一、中药免疫增强剂对HVT免疫雏鸡免疫器官中免疫活性细胞的影响（论文文献综述）
王申锋[1]（2020）在《“固元颗粒”免疫增强剂研制及其在鸡疫苗免疫中的应用》文中认为中药具有很好的增强免疫力的作用,成为当前替代饲料中抗生素添加的一个重要方向。“固元颗粒”原方出自《新药转正标准》,由黄芪和生晒参芦头配方而成,其功效是益气固本。如果直接将其应用于兽医临床,提高动物的免疫功能,成本偏高,很难在养殖业中推广。但是,人用中药加工过程中产生的一些附属提取物,以及在非贵重药材中提取到的一些有效成分,成本相对较低,具有开发兽医临床用药的潜力。为此,我们以黄芪多糖（Astragalus Polysaccharides,APS）和人参茎叶皂苷（Ginseng Stem-leaf Saponins,GSLS）代替“固元颗粒”配方中的黄芪和生晒参芦头,大幅降低成本,配伍组方,制成可溶性颗粒,称为兽用“固元颗粒”,用于增强动物抗病能力和疫苗免疫效果。本论文研究该制剂工艺、质量标准,并评估其对鸡的安全性、有效性和最适添加量。检测该制剂对免疫抑制条件下鸡和小鼠的免疫调节作用,初步揭示其对蛋鸡淋巴细胞TLR4信号通路的激活及相关细胞因子的分泌机制,并在蛋鸡鸡群进行应用试验,为预防禽病毒性疾病提供新方法。主要结果总结如下:1.优化并确定了“固元颗粒”的制剂工艺。通过制剂成型工艺预实验、辅料选择、润湿剂筛选和验证试验确定了最佳成型工艺。配方为:APS 110 g、GSLS100 g、蔗糖590 g和糊精200 g。制备工艺为:将上述原材料混合均匀,采用75%乙醇为润湿剂,制软材,制粒,60℃烘干,整粒。所得颗粒易成型,颗粒完整,细粉较少。3个试验批次所得颗粒质量一致,该工艺稳定可行。2.建立了“固元颗粒”中人参皂苷Rg1、Re、Rd含量的高效液相色谱测定方法。通过精密度试验、重复性试验、稳定性试验及回收率试验证实,RSD<2%,测定三批“固元颗粒”,每1 g颗粒中Rg1+Re+Rd总量均在30 mg以上。该方法操作简便,测量准确,可作为对该制剂质量控制的内容记入质量标准。3.“固元颗粒”具有良好的安全性和有效性。对鸡按推荐量的1、3、5、10倍（0.05、0.15、0.25和0.5 g/kg体重）剂量混饮,连续7 d,停药后继续饲养2周。记录鸡行为、体重的变化,检测血常规和血液生化指标以及脏器指数,结果均未见异常,表明该制剂对鸡临床用药具有较高的安全性。另外,不同剂量的“固元颗粒”均可有效提高蛋鸡的抗体效价水平、红细胞花环率和生产性能指标,其中50 mg/kg为最适应用剂量。“固元颗粒”对注射新城疫（ND）疫苗的鸡群具有免疫增强作用。使用50mg/kg该颗粒对鸡进行免疫调节试验,测定脏器指数、新城疫抗体效价和脾淋巴细胞转化指数,证实用药2-3周后其体内NDV抗体效价显着高于对照组（P<0.05）。“固元颗粒”对免疫抑制鸡具有免疫调理作用。对经环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）导致的免疫抑制鸡使用“固元颗粒”后,可使其免疫抑制现象得到显着缓解（P<0.05）。另外,在疫苗免疫后7、14和21d,上述4个给药处理组的脾淋巴细胞经刀豆蛋白A（ConA）和LPS诱导,淋巴细胞刺激指数均显着高于CTX组（P<0.05）。“固元颗粒”对免疫抑制小鼠亦有免疫调节作用。“固元颗粒”中、高剂量组可显着提高免疫抑制小鼠的脾脏指数和胸腺指数（P<0.05）。给药15 d后,免疫抑制小鼠IL-2和IFN-γ含量接近正常小鼠水平,其中“固元颗粒”中剂量组（50 mg/kg）效果最为明显。另外,各剂量组的脾淋巴细胞转化率与CTX组相比较极显着提升（P<0.01）。4.“固元颗粒”促进蛋鸡淋巴细胞TLR4信号通路的激活及相关细胞因子的分泌。分离蛋鸡外周血淋巴细胞,与不同浓度的“固元颗粒”（终浓度200、100、50、25、0μg/mL,阳性对照为浓度100μg/mL的APS）分别培养16 h、24h、32 h、48 h,采用RT-PCR方法检测淋巴细胞中TLR4、MyD88、TRAF-6、TRIF、IRF3、IFN-βmRNA表达量。收集培养24 h的淋巴细胞上清液,用ELISA测定cGMP、cAMP、NO、iNOS和Ca2+的含量。结果显示,“固元颗粒”通过TLR4受体激活MyD88依赖性和TRIF依赖性两条信号通路,还可降低鸡外周淋巴细胞培养上清中cAMP的含量,提高cGMP、Ca2+、NO和iNOS的含量,从而调节蛋鸡的免疫功能。5.“固元颗粒”在鸡群中应用可促进疫苗免疫效果。随机选择2栋鸡舍,分为“固元颗粒”+疫苗免疫组和单独疫苗免疫组,各3100只鸡,按剂量50 mg/kg体重饮水进行临床应用试验。结果显示,与单独疫苗对照组相比,“固元颗粒”试验组的疫苗免疫抗体效价显着提高,发病率和死亡率分别下降0.7和0.8个百分点,表明“固元颗粒”在大群临床试验中,能够有效降低发病率和死亡率,增加养殖收益。综上所述,本研究确定了“固元颗粒”稳定的制备工艺并制定了其质量标准,证实制剂安全有效。初步证实该颗粒制剂可通过TLR4受体激活MyD88和TRIF通路,降低cAMP含量,提高cGMP、Ca2+、NO、iNOS含量,从而调节鸡的免疫应答。“固元颗粒”能够明显提高蛋鸡的疫苗免疫后特异性抗体的分泌水平,降低发病率和死亡率,具有较好的应用前景。
郜艳雪[2]（2020）在《芪术舌草复方增强淋巴细胞免疫及其抑制AMDV增殖作用的研究》文中认为水貂既是毛皮动物,也是药用动物,貂心、貂鞭、貂肝均可入药,貂心是利心丸的君药,对治疗风湿性心脏病具有独特疗效;“定心丹”是以貂心为君药的中药复方制剂,临床用于心动过速、心律不齐、心力衰竭、高血压等症。貂鞭对阳痿有治疗作用;貂肝对夜盲症有治疗作用。随着人们健康意识的增强,貂心需求量也逐年增加,因此,保障貂心的充足供应具有重要的意义。而水貂阿留申病毒（Aleutian mink disease virus,AMDV）感染是引起水貂死亡主要原因之一,严重影响貂心的供应。寻找抗病毒的药物已势在必行,许多中药具有增强免疫、抗病毒的作用,且应用安全。因此,筛选具有免疫增强作用,且能够抑制病毒的纯中药复方,对于貂心供应具有重要的意义。本研究依据中医临床经典方剂玉屏风散、四君子汤、补中益气汤等方剂的组方原则,在其基础上进行药味相加减,选取具有补中益气、健脾益肺之功效的黄芪或党参作为君药,具有甘温补虚、健脾益气功效的白术作为臣药,同时考虑中兽药应价格低廉等因素,分别配伍不同的佐药和使药如白花蛇舌草和杜仲等进行组方配伍,组成三种不同复方,对其体外刺激小鼠脾脏淋巴细胞增殖作用进行了筛选研究,初步获得了对小鼠脾脏淋巴细胞具有较好刺激作用的复方中药C（芪术舌草复方）。接下来本研究以体外小鼠脾脏淋巴细胞的直接促增殖作用以及协同Con A和LPS促进作用为指标,采用均匀设计法筛选了芪术舌草复方中黄芪、白术和白花蛇舌草的最佳配比,结果显示芪术舌草复方F4既可以直接促进小鼠脾脏淋巴细胞的增殖,又与Con A和LPS有协同促进作用,所以选择F4作为候选方;进一步检测芪术舌草复方F4对小鼠脾脏淋巴细胞分泌细胞因子及对水貂脾脏淋巴细胞增殖作用,结果表明,芪术舌草复方F4能够显着促进小鼠脾脏淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IL-12和IFN-γ,促进水貂脾脏淋巴细胞增殖。为探讨芪术舌草复方F4是否对AMDV的增殖具有抑制作用,应用q-PCR方法检测其对体外培养的CrFK细胞上AMDV增殖的抑制作用,结果显示,当药物浓度为12 mg/m L和6 mg/m L时抑制作用较为明显,与病毒对照组相比AMDV基因拷贝数显着降低（P<0.05）,表明芪术舌草复方F4能够抑制AMDV在CrFK细胞上的增殖。进一步将该复方分别以高、中和低3个剂量饲喂给AMDV阳性水貂,并对用药前后血清样品中AMDV基因拷贝数、γ-球蛋白含量和免疫复合物含量进行检测。结果显示,芪术舌草复方F4高剂量组和中剂量组能够极显着降低水貂血清中AMDV基因拷贝数、γ-球蛋白含量以及免疫复合物含量（P<0.01）,低剂量组能够降低病毒基因拷贝数和免疫复合物含量（P<0.05）,表明芪术舌草复方F4能够抑制AMDV在水貂体内的增殖。以上结果表明,由黄芪、白术、白花蛇舌草组成的芪术舌草复方F4具有较好的免疫增强作用,能够抑制AMDV在CrFK细胞以及在水貂体内的增殖。
张槐[3]（2019）在《复方芪术颗粒的研制及其免疫增强作用研究》文中进行了进一步梳理多数补气类中药在增强动物免疫力和恢复受免疫抑制动物的免疫力方面具有独特功效。本研究选用具有免疫增强作用的黄芪和白术两味补气类药材,经过水提醇沉、制粒、干燥等工序制备成复方芪术颗粒（Compound Huangqi&Baizhu granules,CHBG）,并进行了药物制剂学、毒理学以及药效学方面的研究,以期获得一种新的兽用免疫增强剂。现将研究结果分述如下:1.CHBG黄芪白术配比筛选为了获取疗效更优的CHBG,本文以雏鸡为试验动物,以黄芪与白术1:3～3:1不同比例配伍制备的颗粒为试验药物,同时设立疫苗免疫对照组,通过考察试验药物对新城疫（ND）疫苗抗体水平影响而筛选黄芪与白术的配伍比例。结果显示,当黄芪与白术比例为1:1时,雏鸡ND抗体水平较疫苗免疫对照组显着升高（P<0.05）,且其抗体水平在所有药物试验组中最高。结果表明,黄芪与白术比例为1:1时的颗粒剂具有较好的免疫增强作用,因此以此为基础制备CHBG。2.CHBG的制备及稳定性研究为了制备质量稳定、可控的GHBG,本文采用薄层色谱（TLC）和高效液相色谱（HPLC）法确定黄芪、白术的药材质量;在此基础上采用Ca（OH）2的碱水提醇沉的方法获取黄芪白术提取物,然后加入辅料、采用湿法制粒、干燥的工艺制得CHBG,再通过加速试验和长期稳定性试验考察稳定性。结果显示:（1）在黄芪和白术各自TLC图谱中,样品药材和对照品药材在相同位置显示相同荧光斑点;且两味药材的HPLC特征图谱与对照品药材的相似度均达到0.90以上,说明选用药材合格;（2）制得黄芪、白术的混合粗多糖,试验三批次的多糖平均得率为7.58%,其多糖含量为73.83%。制得的CHBG成品,每1 g相当于原生药2 g;（3）CHBG以市售铝塑包装密封后,在温度40±2℃,相对湿度为75±5%的环境中加速试验6个月以及在温度25±2℃、相对湿度60±10%的环境中放置18个月后,其外观性状、鉴别、含量等质量指标均符合CHBG质量标准要求。以上实验结果表明:选用合格的药材,采用Ca（OH）2的碱水提醇沉、喷雾干燥、湿法制粒获得的CHBG质量稳定,有效期可达18个月。3.CHBG质量标准研究为使CHBG质量可控,借鉴药典方法和采用TLC、HPLC等方法,建立CHBG的质量标准。结果:参考中国兽药典建立了 CHBG的含量检测方法以及确定了 CHBG的外观性状、水分、粒度、溶化性、微生物限度等检查项目;采用TLC法建立了 CHBG定性鉴别多糖、黄芪甲苷、白术的方法;参考中国兽药典建立了 HLPC检查CHBG中单糖、双糖含量的方法,并规定了检出限度;同时,采用HLPC法对9批CHBG特征图谱进行了考察,建立了 CHBG的指纹图谱。