在慢性肾病中的脂质组学研究 |
| 2.3 磷脂类脂质及其在慢性肾病中的脂质组学研究 |
| 2.3.1 磷脂酰胆碱 |
| 2.3.2 磷脂酰乙醇胺 |
| 2.4 鞘脂类脂质及其在慢性肾病中的脂质组学研究 |
| 2.4.1 神经酰胺 |
| 2.4.2 鞘磷脂 |
| 2.5 甾醇类脂质及其在慢性肾病中的脂质组学研究 |
| 2.6 脂质间的生物转化 |
| 3 结语与展望 |
（2）白介素33在糖尿病肾病慢性病程中的免疫调节作用（论文提纲范文）
| 英文缩略词 |
| 第一部分 基础研究——白介素33在糖尿病肾病慢性病程中的免疫调节作用 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 糖尿病肾病患者内源性IL-33表达情况 |
| 第一节 糖尿病肾病患者纳入及其临床病理特点 |
| 第二节 糖尿病肾病中内源性IL-33的肾脏局部及尿液表达 |
| 第一章 小结 |
| 第二章 内源性IL-33在糖尿病肾病中调节地位探究 |
| 第一节 糖尿病肾病动物模性内源性IL-33表达 |
| 第二节 IL-33敲除糖尿病肾病动物模型构建及其保护作用 |
| 第二章 小结 |
| 第三章 糖尿病肾病中IL-33免疫调节机制初探 |
| 第一节 IL-33与成纤维细胞 |
| 第二节 IL-33/ILC2通路的调节作用 |
| 第三章 小结 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 第二部分 临床研究——肾脏单克隆球蛋白沉积病与轻链型淀粉样变的临床病理关联性分析 |
| 中文摘要 |
| Abstact |
| 前言 |
| MIDD与AL临床特殊及病理改变的评估 |
| 一、研究方法 |
| 二、研究结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述一 IL-33介导2型固有淋巴细胞在肾脏疾病中的调节作用 |
| 参考文献 |
| 附录一 糖尿病肾病肾脏病理分型 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（3）肌肽通过抑制焦亡减轻糖尿病肾病中足细胞损伤的作用与机制（论文提纲范文）
| 中文英文缩写词对照表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.2.1 抗体 |
| 2.2.2 主要试剂 |
| 2.3 仪器与设备 |
| 3 试验方法 |
| 3.1 动物模型 |
| 3.2 检测小鼠24h尿白蛋白 |
| 3.3 动物标本收集处理 |
| 3.4 石蜡包埋 |
| 3.5 制备石蜡切片 |
| 3.6 细胞培养 |
| 3.7 MTT实验检测细胞活性 |
| 3.8 Western Blot |
| 3.9 RNA提取和Real-time PCR |
| 3.10 免疫荧光 |
| 3.11 分子对接 |
| 3.12 细胞热迁移(CETSA)实验 |
| 3.13 肌肽浓度检测 |
| 3.14 TUNEL染色 |
| 3.15 苏木素伊红染色 |
| 3.16 糖原染色 |
| 3.17 临床肾活检样本与染色 |
| 3.18 免疫组化 |
| 3.19 透射电镜 |
| 3.20 统计分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 肌肽减轻高糖诱导足细胞损伤 |
| 4.1.1 MTT检测肌肽对MPC5 细胞活性的影响 |
| 4.1.2 肌肽减轻高糖刺激的足细胞损伤 |
| 4.2 肌肽减轻高糖诱导的足细胞炎症反应 |
| 4.3 肌肽减轻高糖介导的足细胞焦亡 |
| 4.4 肌肽与caspase1 的结合 |
| 4.5 肌肽通过caspase1 依赖性机制抑制高糖诱导的足细胞损伤 |
| 4.6 肌肽通过caspase1 依赖性机制抑制高糖诱导的炎症反应 |
| 4.7 肌肽通过caspase1 依赖性机制抑制高糖诱导的焦亡反应 |
| 4.8 肌肽在DM小鼠糖尿病肾病中的保护作用 |
| 4.8.1 肌肽减轻DM小鼠糖尿病肾病中的肾小球改变及足细胞损伤 |
| 4.8.2 肌肽减轻STZ诱导的小鼠糖尿病肾病中的足细胞损伤 |
| 4.8.3 肌肽减轻DM小鼠糖尿病肾病中的足细胞炎症反应 |
| 4.8.4 肌肽减轻DM小鼠糖尿病肾病中的足细胞焦亡反应 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 7 参考文献 |
| 8 附录 |
| 8.1 个人简历 |
| 8.2 攻读硕士学位期间发表的文章 |
| 9 致谢 |
| 10 综述 焦亡在肾脏疾病中的新发现 |
| 参考文献 |
（4）实时剪切波弹性成像技术评估慢性肾病分期的诊断价值（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 研究方法 |
| 1 研究的设计 |
| 2 研究对象 |
| 2.1 研究对象的纳入标准 |
| 2.2 正常对照组的纳入标准 |
| 2.3 研究对象的排除标准 |
| 2.4 资料收集 |
| 2.5 慢性肾病诊断标准及临床分期 |
| 2.6 超声引导下肾穿刺活检 |
| 3 仪器的选择与方法 |
| 3.1 仪器 |
| 3.2 检查方法 |
| 3.3 分类标准 |
| 3.4 诊断效能指标 |
| 4 质量控制 |
| 5 统计学分析 |
| 6 技术路线图 |
| 结果 |
| 1 研究人群基本特征 |
| 2 病例组与对照组肾脏中下部实质杨氏模量值比较 |
| 3 不同分期的慢性肾病患者双肾中下部实质杨氏模量值比较 |
| 3.1 据肾小球滤过率进行肾病分期 |
| 3.2 据病理结果进行分期 |
| 4 病例组和对照组的杨氏模量值与Scr、eGFR相关性比较结果 |
| 5 病例组左、右肾脏中下部实质的杨氏模量值比较 |
| 讨论 |
| 1 病例组与对照组的双肾中下部实质弹性模量值比较 |
| 2 病例组不同分期的患者肾脏弹性模量值组间比较 |
| 2.1 据肾小球滤过率进行肾病分期 |
| 2.2 据病理结果进行肾病分期 |
| 3 病例组肾脏弹性模量值与生化指标相关性比较 |
| 4 病例组与对照组左、右肾脏中下部实质的杨氏模量值比较 |
| 5 SWE的原理及其应用优势 |
| 6 肾脏弹性模量值检测的影响因素分析 |
| 7 SWE在肾脏疾病中的研究 |
| 8 本研究的局限性 |
| 9 SWE技术对肾脏疾病诊断的发展前景 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 超声弹性成像技术评价慢性肾病的相关研究与进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学位论文 |