结果表明,本试验建立的质量标准可用于CHBG的质量控制。4.CHBG安全性评价采用改良寇氏法和最大耐受药量试验法评价CHBG安全性,为临床安全用药提供依据。改良寇氏法未能测定出CHBG对小鼠口服的LD50,但最大耐受药量试验法测得CHBG对小鼠口服的最大耐受剂量为180 g/（kg·bw）。在最大耐受药量时,小鼠体质量和脏器指数无明显变化。实验结果表明:CHBG对实验小鼠是安全的。5.CHBG对小鼠非特异性免疫调节作用研究为探讨CHBG对免疫缺陷动物的免疫调节作用,本文以小鼠为试验对象,采用环磷酰胺（cyclophosphamide,Cy）制作免疫抑制模型,再分别设立空白组、Cy组、Cy+CHBG3.75组（注:给药剂量为3.75g/（kg.bw）,本节下同）、Cy+CHBG7.5组、Cy+CHBG15.0组,并分别考察CHBG对小鼠免疫器官指数、碳粒廓清功能、脾淋巴细胞增殖、血清溶菌酶及TNF-α、IL-2、IL-4、IFN-γ等细胞因子的影响。同时设立空白组、黄芪多糖组、CHBG3.75组、CHBG7.5组、CHBG15.0组,采用流式细胞术测定CHBG对正常小鼠脾淋巴细胞亚群的影响。实验结果显示:（1）Cy处理可引起脾脏指数、胸腺指数下降,并能抑制脾淋巴细胞增殖,导致血清溶菌酶含量以及TNF-α、IL-2、IL-4、IFN-y等细胞因子水平下降。其中脾脏指数、血清溶菌酶含量以及IFN-y等细胞因子水平比空白组显着下降（P<0.05）,说明Cy处理引起了明显的免疫抑制。（2）与Cy组比较,CHBG15.0可显着提高脾脏指数、IFN-y的含量（P<0.05）,极显着提高血清溶菌酶的含量（P<0.01）;CHBG7.5可极显着提高脾脏指数、胸腺指数、血清溶菌酶的含量（P<0.01）;CHBG3.75可显着恢复并促进小鼠脾淋巴细胞增殖、显着提高IL-4的含量（P<0.05）,极显着提高脾脏指数、血清溶菌酶的含量（P<0.01）。CHBG各剂量组均可提高碳粒廓清指数和吞噬指数,但差异不显着（P>0.05）;对TNF-α、IL-2的生成也无明显影响。（3）CHBG3 75可显着降低正常小鼠CD8+T细胞的数量（P<0.05）,并显着提高CD4+/CD8+比值（P<0.05）,且除CHBG15.0组的CD4+T细胞的数量和CD4+/CD8+的比值显着低于黄芪多糖组（P<0.05）,CD8+T细胞的数量显着高于黄芪多糖组（P<0.05）外,CHBG3 75组和CHBG7.5组的CD4+、CD8+T细胞的数量以及CD4+/CD8+的比值均与黄芪多糖组的差异不显着（P>0.05）。以上试验结果表明:CHBG可明显恢复Cy所致小鼠免疫器官发育的抑制作用,能增强Con A诱导的脾淋巴细胞增殖反应;增强单核巨噬细胞的吞噬功能、促进溶菌酶释放,诱导机体产生IFN-γ、提高血清中IL-4的含量,还可提高CD4+/CD8+T淋巴细胞比值。6.CHBG对ND疫苗免疫效果的影响为考察CHBG对ND疫苗免疫效果。以口服0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 g/L的剂量在每次免疫后连续给药7 d,考察不同剂量CHBG对雏鸡ND抗体水平的影响;以整个免疫期连续给药、首免和二免后连续给药1周以及首免后给药1周的三种方案给药,考察CHBG的不同给药方案对雏鸡ND抗体水平的影响。结果显示:（1）当口服不同剂量CHBG时,与疫苗免疫对照组比较,在首免后的第1、2周,CHBG10（注:给药剂量为1.0 g/L饮水给药,本节下同）组的抗体水平显着升高（P<0.05）,在二免后第1、2周时,抗体水平极显着升高（P<0.01）。与黄芪多糖组比较,CHBG各剂量组中除CHBG5.0组在35日龄时的ND抗体水平显着低于黄芪多糖组外（P<0.05）,而其余各组与其差异均不显着（P>0.05）。（2）采取不同给药方案时,与免疫对照组比较,在几种方案中,以每次免疫ND疫苗后,饮水给予1.0 g/L剂量的CHBG,并连续给药7 d的方案较好,其在首免后第1、2周,雏鸡ND抗体水平可显着增加（P<0.05）,在二免后第1、2周时,雏鸡ND抗体水平极显着增加（P<0.01）;且用药成本低。综上所述,采用本试验方法制备的CHBG安全、稳定;同时建立了 CHBG质量标准,其检测方法简单、可行,可用于CHBG的质量控制。动物试验证实CHBG既可以恢复和增强机体的非特异性免疫,也能增强机体的特异性免疫,同时提供了 CHBG的临床使用方案,即每次免疫后以1.0 g/L剂量饮水连续给药7 d,有助于雏鸡ND抗体水平的提高,可为雏鸡提供更好的保护。
魏恒,李娟娟[4]（2018）在《中药免疫增强剂在养鸡生产中的应用研究进展》文中研究表明随着我国养鸡业的迅速发展,鸡病发生率也呈逐年上升的趋势。为了降低鸡病的发生,人们纷纷采取各种方法加强鸡病预防,提高鸡群的免疫力。因中药免疫增强剂具有免疫增强功效、天然性、不容易发生耐药性、副作用小、无残留等特点而受到越来越多学者的关注。着重对中药免疫增强剂的物质基础、作用机制和养鸡生产中的应用情况及展望进行介绍,为中药免疫增强剂的开发和临床应用提供参考。
王洪超[5]（2016）在《中药芪藿糖散的生产工艺、安全性和功效研究》文中指出随着当今畜牧业的快速发展,现有的免疫增强剂存在着许多不足之处,难以达到满意的免疫效果,因此研究高效、安全廉价的新型免疫增强剂已成为亟待解决的问题。本研究在前期成功研制的芪藿糖注射液的基础上,研制了中药芪藿糖散,研究了芪蒮糖散的生产工艺和安全性,并筛选其最佳剂量,验证了其功效,旨在为芪藿糖散的开发应用提供理论依据。试验包括下面五个部分:试验Ⅰ.芪藿糖散生产工艺的研究 测定了芪藿糖散药液的干物质含量、最小喷雾体积和辅料的吸附能力。芪藿糖散药液干物质含量的测定结果表明,3份药液的干物质含量在12.1%～14.5%,辅料用量的比率应在85.5%～87.9%,因此确定辅料的用量为880 g。药液最小喷雾体积的测定结果表明,最小喷雾体积的比率在40%～55%,喷雾体积应大于550ml;辅料吸附能力的测定结果表明,喷入药液体积的合适比率在80%～260%,药液的体积应大于800ml,因此确定芪藿糖散药液的总体积为1000 ml。根据以上研究结果,确定了芪藿糖散生产工艺的关键参数为制成1000 ml药液,喷入到880 g二氧化硅中。试较Ⅱ.芪藿糖散的安全性研究 按照新兽药安全性研究指导原则,测定了芪藿糖散（AEP）的急性毒性、亚慢性毒性和对靶动物鸡的安全性。急性毒性试验结果显示,芪藿糖散的最大给药量为18000 mg·kg-1,表明芪藿糖散无毒;亚慢性毒性试验结果显示,各组小鼠在每次灌胃后会出现一过性不适反应,在整个试验期间未出现任何不良反应和发病死亡现象,在给药前及停药后第1、14天各组小鼠体重无显着差异,在停药后第1、14天各组小鼠的血液生理指标、血清生化指标均无显着差异、剖检和组织病理学检查未见明显的病理变化,表明芪藿糖散没有明显的亚慢性毒性;靶动物安全性试验结果显示,各组鸡在整个试验观察期间的临床体征均正常,未出现任何不良反应和发病死亡现象,在给药前和停药后第1、7天各组鸡的体重均无显着差异,在停药后第1天各组鸡的血液生理指标和血清生化指标均在正常范围之内、剖检均未见明显的病理变化,表明芪藿糖散对靶动物安全。试验Ⅲ：芪藿糖散刑量筛选试验 14日龄非免疫健康罗曼蛋公雏210羽随机均分为7组,除空白对照组外均用新城疫Ⅳ系苗滴鼻、点眼免疫,28日龄二免。在每次免疫的同时,芪藿糖散的5个剂量组每羽分别拌饲芪藿糖散125 mg、100mg、75 mg、50 mg、25 mg,每天1次,连续3天;空白对照组和免疫对照组不给药。分别于首免后第7、14、21和28 d,每组随机抽取6羽翼静脉采血,用β-微量法检测血清新城疫抗体效价。结果显示,在免疫后所有时间点,芪藿糖散各剂量组的血清抗体效价多显着高于免疫对照组和空白对照组,75 mg组在前三个时间点的抗体效价最高,在第四个时间点列第二位,表明芪藿糖散增强免疫的作用显着,75 mg/羽剂量的作用最强,可以推荐为临床应用剂量。试验Ⅳ.芪藿糖散拮抗鸡免疫抑制临床试验雏鸡饲养至11日龄取180羽随机均分为6组,除空白对照组外均肌肉注射8 mg·mL-1的环磷酰胺溶液0.5 ml,每天1次,连续3天。14日龄时,3个药物剂量组每羽分别拌饲芪藿糖散100 mg、75 mg、50 mg,药物对照组每羽饮服黄芪多糖口服液0.1 ml,每天1次,连续3天;空白对照组和模型对照组不给药。给药后每天观察鸡群的生长情况,分别于首次给药后第7、14、21和28 d,每组随机抽取6羽,称重、计算平均体重,心脏采血、用MTT法测定外周血淋巴细胞增殖（细胞A570值）,分离脾脏、胸腺和法氏囊称重、计算免疫器官指数。结果显示,在给药后所有时间点,各给药组的细胞A570值均显着大于模型对照组,药物中剂量组最大;胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数多显着大于模型对照组,中剂量组最大;平均体重均显着重于模型对照组,中剂量组的体重最重。结果表明,芪藿糖散可以有效拮抗环磷酰胺诱导的免疫抑制,促进免疫功能、免疫器官发育和生长恢复到正常水平,中剂量的作用最为显着。试验Ⅴ.芪藿糖散增强鸡疫苗免疫效果试验 14日龄非免疫健康罗曼蛋公鸡300羽随机均分为6组,每组50羽,除空白对照组外,均用新城疫Ⅳ系苗滴鼻、点眼免疫,28日龄二免。在每次免疫的同时,药物的高、中、低剂量组每羽分别拌饲芪藿糖散100 mg、75 mg、50 mg,药物对照组每羽饮服黄芪多糖口服液0.1 ml,每天1次,连续3天;免疫对照组和空白对照组不给药。分别于首免后第7、14、21和28天,每组随机抽取6羽翼静脉采血,用β-微量法检测血清新城疫抗体效价;每组随机抽取4羽,心脏采血,用MTT法检测淋巴细胞增殖（A570值）;每组随机抽取6羽,称重,计算平均体重。结果显示,在免疫后所有时间点,各给药组的血清抗体效价、细胞A570值和平均体重多高于或显着高于免疫对照组,药物中剂量组的抗体效价和细胞A570值均为最高,显着高于免疫对照组,平均体重与高剂量组交替最重,显着重于免疫对照组。表明芪藿糖散能显着增强鸡新城疫苗的免疫效果,并有一定的促生长作用,中剂量组的作用最强,推荐为临床应用剂量。
张萍[6]（2015）在《赤灵芝多糖抗病毒活性和增强免疫作用研究》文中研究说明畜禽传染性疾病,尤其是病毒性疾病,是危害畜牧业发展的首要问题,由于它们能造成畜禽养殖业的巨大损失而在全世界范围内备受关注。因病毒具有独特的生物特征和发病机理,目前还没有针对病毒性疾病有效的治疗方法,所以疫苗接种则成了主要的预防措施。虽然有关传染性疾病疫苗的研究和应用很多,但现有疫苗的免疫效果却不尽人意,很多疫苗由于病毒的易变异性和理化因素等影响,经常出现免疫失败的现象。近年来,在畜禽免疫方面,中药多糖增强免疫应用受到了兽医界医药科研者的广泛关注。研究证明,许多中药及其组分具有一定的抗病毒和增强免疫作用,一些中药及其组分在疫苗接前后使用,这样可以提高机体免疫力,降低传染病发病率。灵芝（Ganoderma lucidum）在我国应用历史悠久,灵芝的药用成分非常丰富,尤其是从灵芝中提取的灵芝多糖（Ganoderma lucidum polysaccharides,GLP）。近年来试验研究表明,灵芝多糖具有增强免疫功能、抗病毒、抗炎症、抑制肿瘤、降血压、护肝等作用,上述研究主要集中在人医上,且相关作用已得到多方面的实验验证,但灵芝多糖在畜禽生产方面的研究还很有限,尤其是在畜禽生产中抗病毒和增强免疫作用方面的研究甚少。因此,本论文以赤灵芝多糖为研究目标,通过相关体内外试验,研究了赤灵芝多糖抗病毒与免疫调节作用及其机理,为赤灵芝多糖在养禽养殖上的应用以及在此基础上进一步开发新型免疫增强剂奠定基础。具体试验安排分以下八个部分:1.赤灵芝多糖对NDV、IBDV感染细胞能力的影响目的:探究赤灵芝多糖的体外抗病毒活性作用。方法:将赤灵芝多糖与IBDV、NDV两种病毒分别以3种加样方式（先加药,先加病毒,病毒和多糖感作后同时加入）加入培养24 h的鸡胚成纤维细胞（CEF）上,MTT法测定细胞活性以评价赤灵芝多糖对鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）、鸡新城疫病毒（NDV）两种病毒感染CEF能力的影响。结果:先加赤灵芝多糖后接种病毒的方式,赤灵芝多糖在9.766～625μg.mL-1时,其A570均显着大于病毒对照组;先加病毒后,赤灵芝多糖对NDV无明显抑制作用,且只有在高浓度才体现抑制IBDV作用;病毒和多糖感作后同时加入,赤灵芝多糖在9.766～625 μg·mL-1时,其A570均显着大于IBDV对照组,而所有的多糖组A570均显着大于NDV对照组。结论:赤灵芝多糖对IBDV、NDV两种病毒感染CEF有一定的抑制作用,尤其是提前给多糖方式效果较好,提示赤灵芝多糖对病毒吸附宿主细胞有阻断和抑制作用。2.赤灵芝多糖对CEF细胞中IFN-β的mRNA表达影响目的:探讨赤灵芝多糖对CEF抗病毒感染的能力的影响机理。方法:选用Oligo7软件设计了一对干扰素-β（Interferonβ,IFN-β）引物,用荧光定量PCR方法测定了赤灵芝多糖对鸡胚成纤维细胞IFN-β的mRNA表达的影响。结果:赤灵芝多糖能诱导CEF中IFN-β的表达,使IFN-β的mRNA转录水平升高,尤其是灵芝多糖在156.25μg·mL-1 时,能够显着促进 CEF 中 IFN-β 的表达（P<0.05）,在 39.065 和 78.125μg·mL-1时能促进IFN-β mRNA的表达,但与对照组差异不显着。结论:结合之前抗病毒试验结果分析,赤灵芝多糖对CEF抗病毒作用的影响与其诱导产生的IFN-β有关,可能是IFN-β干扰了病毒吸附宿主细胞,这也许是赤灵芝多糖增强CEF抗病毒感染能力的分子机制之一。3.赤灵芝多糖对鸡外周血淋巴细胞、脾脏淋巴细胞增殖的影响目的:探讨赤灵芝多糖对体外培养鸡外周血淋巴细胞、脾脏淋巴细胞增殖的影响。方法:将不同浓度的赤灵芝多糖单独或协同伴刀豆素球蛋白（ConA）刺激仔鸡外周血淋巴细胞、脾脏淋巴细胞,采用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化。结果:单独刺激外周血淋巴细胞时,GLP在0.070～2.25 mg·mL-1的剂量范围内,其吸光度值均显着大于细胞对照组（P<0.05）,协同ConA刺激外周血淋巴细胞时,GLP+ConA组在0.141～2.25 mg·mL-1吸光度值显着大于ConA对照组（P<0.05）。单独刺激脾脏淋巴细胞时,GLP在0.035～2.25 mg·mL-1浓度时的吸光度值显着大于细胞对照组（P<0.05）,协同ConA刺激脾脏淋巴细胞时,GLP+ConA组在0.035～2.25 mg·mL-1吸光度值显着大于ConA对照组（P<0.05）。结论:赤灵芝多糖在体外不仅能单独刺激鸡淋巴细胞增殖,与ConA具有协同刺激作用,且在一定范围内呈现明显的量效关系。4.赤灵芝多糖体外对鸡外周血淋巴细胞中IL-6、IFN-γ mRNA表达的影响目的:探究赤灵芝多糖增强免疫的机理。方法:用Oligo7软件设计了白介素-6（Interleukin 6,IL-6）引物、干扰素-γ（Interferonγ,IFN-y）引物,利用多糖辅助 ConA刺激的鸡外周血淋巴细胞,并从中提取总RNA。荧光定量PCR方法测定赤灵芝多糖对鸡外周血淋巴细胞IL-6、IFN-y的mRNA表达的影响。结果:赤灵芝多糖在合适的浓度下能够协同ConA促进外周血淋巴细胞中IL-6、IFN-y mRNA的表达,与ConA对照组相比,GLP在562.5μg·mL-1、281.25 μg·mL-1时能够显着促进IL-6 mRNA的表达（P<0.05）,GLP 在 140.63 μg·mL-1 时能够显着促进 IFN-y mRNA 的表达（P<0.05）。结论:赤灵芝多糖在合适的浓度下能够促进IL-6、IFN-γ mRNA的表达,这可能是其增强免疫的机理之一。5.赤灵芝多糖对雏鸡黏膜免疫功能的影响目的:探讨赤灵芝多糖对免疫雏鸡黏膜免疫功能的影响。方法:1日龄非免疫罗曼蛋公鸡饲养至14日龄,随机选取225只,分为5组,除空白对照组外均用新城疫Ⅳ苗滴鼻、点眼免疫,1羽份/羽,28日龄二免。在每次免疫的同时,3个药物剂量组分别灌服不同浓度的赤灵芝多糖溶液,连续3天,免疫对照组和空白对照组不给药。在二免后第14天分别各组随机抽取5羽,放血致死,采取十二指肠和盲肠扁桃体,用免疫组化法测定肠绒毛和盲肠扁桃体SIgA阳性细胞数量。结果:赤灵芝多糖在50、25、12.5 mg·kg-1剂量时可以显着提高十二指肠和盲肠扁桃体的SIgA细胞阳性数,其中25 mg·kg-1剂量组SIgA水平最高。结论:赤灵芝多糖可以有效地提高SIgA阳性细胞数目,从而增强机体黏膜免疫。6.赤灵芝多糖对免疫雏鸡外周血淋巴细胞IL-6、IFN-γ mRNA表达的影响目的:探讨赤灵芝多糖对免疫雏鸡白介素-6（Interleukin 6,IL-6）、干扰素-γ（Interferonγ,IFN-γ）表达的影响,分析赤灵芝多糖体内增强免疫机理。方法:1日龄非免疫罗曼蛋公鸡饲养至14日龄,随机选取225只,分为5组,除空白对照组外均用新城疫Ⅳ苗滴鼻、点眼免疫,1羽份/羽,28日龄二免。在每次免疫的同时,3个药物剂量组分别灌服不同浓度的灵芝多糖溶液,连续3天,免疫对照组和空白对照组不给药。在首免后第28天分别各组随机抽取5羽,无菌心脏采血,分离淋巴细胞,并从中提取总RNA。用Oligo7软件设计IL-6引物、IFN-γ引物。荧光定量PCR方法测定赤灵芝多糖对免疫雏鸡外周血淋巴细胞IL-6、IFN-γ mRNA表达的影响。结果:赤灵芝多糖在50、25 mg·kg-1时能够显着促进IL-6、IFN-γ mRNA的表达（P<0.05）。结论:赤灵芝多糖在体内能够促进细胞因子IL-6、IFN-γ mRNA的表达,这可能是其增强免疫的机理之一。7.赤灵芝多糖对雏鸡新城疫疫苗免疫应答影响目的:研究赤灵芝多糖对新城疫免疫雏鸡外周血淋巴细胞增殖、免疫器官指数以及抗体效价的影响。方法:300只1日龄罗曼蛋公鸡饲养至14日龄,随机分为6组,除空白对照组外均用新城疫疫苗滴鼻、点眼免疫,1羽份/羽,28日龄时进行二免,在每次免疫的同时,分别灌服3种不同浓度的赤灵芝多糖溶液,药物对照组灌服黄芪多糖溶液,连续3天,免疫对照组和空白对照组不给药。分别在首免后的第7天、14天,21天、28天测定外周血淋巴细胞增殖活性、新城疫抗体效价,在首免后第28天随机抽取5只处死,称取胸腺、脾脏和法氏囊重量,计算免疫器官指数。结果:赤灵芝多糖在50、25 mg·kg-1时可以促进雏鸡外周血淋巴细胞增殖、提升机体血清抗体效价,提高免疫器官指数等。结论:赤灵芝多糖可以提高机体的免疫能力,增强疫苗的免疫效果。8.赤灵芝多糖对免疫雏鸡抗新城疫病毒影响目的:研究赤灵芝多糖对免疫雏鸡抗新城疫病毒影响。方法:280只1日龄罗曼蛋公鸡饲养至14日龄,随机分为7组,除空白对照组外均用新城疫疫苗滴鼻、点眼免疫,1羽份/羽,28日龄时进行二免,在每次免疫的同时,分别灌服3种不同浓度的赤灵芝多糖溶液,药物对照组灌服黄芪多糖溶液,连续3天,免疫对照组、病毒对照组和空白对照组不给药。在首免后的第28天,除空白对照组外,其他各组用新城疫病毒攻毒,记录各组发病状况,并统计各组的发病率、死亡率、保护率。结果:赤灵芝多糖组高、中剂量组鸡只的死亡率和发病率均显着低于病毒对照组（P<0.05）,也低于APS对照组和免疫对照组。结论:赤灵芝多糖可以增强疫苗的免疫效果,提升机体的抗病毒能力。
陈晓兰[7]（2014）在《中药黄酮免疫增强剂藿蜂饮及作用机理研究》文中研究表明近年来,畜禽传染病等疫病的流行不仅使畜牧业遭受巨大冲击,而且危及到了公共卫生安全。这些危害大的疫病,绝大多数属于病毒性传染病,其中一些还属于免疫抑制性疾病。迄今为止,人们还没有找到有特效的治疗药物。除了加强饲养管理外,应用疫苗免疫是主要的预防措施,而应用免疫增强剂提高疫苗的免疫效果和增强动物的抗病能力是提高预防效果的重要措施。目前常用的免疫增强剂尚存在许多不尽人意之处,因此研制高效、低毒的新型免疫增强剂成为亟待解决的问题。研究表明,许多中药具有较好的免疫增强作用,中药免疫增强剂具有明显的优势。本研究在研制成功藿蜂注射液（EPI）的基础上,系统研究了其口服剂型藿蜂饮（EPO）的生产工艺、质量控制、稳定性、安全性、临床应用剂量、增强免疫的作用及机理。研究主要包括以下八个部分。试验Ⅰ、EPO生产工艺的研究在EPI制备工艺的基础上,研究了淫羊藿的提取、助溶剂的用量。淫羊藿提取试验,以淫羊藿多糖为指标,比较了加水倍数和煎煮温度对多糖含量的影响。结果表明,加20倍量水、100 ℃,煎煮时提取效率最好,多糖含量最高。助溶剂用量选择试验,比较了无水乙醇、大豆磷脂、吐温、聚乙二醇、丙三醇的用量对制剂性状和稳定性的影响,结果显示,无水乙醇、吐温、聚乙二醇、丙三醇体积比例分别为9.0%、2.0%、8.0%、6.0%,大豆磷脂质量比例为1.0%时效果最好。综合以上研究结果确定了EPO的生产工艺为:淫羊藿加20倍水量煎煮2次,第一次1.5 h,第二次1h,合并滤液,静置,离心去除沉淀,加蒸馏水至770 ml,滤过,滤液加丙三醇60ml,混匀;蜂胶加无水乙醇90ml溶解,加大豆磷脂10 g、聚乙二醇-400 80 ml,混匀,缓慢加入到淫羊藿溶液中,混匀,分装,灭菌。试验Ⅱ、EPO质量控制的研究研究了 EPO的检验方法。淫羊藿苷鉴别试验,比较了 3种取样量和3种点样量对淫羊藿苷薄层色谱的影响。结果显示,取样量为2.5 ml、点样量为3 μl时的薄层色谱最好。高良姜素鉴别试验,比较3种点样量对高良姜素薄层色谱的影响。结果显示,点样量为3 μl时的薄层色谱最好。