| 导师评阅表 |
（5）多肽AcSDKP减少马兜铃酸诱导的小鼠肾小管间质纤维化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 :马兜铃酸诱导的小鼠肾小管间质纤维化模型中肾脏mi RNA与 m RNA表达谱的改变 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 :多肽AcSDKP减少小鼠马兜铃酸急性肾病中已经形成的肾小管间质纤维化 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 :多肽AcSDKP减少小鼠马兜铃酸慢性肾病中已经形成的肾小管间质纤维化 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文 |
| 综述 消除纤维化的潜在机制与进展 |
| 参考文献 |
| 中英文缩写词对照表 |
| 致谢 |
（6）膳食辣椒素及代谢手术改善糖尿病肾病的机制（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 膳食辣椒素改善糖尿病肾病机制的研究 |
| 前言 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 代谢手术改善糖尿病肾病机制的研究 |
| 前言 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 糖尿病肾病治疗及其机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 研究生期间发表的论文 |
| 致谢 |
（7）AOPP在糖尿病肾病肾小管间质纤维化中的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 糖尿病肾病患者肾组织AOPP蓄积及其对TIF的影响 |
| 1 研究目的 |
| 2 实验材料及方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 结论 |
| 第二章 AOPP对高糖条件下HK-2细胞纤维化影响及其机制研究 |
| 1 研究目的 |
| 2 实验材料及方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 结论 |
| 第三章 AOPP对糖尿病大鼠TIF的影响及其机制研究 |
| 1 研究目的 |
| 2 实验材料及方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 结论 |
| 全文讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词表 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间成果 |
（8）MYDGF对糖尿病肾病小鼠足细胞损伤的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 MYDGF在糖尿病肾病人群及糖尿病肾病小鼠中的表达水平 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 实验试剂及仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 统计分析 |
| 1.5 实验结果 |
| 1.6 讨论 |
| 1.7 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 MYDGF对糖尿病肾病小鼠足细胞损伤的保护作用 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验试剂与仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计分析 |
| 2.5 实验结果 |
| 2.6 讨论 |
| 2.7 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 MYDGF在高糖诱导足细胞损伤中的保护作用 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验试剂与仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 统计分析 |
| 3.5 实验结果 |
| 3.6 讨论 |
| 3.7 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 MYDGF对足细胞的作用机制 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验仪器与试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.4 统计分析 |
| 4.5 实验结果 |
| 4.6 讨论 |
| 4.7 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（9）血清microRNA-217在特发性膜性肾病中表达与中医证型分布的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果(附论文图片) |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 特发性膜性肾病机制与实验室检测研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（10）基于miRNA探讨右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠的增敏作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语 |
| 前言 |
| 第一章 研究背景 |
| 1 SRNS现代医学研究 |
| 2 足细胞损伤是导致SRNS的关键环节 |
| 3 miRNA诱导SRNS的作用机制 |
| 3.1 miRNA与足细胞 |
| 3.2 miRNA与足细胞相关基因的表达 |
| 4 传统医学对激素抵抗型肾病综合征的研究 |
| 4.1 SRNS病因病机 |
| 4.2 右归丸治疗肾病综合征的新机制 |
| 5 戴恩来教授“病证结合”以“益火之源,以消阴翳”立论 |
| 6 建立假说 |