淫羊藿苷含量测定试验,比较了两种流动相及不同洗脱方法对HPLC法中淫羊藿苷分离效果的影响,并进行了方法学验证。结果显示,以乙腈-0.15%磷酸（25:75）,进行梯度洗脱,可快速、准确地测定EPO中淫羊藿苷的含量,方法的线性关系良好,精密度、回收率高,稳定性好,方法可行。白杨素和高良姜素的含量测定,建立了 HPLC含量测定方法,并进行了方法学验证。结果显示,两成分的峰形良好,未出现杂峰干扰或拖尾等现象;白杨素和高良姜素在150～750 ng范围内线性关系良好,精密度、回收率高,稳定好,方法可行。试验Ⅲ、EPO稳定性的测定测定了 EPO的稳定性,重点考察了性状、沉降体积比、pH值、再分散性、淫羊藿苷、高良姜素和白杨素的含量等项目。影响因素试验,考察了 45001x±5001x强光照射下三批EPO样品在D0、D5、D10上述各指标的变化。结果显示,EPO在10 d内性状、沉降体积比和pH值保持稳定,再分散性良好,淫羊藿苷、白杨素和高良姜素含量稍下降,表明EPO对光照有一定的敏感性,宜避光保存。加速稳定性试验,在温度3℃±2℃、相对湿度为60%±5%的条件下三批EPO样品在第0、1、2、3和6个月各项指标的变化。结果表明,EPO在6个月内稳定。长期稳定性试验,考察了在室温条件下三批EPO样品在0、3、6、9和12个月各项指标的变化。结果表明,EPO在12个月内稳定。试验Ⅳ、EPO的安全性测定测定了 EPO的安全性。急性毒性试验,在预试验证明无法测得LD50的基础上,测得EPO的最大给药量为32 g/kg,表明EPO实际无毒。长期毒性试验,取ICR小鼠100只随机均分为5组,3个给药组分别灌胃40mg/ml、10 mg/ml和2.5 mg/ml的EPO 0.4 ml,溶剂对照组（SC）灌胃EPO溶剂0.4 ml,空白对照组（BC）灌胃等体积的生理盐水,每天1次,连续14 d。于给药前（D0）、停药后D1、D7和D14称重,计算平均体重;于D1和D14抽样,采血测定血常规、血清生化指标和脏器指数,剖检,取肝、肾切片观察病理变化。结果显示,给药后各组小鼠的临床体征正常,各给药组和SC组在停药后D1和D14血常规、血清生化指标均在正常范围,剖检及肝肾切片未见明显病理变化。表明无明显的长期毒性。靶动物鸡安全性试验,取14日龄健康罗曼雏鸡80只,随机均分为4组。三个给药组分别饮服1.25 mg/ml、0.75 mg/ml、0.25 mg/ml 浓度 EPO 1ml/只,每天 1 次,连续 9 d,空 白对照组不给药。每天观察鸡的给药反应,连续观察至停药后D7。分别于给药前当天（D0）、停药后D1、D7称重,计算平均体重。于D1每组随机抽取4只鸡,采血测定血常规和血清ALT、ALP、CREA和BUN的含量。结果显示,EPO各给药组鸡临床体征正常,各项指标与对照组比较均无显着差异。结果表明EPO对靶动物鸡安全。试验Ⅴ、EPO剂量筛选试验14日龄雏鸡300羽随机均分为10组,每组30只。除空白对照组（BC）外均用NDV-IV疫苗滴鼻点眼免疫,1头份/羽,28日龄二免。在每次免疫的同时,EPO的7个剂量组分别灌服浓度为0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5、1.75 mg/ml的EPO 1ml,每天1次,连用3d;EPI对照组在首次免疫的同时一次肌注EPI 0.5 ml;免疫对照组（VC）和空白对照组（BC）不给药。分别于首免后D7、D14、D21、D28每组随机抽取6只鸡翼静脉采血,用血凝抑制试验检测血清新城疫抗体效价,并称重,计算增重率。结果显示,所有鸡精神、饮食等均正常。0.25 mg/羽组在所有时间点的抗体效价最高,显着高于VC组,增重率显着高于VC组和BC组、在后两个时间点多显着高于其它给药组。结果表明,EPO在合适的剂量能显着增强体液免疫应答,促进雏鸡生长,0.25 mg/羽的剂量最好,与EPI的效果相似。试验Ⅵ、EPO增强鸡新城疫疫苗免疫效果的测定14日龄雏鸡320羽随机均分为8组,除空白对照组外均用NDV-Ⅳ系疫苗免疫,28日龄二免。在每次免疫的同时,EPO的高、中、低剂量组每分别饮服EPO 0.125、0.25、0.5 mg,组分药对照组分别饮服EP和PF 0.25 mg,每天1次,连用3 d;EPI对照组一次肌肉注射0.5 ml;免疫对照组和空白对照组不给药。测定免疫后D7、D14、D21、D28和D35血清抗体效价、淋巴细胞增殖、血清IL-2和IFN-γ含量以及免疫器官指数的变化。结果显示,EPO高、中剂量组在所有时间点的抗体效价、在D14～D35的淋巴细胞值及大多数时间点的IFN-γ和IL-2含量显着高于免疫对照组及组分药对照组,稍优于EPI组,免疫器官指数在所有时间点也有所提高。结果表明,EPO能显着提高机体的系统免疫应答,高、中剂量的效果较好。试验Ⅶ、EPO增强鸡小肠黏膜免疫功能的测定14日龄雏鸡320羽随机均分为8组,除空白对照组外均用NDV-Ⅳ系疫苗免疫,28日龄二免。在每次免疫的同时,EPO的高、中、低剂量组每分别饮服EPO 0.125、0.25、0.5 mg,组分药对照组分别饮服EP和PF 0.25 mg,每天1次,连用3 d;EPI对照组一次肌肉注射0.5 ml;免疫对照组和空白对照组不给药。分别于首免后D7、D21、D35,每组随机抽取6只鸡测定十二指肠和空肠洗液中sIgA和IL-17含量、十二指肠黏膜上皮淋巴细胞数、空肠黏膜和盲肠扁桃体IgA+细胞数。结果显示,在首免后各时间点,EPO高、中剂量组十二指肠和空肠洗液sIgA及IL-17的含量、十二指肠上皮内淋巴细胞数量及空肠和盲肠扁桃体IgA+细胞数量均显着大于免疫对照组,多大于或显着大于EPI、EP和PF组。结果表明,EPO能显着增强小肠的黏膜免疫功能;高、中剂量的效果最好,稍优于EPI。试验Ⅷ、EPO拮抗免疫抑制的作用测定11日龄健康罗曼鸡300只随机均分为6组,除空白对照组（BC）外每羽肌肉注射8 mg/ml的环磷酰胺溶液0.5 ml,每天1次,连续3 d;14日龄时,EPO的高、中、低剂量组分别每羽饮服0.5、0.25、0.125 mgEPO,EPI注射液对照组肌注EPI 0.5 ml,每天1次,连用3 d,模型对照（MC）组和BC组不给药。分别于给药后D7、D14、D21、D28每组随机抽取4羽心脏采血,用MTT法测定外周血T淋巴细胞增殖;同时每组随机抽取6羽,称重,计算平均体重,分离脾脏、法氏囊和胸腺,称重,计算免疫器官指数。结果显示,EPO高、中剂量组淋巴细胞增值率、脏器指数、平均体重在大部分时间点均显着高于MC组。结果表明,EPO能显着拮抗环磷酰胺诱导的雏鸡免疫抑制,促进雏鸡生长。高、中剂量的效果最好,与EPI的效果相当。
贺晓华[8]（2013）在《泰山梧桐花多糖对雏鸡的免疫增强作用研究》文中研究指明近年来，家禽养殖业飞速发展，但免疫抑制性疾病却流行严重，使疾病多发难控，导致对疫苗和抗生素的依赖加强，与此同时，疫苗的免疫效力减弱、抗生素滥用使得病原的耐药性增强等种种弊端也逐渐暴露出来，多种新型绿色免疫增强剂和免疫佐剂应运而生。植物多糖由于材料来源广泛、价格低廉、功效明显，并在解决药物残留和控制疫病方面有明显优势，成为新型免疫增强剂的首选。多糖是一种大分子物质，由多个单糖缩合失水而成，结构十分复杂、种属特异性强。多糖已被证实具有抗氧化、抗肿瘤、抗粘附、降低血糖等医药功效，但其最引人瞩目的还是其免疫调节的作用，这也是近年来关于多糖研究的热点。到目前为止，许多植物多糖已被证明具有免疫增强作用。梧桐花，为马鞭草科植物臭梧桐的花，据《本草纲目拾遗》记载梧桐花有祛风、降压、止痢等功效，具有较高的药用价值。目前我国梧桐花的种植逐渐形成规模，梧桐花的药用价值受到广泛关注，并取得了丰富的研究成果，但是国内对于梧桐花的研究仅限于对其成分的提取、分析和人类保健品的研究与开发，而对梧桐花多糖应用于畜禽疫病防治方面的研究则鲜有报道。本研究室所在的泰山地区得天独厚的自然环境和地理特征为梧桐树的规模种植提供了便利，因此，本课题组以泰山梧桐花为研究对象，所用原料均是课题组成员在初春时采自泰山地区的新鲜梧桐花，风干破碎后用水提醇沉法提取了粗多糖，同时经过抽提脂肪、去除蛋白质等步骤去除了多糖中的杂质，保证了粗多糖较高的纯度。试验中选取由SPF胚孵化的健康雏鸡为动物模型，探讨梧桐花多糖对雏鸡的免疫增强作用。旨在将其研制成新型植物免疫增强剂，为健康畜牧业的发展做贡献。本研究共分为以下二个部分：第一部分泰山梧桐花多糖对雏鸡脾脏淋巴细胞增殖的影响研究为探究泰山梧桐花多糖（TFSFPS）对雏鸡脾脏淋巴细胞体内外增殖的影响，本研究分两部分进行试验：第一部分，分别向两组雏鸡注射3种浓度（400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL）的TFSFPS，同时设置泰山松花粉对照组（TPPPS，浓度为400μg/mL）和空白对照组，在第7d、14d、21d时制备脾淋巴细胞，用PI染色法测定雏鸡脾脏淋巴细胞转化率；第二部分，将三种浓度的TFSFPS分别加入到体外分离培养的鸡脾脏淋巴细胞中，同样设置TPPPS对照组，培养48h后，用PI染色法测定鸡脾脏淋巴细胞转化率。结果表明，在脾淋巴细胞体内增殖试验中，三种浓度TFSFPS作用下的脾脏淋巴细胞转化率均显着高于空白对照组，但小于TPPPS对照组对脾脏淋巴细胞增殖的刺激作用；在脾淋巴细胞体外增殖试验中，两种多糖组的脾脏淋巴细胞转化率同样显着高于对照组，TPPPS组的脾脏淋巴细胞转化率均高于同浓度的TFSFPS组。由此表明， TFSFPS对鸡脾脏淋巴细胞的体内、外增殖均有刺激作用，但是刺激作用弱于TPPPS。本试验结果对于TFSFPS开发成新型免疫增强剂提供了理论依据。第二部分泰山梧桐花多糖对雏鸡免疫增强作用的研究为研究泰山梧桐花多糖对雏鸡免疫增强作用及其对免疫抑制雏鸡的免疫调理作用，本课题组选取由1日龄SPF胚孵化的健康雏鸡225只，随机分为9个组：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为TFSFPS组，分别于颈部皮下注射TFSFPS400mg/mL、200mg/mL、100mg/mL；Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组为TFSFPS+CTX组，各组在注射三种浓度的多糖的同时注射40mg/kg CTX；Ⅶ组为CTX对照组，只注射40mg/kg CTX，Ⅷ组为TPPPS对照组，注射400mg/mLTPPPS， Ⅸ组为空白对照组，注射等量灭菌生理盐水。所有雏鸡免疫新城疫灭活苗，分别在疫苗免疫后第3d、7d、14d、21d、28d、35d、42d采样，检测免疫器官指数、血清抗体水平、白细胞数、淋巴细胞比率、外周血T淋巴细胞转化率、IL-2、IFN-γ和小肠SIgA等指标。结果显示Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅷ组各免疫指标均显着高于Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅸ组（P＜0.05），表明TFSFPS对雏鸡有免疫增强作用，并能一定程度上解除免疫抑制；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅷ四组间，Ⅷ组均高于其它三个组，但是与Ⅰ组相比差异不显着（P＜0.05）。
金仕强,杨丁,左之才,周月华,陈燕凌,刘丽[9]（2013）在《鸡免疫增强剂的研究概况》文中提出综述了鸡的免疫增强剂的常见种类及作用机理,对化学药物类、维生素类、矿物元素类、中药类及细胞因子类等免疫增强剂的研究概念进行了综概述。
董立强[10]（2012）在《甘莲玉屏风散对鸡传染性喉气管炎疫苗免疫效果的影响》文中研究表明为了研究中药方剂甘莲玉屏风散（黄芪、防风、白术、甘草、穿心莲）对鸡传染性喉气管炎疫苗免疫效果的影响。选336只一日龄健康雏鸡,正常饲养至45日龄,随机分成8组,ⅠⅢ组在传染性喉气管炎（ILT）冻干苗免疫前一天分别按高（1.0g/ml）、中（0.5g/ml）、低（0.25g/ml） 3个浓度的甘莲玉屏风散煎液连续饮水3d。Ⅳ、Ⅴ和VI组分别在免疫后第3天按高、中、低3个浓度的甘莲玉屏风散煎液饮水3d。Ⅶ组为西药瘟毒清对照组,Ⅷ组为免疫对照组。于52、59、73、87日龄时,每组随机取8只鸡,心脏采血测定ILT抗体水平、IFN-γ、IL-4;翅下静脉采血测定CD4、CD8T淋巴细胞含量及CD4/CD8比值;随后剖杀取胸腺、脾脏、法氏囊、气管和肠管;计算胸腺、脾脏、法氏囊的器官指数,并将气管、肠管置于Bouin液中固定48小时制作石蜡切片,测定IgA分泌细胞的阳性表达率。试验结果表明,免疫前一天和免疫第三天的高、中剂量甘莲玉屏风散全程能显着提高血液中ILT抗体效价（P<0.01）、IFN-γ含量、免疫器官指数（P<0.05）、雏鸡气管小肠中IgA分泌细胞的阳性表达率和外周血巨噬细胞的吞噬活性并降低IL-4含量。低剂量的甘莲玉屏风散前期对IFN-γ、抗体、免疫器官指数均、气管小肠中IgA分泌细胞的阳性表达率和外周血巨噬细胞的吞噬活性均有不同程度的增强作用并降低IL-4含量,后期与对照组呈显着性差异;瘟毒清组前期对抗体、IFN-γ、免疫器官指数均、气管小肠中IgA分泌细胞的阳性表达率和外周血巨噬细胞的吞噬活性均有不同程度的增强作用并降低IL-4含量,后期与对照组相比差异不显着。结果表明,甘莲玉屏风散能有效提高雏鸡的免疫功能。
二、中药免疫增强剂对HVT免疫雏鸡免疫器官中免疫活性细胞的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、中药免疫增强剂对HVT免疫雏鸡免疫器官中免疫活性细胞的影响（论文提纲范文）
（1）“固元颗粒”免疫增强剂研制及其在鸡疫苗免疫中的应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 中药免疫增强剂的研究进展 |
| 1.1 免疫增强剂的分类 |
| 1.2 中药免疫增强剂概述 |
| 1.3 中药免疫增强剂的有效成分 |
| 1.4 中药免疫增强剂的作用机理 |
| 1.5 人参、黄芪免疫增强作用研究进展 |
| 1.6 中药免疫增强剂在养禽业中的应用 |
| 第二章 中药对TOLL样受体和信号传导的研究进展 |
| 2.1 先天性免疫 |
| 2.2 ToLL样受体 |
| 2.3 中药对TLRs信号传导途径的研究 |
| 2.4 中药对信号转导的影响 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第一章 “固元颗粒”制剂工艺研究 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 “固元颗粒”质量标准研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 “固元颗粒”的安全性和有效性研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.3 试验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 “固元颗粒”对蛋鸡TLR4 信号通路及胞内分子的调节 |
| 4.1 材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 “固元颗粒”在蛋鸡疫苗免疫中的应用 |
| 5.1 材料 |
| 5.2 方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）芪术舌草复方增强淋巴细胞免疫及其抑制AMDV增殖作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 中药免疫增强剂研究进展 |
| 1.1 免疫增强剂简介 |
| 1.2 中药免疫增强剂研究概况 |
| 1.3 黄芪免疫增强作用研究概况 |
| 1.4 党参免疫增强作用研究概况 |
| 1.5 白术免疫增强作用研究概况 |
| 1.6 杜仲免疫增强作用研究概况 |
| 1.7 白花蛇舌草免疫增强作用研究概况 |
| 1.8 中药复方增强动物机体免疫机能研究概况 |
| 第二章 中药抗病毒作用研究进展 |
| 2.1 抗病毒中药概况 |
| 2.2 中药抗病毒的作用机理 |
| 第三章 水貂药用价值及AMDV的研究进展 |
| 3.1 水貂的药用价值 |
| 3.2 AMD概述 |
| 3.3 AMDV概述 |
| 3.4 AMD的防治 |
| 3.5 AMDV与中草药 |
| 3.6 组方药物的选取 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 三种复方中药刺激小鼠脾淋巴细胞增殖作用比较 |
| 1.1 材料、试剂及仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 均匀设计法筛选芪术舌草复方的最佳组方配比 |
| 2.1 材料、试剂及仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 芪术舌草复方对AMDV在 CrFK细胞的增殖抑制作用研究 |
| 3.1 试验材料、试剂及仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 芪术舌草复方对AMDV在水貂体内增殖的抑制作用研究 |
| 4.1 试验材料、试剂及仪器 |
| 4.2 方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（3）复方芪术颗粒的研制及其免疫增强作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一章 免疫增强剂研究概述 |
| 1. 免疫增强剂研究进展 |
| 2. 中兽药免疫增强剂研究进展 |
| 3. 黄芪、白术免疫增强作用研究进展 |
| 4. 导致动物免疫抑制的因素 |
| 5. 本研究目的及意义 |
| 参考文献 |
| 第二章 复方芪术颗粒中黄芪与白术配比筛选 |
| 1. 材料 |
| 1.1 主要药品与试剂 |
| 1.2 主要仪器、设备及器具 |
| 2. 方法 |
| 2.1 试验药品制备 |
| 2.2 试验分组及指标测定 |
| 2.3 统计学方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 处方依据 |
| 4.2 黄芪、白术的配比选择 |
| 参考文献 |
| 第三章 复方芪术颗粒的制备及稳定性研究 |
| 1. 材料 |
| 1.1 主要药品与试剂 |
| 1.2 主要仪器、设备及器具 |
| 2. 方法 |
| 2.1 CHBG的研制 |
| 2.2 CHBG的稳定性研究 |
| 3. 结果 |
| 3.1 CHBG的制备 |
| 3.2 CHBG的稳定性研究结果 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 CHBG的制备工艺 |
| 4.2 CHBG的稳定性 |
| 参考文献 |
| 第四章 复方芪术颗粒的质量标准研究 |
| 1. 材料 |
| 1.1 主要药品与试剂 |
| 1.2 主要仪器、设备及器具 |
| 2. 方法 |
| 2.1 颗粒剂的鉴别方法 |
| 2.2 颗粒剂单糖和双糖检查方法 |
| 2.3 颗粒剂制剂通则项目检查方法 |
| 2.4 颗粒剂HPLC指纹图谱研究方法 |
| 2.5 颗粒剂总多糖含量检测方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 颗粒剂鉴别结果 |
| 3.2 颗粒剂单糖和双糖检查结果 |
| 3.3 颗粒剂制剂通则项目检查结果 |
| 3.4 颗粒剂HPLC指纹图谱研究结果 |
| 3.5 总多糖含量检测 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五章 复方芪术颗粒急性毒性试验研究 |
| 1. 材料 |
| 1.1 主要药品与试剂 |
| 1.2 主要仪器、设备及器具 |
| 1.3 试验动物及其生活环境情况 |
| 2. 方法 |
| 2.1 预实验 |
| 2.2 最大耐受药量试验 |
| 2.3 小鼠体质量和脏器指数的变化 |
| 2.4 统计学方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 预实验结果 |
| 3.2 最大耐受药量试验 |
| 3.3 小鼠体质量和脏器指数的变化 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第六章 复方芪术颗粒对小鼠非特异性免疫调节作用研究 |
| 1. 材料 |
| 1.1 主要药品、试剂 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2. 方法 |
| 2.1 CHBG对小鼠免疫器官指数及碳粒廓清功能的影响 |
| 2.2 CHBG对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响 |
| 2.3 CHBG对小鼠血清溶菌酶及部分细胞因子的影响 |
| 2.4 CHBG对小鼠脾淋巴细胞亚群分布的影响 |
| 2.5 统计学方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 CHBG对小鼠脾脏、胸腺指数的影响 |
| 3.2 CHBG对小鼠碳粒廓清指数和吞噬指数的影响 |
| 3.3 CHBG对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响 |