| 第二章 右归丸治疗SRNS肾病减毒增敏机制实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物、试剂与器材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 复制SRNS肾病大鼠模型 |
| 2.3 给药的剂量及方法 |
| 2.4 标本的采集及检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 右归丸对SRNS大鼠一般状态的影响 |
| 3.2 右归丸对模型大鼠体重质数的影响 |
| 3.3 各组大鼠24 小时尿蛋白定量结果 |
| 3.4 右归丸对SRNS大鼠自主活动的影响 |
| 3.5 各组大鼠总蛋白、白蛋白、血脂指标变化 |
| 3.6 各组大鼠肾功能指标的变化 |
| 3.7 光镜观察各组大鼠肾组织病理变化 |
| 3.8 电镜观察各组大鼠肾组织超微结构变化 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三章 激素抵抗型肾病综合征大鼠肾皮质miRNA的差异性表达 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验的主要药物、试剂与器材 |
| 1.3 实验分组和动物模型的复制 |
| 1.4 指标检测及方法 |
| 1.5 基因芯片检测肾皮质miRNA的表达 |
| 1.6 Real-time PCR验证候选miRNAs |
| 2 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 SRNS模型大鼠一般情况 |
| 3.2 用药前后各组大鼠尿蛋白定量变化 |
| 3.3 各组大鼠肾组织HE染色(光镜) |
| 3.4 透射电镜观察足细胞微结构变化 |
| 3.5 各组大鼠肾皮质miRNA芯片检测 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第四章 基于Dicer-microRNA对 SRNS大鼠足细胞SD分子调控及右归丸的干预作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物与分组 |
| 1.2 实验的主要药物、试剂与器材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 SRNS大鼠模型制备 |
| 2.2 给药的方法和剂量 |
| 2.3 指标检测及方法 |
| 2.4 肾皮质dicer、nephrin、podocin、CD2AP、synaptopodin免疫荧光染色 |
| 2.5 肾组织Dicer与 SD分子蛋白检测(Western Blotting) |
| 2.6 肾皮质Dicer与 SD分子mRNA检测(RT-PCR) |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 SRNS大鼠一般情况 |
| 3.2 用药前后各组大鼠尿蛋白定量变化 |
| 3.3 光镜观察各组大鼠肾脏病理改变(PASM染色) |
| 3.4 肾皮质Dicer与 SD分子免疫荧光染色变化 |
| 3.5 肾皮质Dicer与 SD蛋白表达 |
| 3.6 各组大鼠肾皮质Dicer与 SD分子mRNA表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第五章 右归丸对SRNS大鼠足细胞凋亡因子Bax、Bcl-2、caspase-3 的干预作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验主要试剂与药物 |
| 1.2 动物与分组 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 SRNS大鼠模型的建立 |
| 2.2 24h-upr及血清生化指标的检测 |
| 2.3 肾小球微结构检查(透射电镜) |
| 2.4 免疫荧光法检测肾组织Bax?Bcl-2?caspase-3 的表达 |
| 2.5 肾皮质Bax?Bcl-2?caspase-3 蛋白检测(Western Blotting法) |
| 2.6 大鼠肾皮质Bax?Bcl-2?caspase-3 mRNA表达检测(RT-PCR法) |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠24h尿蛋白量变化 |
| 3.2 足细胞电镜观察结果 |
| 3.3 各组大鼠肾组织Bax?Bcl-2?baspase-3 免疫荧光染色 |
| 3.4 肾皮质Bax?Bcl-2?caspase-3 蛋白表达 |
| 3.5 肾皮质Bax?Bcl-2?caspase-3 mRNA表达水平 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 创新点 |
| 结语 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 附录 |
四、654-2在慢性肾病中的应用（论文参考文献）
- [1]脂质组学在慢性肾病研究中的应用[J]. 高芯,李长印,段徐彬,丁选胜. 药学进展, 2021(08)
- [2]白介素33在糖尿病肾病慢性病程中的免疫调节作用[D]. 朱子璇. 北京协和医学院, 2021
- [3]肌肽通过抑制焦亡减轻糖尿病肾病中足细胞损伤的作用与机制[D]. 朱威. 安徽医科大学, 2021(01)
- [4]实时剪切波弹性成像技术评估慢性肾病分期的诊断价值[D]. 阿丽米热·阿不都热依木. 新疆医科大学, 2021(09)
- [5]多肽AcSDKP减少马兜铃酸诱导的小鼠肾小管间质纤维化[D]. 朱自强. 苏州大学, 2020(06)
- [6]膳食辣椒素及代谢手术改善糖尿病肾病的机制[D]. 韦晓. 中国人民解放军陆军军医大学, 2020(01)
- [7]AOPP在糖尿病肾病肾小管间质纤维化中的作用及其机制研究[D]. 徐丽婷. 南方医科大学, 2020(01)
- [8]MYDGF对糖尿病肾病小鼠足细胞损伤的保护作用及机制研究[D]. 贺明娟. 南方医科大学, 2020(01)
- [9]血清microRNA-217在特发性膜性肾病中表达与中医证型分布的研究[D]. 王思微. 辽宁中医药大学, 2020(02)
- [10]基于miRNA探讨右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠的增敏作用及机制研究[D]. 王新斌. 甘肃中医药大学, 2020(08)