| 3.4 CHBG对小鼠血清中IFN-γ含量的影响 |
| 3.5 CHBG对小鼠血清中TNF-α含量的影响 |
| 3.6 CHBG对小鼠血清中IL-2含量的影响 |
| 3.7 CHBG对小鼠血清中IL-4含量的影响 |
| 3.8 CHBG对小鼠溶菌酶含量的影响 |
| 3.9 CHBG对小鼠淋巴细胞亚群分布的影响 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 CHBG对小鼠免疫器官的促进作用 |
| 4.2 CHBG对小鼠免疫细胞增殖以及免疫细胞功能的促进作用 |
| 4.3 CHBG诱导细胞因子释放的促进作用 |
| 参考文献 |
| 第七章 复方芪术颗粒对新城疫疫苗免疫效果的影响 |
| 1. 材料 |
| 1.1 主要药品、试剂 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2. 方法 |
| 2.1 口服不同剂量CHBG对雏鸡ND抗体水平的影响 |
| 2.2 不同给药方案对雏鸡ND抗体水平的影响 |
| 2.3 统计学方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 口服不同剂量的CHBG对雏鸡ND抗体水平的影响 |
| 3.2 不同给药方案对雏鸡ND抗体水平的影响 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论与创新 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 攻读学位期间申请的专利 |
（4）中药免疫增强剂在养鸡生产中的应用研究进展（论文提纲范文）
| 1 中药免疫增强作用的物质基础及作用机理 |
| 2 中药免疫增强剂在养鸡生产中的免疫增效作用 |
| 2.1 促进机体免疫器官的发育 |
| 2.2 增强细胞免疫能力 |
| 2.3 增强体液免疫能力 |
| 2.4 促进细胞因子的产生 |
| 2.5 促进单核巨噬细胞、白细胞的生长发育 |
| 3 中药免疫增强剂在养鸡生产中的临床应用 |
| 3.1 对鸡生产性能的影响 |
| 3.2 对疫苗免疫效果的影响 |
| 3.3 对鸡疾病治疗效果的影响 |
| 4 展望 |
（5）中药芪藿糖散的生产工艺、安全性和功效研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号及缩略语 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 中药免疫增强剂的组成 |
| 1.1 具有免疫增强作用的中药 |
| 1.2 具有免疫增强作用的方剂 |
| 1.3 具有免疫增强作用的中药成分 |
| 1.4 具有免疫增强作用的多糖衍生物 |
| 2 中药免疫增强剂的剂型 |
| 2.1 合剂 |
| 2.2 超微粉 |
| 2.3 颗粒剂 |
| 2.4 滴丸 |
| 2.5 片剂 |
| 3 中药免疫增强剂的作用机理 |
| 3.1 提高抗原的免疫原性 |
| 3.2 促进免疫器官发育 |
| 3.3 增强体液免疫 |
| 3.4 增强细胞免疫 |
| 4 本研究的选题和目的意义 |
| 参考文献 |
| 第二章 芪藿糖散生产工艺研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 药材和试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 芪藿糖散药液的制备 |
| 1.4 芪藿糖散药液干物质含量的测定 |
| 1.5 芪藿糖散药液喷雾体积的测定 |
| 1.6 辅料吸附能力的测定 |
| 2 结果 |
| 2.1 芪藿糖散药液的干物质含量 |
| 2.2 芪藿糖散药液的喷雾体积 |
| 2.3 辅料的吸附能力 |
| 3 讨论 |
| 3.1 芪藿糖散的药液制备和辅料用量 |
| 3.2 芪藿糖散的生产工艺 |
| 参考文献 |
| 第三章 芪藿糖散的安全性试验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 急性毒性试验 |
| 1.5 亚慢性毒性试验 |
| 1.6 靶动物安全性试验 |
| 1.7 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 急性毒性试验 |
| 2.2 亚慢性毒性试验 |
| 2.3 靶动物安全试验 |
| 3 讨论 |
| 3.1 芪藿糖散的急性毒性 |
| 3.2 芪藿糖散的亚慢性毒性 |
| 3.3 芪藿糖散对靶动物的安全性 |
| 参考文献 |
| 第四章 芪藿糖散剂量筛选试验 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 药物准备 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 芪藿糖散剂量筛选试验 |
| 1.5 数据处理 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 芪藿糖散的药效 |
| 3.2 芪藿糖散的最佳剂量 |
| 参考文献 |
| 第五章 芪藿糖散拮抗鸡免疫抑制临床试验 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 动物分组与处理 |
| 1.5 检测指标 |
| 1.6 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 淋巴细胞增殖的变化 |
| 2.2 胸腺指数的变化 |
| 2.3 脾脏指数的变化 |
| 2.4 法氏囊指数的变化 |
| 2.5 生长情况 |
| 3 讨论 |
| 3.1 芪藿糖散对模型鸡免疫功能的影响 |
| 3.2 芪藿糖散对模型鸡免疫器官发育的影响 |
| 3.3 芪藿糖散对模型鸡生长的影响 |
| 参考文献 |
| 第六章 芪藿糖散增强鸡疫苗免疫效果临床试验 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 疫苗与试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 动物分组及处理 |
| 1.5 观察指标 |
| 1.6 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组血清抗体效价的变化 |
| 2.2 各组淋巴细胞增殖的变化 |
| 2.3 各组体重的变化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 芪藿糖散对体液免疫的影响 |
| 3.2 芪藿糖散对细胞免疫的影响 |
| 3.3 芪藿糖散对鸡生长的影响 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 论文创新点 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 |
| 致谢 |
（6）赤灵芝多糖抗病毒活性和增强免疫作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号及缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 第一章 兽医临床免疫增强剂及其研究进展 |
| 1 免疫增强剂的分类 |
| 2 兽医临床常用的免疫增强剂 |
| 2.1 免疫刺激复合物 |
| 2.2 细胞因子类 |
| 2.3 脂质体 |
| 2.4 微生物及其组分 |
| 2.5 中药 |
| 参考文献 |
| 第二章 多糖抗病毒及其增强免疫研究进展 |
| 1 多糖在抗病毒方面的研究进展 |
| 1.1 多糖体外抗病毒作用 |
| 1.2 多糖体内抗病毒作用 |
| 2 多糖在增强免疫方面的研究进展 |
| 2.1 免疫器官 |
| 2.2 细胞免疫 |
| 2.3 体液免疫 |
| 2.4 细胞因子表达 |
| 2.5 红细胞免疫 |
| 2.6 吞噬细胞功能 |
| 参考文献 |
| 第三章 灵芝多糖生物学研究进展 |
| 1 灵芝主要活性成分 |
| 1.1 灵芝多糖 |
| 1.2 三萜 |
| 1.3 生物碱 |
| 1.4 核苷 |
| 1.5 甾醇 |
| 1.6 其他成分 |
| 2 灵芝多糖分离纯化及其鉴定 |
| 2.1 灵芝多糖的提取 |
| 2.2 多糖纯化 |
| 2.3 灵芝多糖结构鉴定 |
| 3 灵芝多糖药理作用 |
| 3.1 抗病毒 |
| 3.2 抗肿瘤 |
| 3.3 免疫调节 |
| 3.4 抗氧化 |
| 3.5 降血糖 |
| 3.6 对心血管系统的作用 |
| 参考文献 |
| 试验研究 |
| 第四章 赤灵芝多糖对IBDV、NDV感染CEF能力影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 病毒准备 |
| 1.5 细胞准备 |
| 1.6 赤灵芝多糖对鸡胚成纤维细胞的安全浓度的测定 |
| 1.7 赤灵芝多糖对IBDV感染CEF能力的影响 |
| 1.8 赤灵芝多糖对NDV感染CEF能力的影响 |
| 1.9 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 赤灵芝多糖对CEF的安全浓度 |
| 2.2 赤灵芝多糖对IBDV感染CEF能力的影响 |
| 2.3 赤灵芝多糖对NDV感染CEF能力的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 赤灵芝多糖对阻断IBDV、NDV感染CEF的影响 |
| 3.2 赤灵芝多糖对抑制IBDV、NDV感染CEF的影响 |
| 3.3 赤灵芝多糖对直接杀灭IBDV、NDV作用的影响 |
| 参考文献 |
| 第五章 赤灵芝多糖对CEF中IFN-β mRNA表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 主要试剂及其配制 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 细胞准备 |
| 1.5 鸡胚成纤维细胞总RNA的提取 |
| 1.6 反转录 |
| 1.7 PCR引物的设计 |
| 1.8 Real-time PCR测定 |
| 1.9 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 标准曲线、扩增曲线和溶解曲线 |
| 2.2 CEF中IFN-β mRNA表达量的变化 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第六章 赤灵芝多糖对鸡外周血淋巴细胞、脾脏淋巴细胞增殖的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 赤灵芝多糖对鸡外周血淋巴细胞增殖测定 |
| 1.5 赤灵芝多糖对鸡脾脏淋巴细胞增殖测定 |
| 1.6 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 赤灵芝多糖对鸡外周血淋巴细胞增殖影响 |
| 2.2 赤灵芝多糖对鸡脾脏淋巴细胞增殖 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第七章 赤灵芝多糖体外对鸡外周血淋巴细胞中IL-6、IFN-γ mRNA表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 主要试剂及其配制 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 鸡外周血淋巴细胞分离与培养 |
| 1.5 鸡外周血淋巴细胞总RNA的提取 |
| 1.6 反转录 |
| 1.7 PCR引物的设计 |
| 1.8 Real-time PCR测定 |
| 1.9 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 标准曲线、扩增曲线和溶解曲线 |
| 2.2 对鸡外周血淋巴细胞中IFN-γ mRNA表达的影响 |
| 2.3 对鸡外周血淋巴细胞中IL-6 mRNA表达影响 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第八章 赤灵芝多糖对雏鸡黏膜免疫功能的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 疫苗 |
| 1.3 主要试剂及其配制 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 分组和处理 |
| 1.6 石蜡切片免疫组化 |
| 1.7 阳性SIgA细胞数的分析 |
| 1.8 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 盲肠扁桃体SIgA阳性细胞数变化 |
| 2.2 十二指肠SIgA阳性细胞数变化 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第九章 赤灵芝多糖对免疫雏鸡外周血淋巴细胞IL-6、IFN-γ mRNA表达的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 疫苗及抗原 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 实验动物分组和处理 |
| 1.6 鸡外周血淋巴细胞总RNA的提取 |
| 1.7 反转录 |
| 1.8 PCR引物的设计及Real-time PCR测定 |
| 1.9 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 扩增曲线和溶解曲线 |
| 2.2 赤灵芝多糖对免疫雏鸡外周血淋巴细胞中IL-6 mRNA表达的影响 |
| 2.3 赤灵芝多糖对免疫雏鸡外周血淋巴细胞中IFN-γ mRNA表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第十章 赤灵芝多糖对雏鸡新城疫疫苗免疫应答影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 疫苗及抗原 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 实验动物分组和处理 |
| 1.6 新城疫抗体效价检测 |
| 1.7 外周血淋巴细胞增殖测定 |
| 1.8 免疫器官指数测定 |
| 1.9 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 血清效价的变化 |
| 2.2 外周血淋巴细胞增殖测定 |
| 2.3 免疫器官指数变化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 赤灵芝多糖对体液免疫的影响 |
| 3.2 赤灵芝多糖对细胞免疫的影响 |
| 3.3 赤灵芝多糖对免疫器官的影响 |
| 参考文献 |
| 第十一章 赤灵芝多糖对免疫雏鸡抗新城疫病毒影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 疫苗及抗原 |
| 1.3 分组和处理 |
| 1.4 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 临床症状 |
| 2.2 病变观察 |
| 2.3 攻毒保护效果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表和完成的论文 |
（7）中药黄酮免疫增强剂藿蜂饮及作用机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号及缩略语 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 中药免疫增强剂研究进展 |
| 1 临床常用的免疫增强剂 |
| 2 中药免疫增强剂的类型 |
| 3 中药免疫增强剂的剂型研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二章 选题依据和研究意义 |
| 1 新型免疫增强剂研究的迫切性 |
| 2 中药免疫增强剂的优势 |
| 3 本研究的目的意义 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第三章 EPO生产工艺的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 药材与试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 淫羊藿提取试验 |
| 1.4 助溶剂用量筛选试验 |
| 2 结果 |
| 2.1 淫羊藿的提取条件 |
| 2.2 助溶剂的用量 |
| 3 讨论 |
| 3.1 提取条件对提取液中淫羊藿多糖含量的影响 |
| 3.2 助溶剂用量对制剂性状和稳定性的影响 |
| 3.3 聚乙二醇的用量对制剂性状的影响 |
| 3.4 丙三醇的用量对制剂性状的影响 |
| 参考文献 |
| 第四章 EPO质量控制的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 药物与试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 淫羊藿苷的鉴别 |
| 1.4 高良姜素鉴别试验 |
| 1.5 淫羊藿苷的含量测定 |
| 1.6 高良姜素和白杨素的含量测定 |
| 2 结果 |
| 2.1 淫羊藿苷的鉴别 |
| 2.2 高良姜素的鉴别 |
| 2.3 淫羊藿苷的含量 |
| 2.4 高良姜素和白杨素的含量 |
| 3 讨论 |
| 3.1 淫羊藿苷和高良姜素的薄层鉴别 |
| 3.2 淫羊藿苷的含量测定方法 |
| 3.3 白杨素和高良姜素的含量测定方法 |
| 参考文献 |
| 第五章 EPO稳定性的测定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 药物准备 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 光加速试验方法 |
| 1.4 温加速试验方法 |
| 1.5 长期试验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 影响因素试验结果 |
| 2.2 加速试验结果 |
| 2.3 长期试验结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 光照对EPO的影响 |
| 3.2 温度对EPO的影响 |
| 3.3 EPO的稳定性 |
| 参考文献 |
| 第六章 EPO的安全性测定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 药物与仪器 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 急性毒性试验方法 |
| 1.4 长期毒性试验方法 |
| 1.5 靶动物安全性试验 |
| 1.6 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 急性毒性试验结果 |
| 2.2 长期毒性试验结果 |
| 2.3 靶动物安全性试验结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 EPO的急性毒性 |
| 3.2 EPO的长期毒性 |
| 3.3 EPO对靶动物的安全性 |
| 参考文献 |
| 第七章 EPO临床剂量的筛选 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 药物准备 |
| 1.2 疫苗 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 动物分组与处理 |
| 1.5 检测指标 |
| 1.6 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 临床体征观察 |
| 2.2 血清抗体的变化 |
| 2.3 体重变化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 EPO剂量对抗体效价的影响 |
| 3.2 EPO剂量对增重率的影响 |
| 参考文献 |
| 第八章 EPO增强鸡新城疫疫苗免疫效果的测定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 药物制备 |
| 1.2 疫苗和主要试剂 |
| 1.3 动物分组及处理 |
| 1.4 血清抗体效价的测定 |
| 1.5 外周血淋巴细胞增殖的测定 |
| 1.6 血清IL-2和IFN-γ含量的测定 |
| 1.7 免疫器官指数的测定 |
| 1.8 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 血清抗体效价的变化 |
| 2.2 淋巴细胞增殖的变化 |
| 2.3 血清IL-2含量的变化 |
| 2.4 血清IFN-γ含量的变化 |
| 2.5 免疫器官指数的变化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 EPO对体液免疫的影响 |
| 3.2 EPO对细胞免疫的影响 |
| 3.3 EPO对免疫因子的影响 |
| 3.4 EPO对免疫器官发育的影响 |
| 参考文献 |
| 第九章 EPO增强鸡小肠黏膜免疫功能的测定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 药物准备 |
| 1.2 疫苗和试剂 |
| 1.3 动物与分组处理 |
| 1.4 小肠洗液中sIgA和IL-17含量的测定 |
| 1.5 十二指肠黏膜上皮内淋巴细胞计数 |
| 1.6 空肠黏膜和盲肠扁桃体IgA~+细胞计数 |
| 1.7 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 十二指肠洗液中sIgA含量的变化 |
| 2.2 空肠洗液中sIgA含量的变化 |
| 2.3 十二指肠道洗液中IL-17含量的变化 |
| 2.4 空肠洗液中IL-17含量的变化 |
| 2.5 十二指肠黏膜上皮内淋巴细胞数的变化 |
| 2.6 空肠黏膜中IgA~+细胞数的变化 |
| 2.7 盲肠扁桃体中IgA~+细胞数的变化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 EPO对十二指肠和空肠黏膜sIgA分泌的影响 |
| 3.2 EPO对小肠IL-17分泌的影响 |
| 3.3 EPO对十二指肠上皮内淋巴细胞数量的影响 |
| 3.4 EPO对空肠和盲肠扁桃体IgA~+细胞数量的影响 |
| 参考文献 |
| 第十章 EPO拮抗免疫抑制作用的测定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 药物、试剂与仪器 |
| 1.2 动物分组及处理 |
| 1.3 T淋巴细胞增殖的测定 |
| 1.4 免疫器官发育测定 |
| 1.5 生长情况测定 |
| 1.6 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 淋巴细胞增殖的变化 |
| 2.2 免疫器官指数的变化 |
| 2.3 平均体重的变化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 EPO对免疫抑制雏鸡免疫功能的影响 |
| 3.2 EPO对免疫抑制雏鸡免疫器官发育的影响 |
| 3.3 EPO对免疫抑制雏鸡生长的影响 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表和完成的学术论文 |
（8）泰山梧桐花多糖对雏鸡的免疫增强作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1. 前言 |
| 1.1 动物免疫增强剂概述 |
| 1.1.1 动物免疫增强剂的概念 |
| 1.1.2 免疫增强剂的分类 |
| 1.1.3 免疫增强剂举例 |
| 1.1.4 影响免疫增强剂作用效果的因素 |
| 1.1.5 免疫增强剂展望 |
| 1.2 中草药免疫增强剂 |
| 1.2.1 中药免疫增强剂概述 |
| 1.2.2 常用中药免疫增强剂 |
| 1.3 梧桐花研究概述 |
| 1.3.1 梧桐的药用价值 |
| 1.3.2 梧桐花成分研究 |
| 1.4 多糖研究概述 |
| 1.4.1 多糖的来源 |
| 1.4.2 多糖的提取与纯化 |
| 1.4.3 多糖的检测 |
| 1.4.4 多糖的免疫学活性 |
| 1.4.5 多糖的发展前景 |
| 1.5 本研究的目的及意义 |
| 2. 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试验动物及生物制剂 |
| 2.1.2 主要化学试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 泰山梧桐花多糖的提取及检测 |
| 2.2.2 泰山梧桐花多糖对鸡脾脏淋巴细胞增殖的影响 |
| 2.2.2.1 泰山梧桐花多糖对雏鸡脾脏淋巴细胞体内增殖的影响 |
| 2.2.2.2 泰山梧桐花多糖对鸡脾脏淋巴细胞体外增殖的影响 |
| 2.2.3 泰山梧桐花多糖对雏鸡的免疫增强作用的研究 |
| 2.2.3.1 白细胞数和淋巴细胞比率的检测 |
| 2.2.3.2 免疫器官指数的检测 |
| 2.2.3.3 血清抗体水平的检测 |
| 2.2.3.4 外周血 T 淋巴细胞转化率的检测 |
| 2.2.3.5 血清中白细胞介素-2（IL-2）的检测 |
| 2.2.3.6 血清中干扰素-γ（IFN-γ）的检测 |
| 2.2.3.7 小肠 SIgA 的检测 |
| 2.2.4 数据处理 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 泰山梧桐花多糖对鸡脾脏淋巴细胞增殖的影响 |
| 3.1.1 泰山梧桐花多糖对雏鸡脾脏淋巴细胞体内增殖的影响 |
| 3.1.2 泰山梧桐花多糖对鸡脾脏淋巴细胞体外增殖的影响 |
| 3.2 泰山梧桐花多唐对雏鸡的免疫增强作用的研究 |
| 3.2.1 白细胞数和淋巴细胞比率的检测 |
| 3.2.2 免疫器官指数的检测 |
| 3.2.3. 血清抗体水平的检测 |
| 3.2.4 外周血 T 淋巴细胞转化率的检测 |
| 3.2.5 血清中干扰素-γ（IFN-γ）的检测 |
| 3.2.6 血清中白细胞介素-2（IL-2）的检测 |
| 3.2.7 小肠 SIgA 的检测 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 泰山梧桐花多糖对雏鸡脾脏淋巴细胞增殖的影响的研究 |
| 4.2 泰山梧桐花多糖对雏鸡的免疫增强作用的研究 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
| 个人简介 |
（10）甘莲玉屏风散对鸡传染性喉气管炎疫苗免疫效果的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩写词表 |
| 1 引言 |
| 1.1 中药免疫增强剂对机体免疫功能的作用机理 |
| 1.2 中药方剂的免疫调节剂研究进展 |
| 1.3 中药多糖及提取物免疫调节剂研究进展 |
| 1.4 玉屏风散的研究概况 |
| 1.4.1 玉屏风散的古代文献概况 |
| 1.4.2 玉屏风散的近代药理学研究进展 |
| 1.5 鸡传染性喉气管炎 |
| 1.5.1 ILTV 的病原学 |
| 1.5.2 流行病学 |
| 1.6 研究目的与意义 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 试验动物 |
| 2.2 试验试剂及药品 |
| 2.3 药物配制 |
| 2.3.1 中药方剂的制备 |
| 2.3.2 试剂配制 |
| 2.4 主要仪器设备 |
| 2.5 试验动物分组与处理 |
| 2.5.1 筛选中药方剂试验动物分组 |
| 2.5.2 甘莲玉屏风散组试验分组 |
| 2.6 血清抗体水平检测 |
| 2.6.1 筛选中药方剂试验动物抗体检测 |
| 2.6.2 甘莲玉屏风散试验动物抗体检测 |
| 2.7 雏鸡免疫器官指数的测定 |
| 2.8 IFN-γ含量的测定 |
| 2.9 IL-4 含量的测定 |
| 2.10 气管、肠道IgA 分泌细胞的检测 |
| 2.10.1 样品的采集处理 |
| 2.10.2 石蜡切片的制作 |
| 2.10.3 SP 染色法检测IgA 分泌细胞 |
| 2.10.4 组织学观察与统计 |
| 2.11 T 淋巴细胞亚群的检测 |
| 2.12 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 不同方剂组对雏鸡ILT 疫苗免疫后血清抗体水平的影响 |
| 3.2 甘莲玉屏风散对雏鸡ILT 疫苗免疫后血清抗体水平的影响 |
| 3.3 甘莲玉屏风散对雏鸡免疫器官指数的影响 |
| 3.3.1 对胸腺指数的影响 |
| 3.3.2 对脾指数的影响 |
| 3.3.3 对法氏囊指数的影响 |
| 3.4 甘莲玉屏风散对IFN-γ含量的影响 |
| 3.5 甘莲玉屏风散对ILT-4 含量的影响 |
| 3.6 甘莲玉屏风散对气管肠管中IgA 分泌细胞的影响 |
| 3.7 甘莲玉屏风散对雏鸡T 淋巴细胞亚群的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 甘莲玉屏风散对雏鸡体内抗体水平的影响 |
| 4.2 甘莲玉屏风散对雏鸡免疫器官指数的影响 |
| 4.3 甘莲玉屏风散对血清中IFN-γ含量的影响 |
| 4.4 甘莲玉屏风散对血清中IL-4 含量的影响 |
| 4.5 甘莲玉屏风散对IgA 分泌细胞的影响 |
| 4.6 甘莲玉屏风散对雏鸡外周血内T 细胞亚群的影响 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在读期间发表学术论文 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
四、中药免疫增强剂对HVT免疫雏鸡免疫器官中免疫活性细胞的影响（论文参考文献）
- [1]“固元颗粒”免疫增强剂研制及其在鸡疫苗免疫中的应用[D]. 王申锋. 吉林大学, 2020(08)
- [2]芪术舌草复方增强淋巴细胞免疫及其抑制AMDV增殖作用的研究[D]. 郜艳雪. 吉林农业大学, 2020(02)
- [3]复方芪术颗粒的研制及其免疫增强作用研究[D]. 张槐. 扬州大学, 2019
- [4]中药免疫增强剂在养鸡生产中的应用研究进展[J]. 魏恒,李娟娟. 山西农业科学, 2018(11)
- [5]中药芪藿糖散的生产工艺、安全性和功效研究[D]. 王洪超. 南京农业大学, 2016(05)
- [6]赤灵芝多糖抗病毒活性和增强免疫作用研究[D]. 张萍. 南京农业大学, 2015(06)
- [7]中药黄酮免疫增强剂藿蜂饮及作用机理研究[D]. 陈晓兰. 南京农业大学, 2014(07)
- [8]泰山梧桐花多糖对雏鸡的免疫增强作用研究[D]. 贺晓华. 山东农业大学, 2013(05)
- [9]鸡免疫增强剂的研究概况[J]. 金仕强,杨丁,左之才,周月华,陈燕凌,刘丽. 湖北畜牧兽医, 2013(01)
- [10]甘莲玉屏风散对鸡传染性喉气管炎疫苗免疫效果的影响[D]. 董立强. 河北农业大学, 2012(08)