一、干预肾素血管紧张素系统对腹主动脉结扎大鼠心房颤动诱发率的影响（论文文献综述）
马征[1]（2021）在《基于ERK1/2与TGF-β1/Smad3通路研究参连复脉颗粒干预高血压心房重构及房颤易感性机制》文中研究表明房颤是临床上常见的心律失常,可引起包括脑卒中在内的多种栓塞性疾病,并诱发、加重心力衰竭,严重威胁了人类健康。目前,房颤的西医治疗以内科药物和射频消融术为主,虽然疗效有了明显提高,但仍存在一定局限。中医从整体观念出发,辨证用药,或可作为临床防治房颤的一个策略。在临床实践中发现以益气活血法为基础,通过加入清热化痰、养心安神等方法治疗房颤有一定疗效,然而由于当前临床研究的样本量、方法、质量水平参差不齐,其有效性尚缺乏准确的判断。Meta分析作为循证医学寻求最佳证据的有力手段,或可为解决这一问题提供思路,因此,本研究拟采用Meta分析的方法,对益气活血法为主治疗房颤的临床疗效及安全性进行探讨。流行病学显示房颤与高血压之间关系密切,高血压心房重构被认为是其发生房颤的重要原因,其中,以心房纤维化为主要特征的心房结构重构是关键环节。目前,仍缺乏针对高血压心房重构的有效药物,中医药研究有可能是解决这一问题的突破口。高血压的中医辨证分型主要有肝阳上亢、痰浊阻滞、气虚血瘀等,发病过程容易出现痰热,而快速性心律失常在气虚血瘀的基础上,痰热证表现较为突出,特别是在如房颤等快速性心律失常的发作期,痰热尤为明显。参连复脉颗粒作为我院心内科治疗心律失常的协定处方,其在益气活血的基础上,注重清心化痰,临床治疗有一定疗效。前期研究发现参连复脉颗粒具有抑制炎症、缩短动作电位时长、降低快速性室性心律失常、减少房颤复发率的作用。相关文献研究亦发现参连复脉颗粒主要组成药物及有效成分可通过抑制TGF-β1通路等作用抑制心房纤维化,减少房颤的发生。本研究通过复制原发性高血压大鼠动物模型,运用小动物超声心动图、心电图、在体心房burst刺激、电生理检查、免疫组化及Western Blot等方法,从整体、组织细胞、分子层面进行研究,以验证“参连复脉颗粒可能通过调节ERK1/2和TGF-β 1/Smad3通路,抑制高血压心房重构和房颤易感性”的假说。目的1.探讨以益气活血法为主治疗房颤的临床疗效和安全性,为房颤的中医药治疗提供循证医学证据。2.探究参连复脉颗粒对高血压心房重构和房颤易感性的干预作用及可能机制。第一部分 益气活血法治疗房颤的Meta分析方法通过计算机检索中国期刊全文数据库（CNKI）,中国生物医学文献数据库（CBM）,维普中文期刊全文数据库（VIP）,万方数据库,以及国外数据库包括PubMed、Web of Science及Cochrane Library。收集公开发表的关于益气活血法为主联合西医常规治疗房颤的随机对照临床实验。用RevMan5.3软件对纳入的文献进行Meta分析,结果通过森林图呈现,敏感性分析评估结果是否稳定,漏斗图分析文献是否存在发表偏倚。结果1.文献检索筛选结果经过文献检索和补充,共检索出712篇文献,排除重复文献215篇,进而浏览标题、,剔除289篇与纳入标准不符的文献,最后进行文献通读,纳入文献17篇。2.纳入文献特征2.1一般资料17篇文献共纳入1639人,其中治疗组828人,对照组811人;17篇文献中有2篇未详细说明治疗组和对照组具体年龄和性别分布情况,其余均详细描述了治疗组和对照组患者的例数、性别、年龄、干预措施和疗程,17篇文献中有3篇文献未明确说明病程情况,其余详细描述了病程;17篇文献均描述治疗组和对照组的一般资料无统计学差异。2.2中药使用情况本研究纳入的文献以益气活血法为基础治法,其中使用频次较高的药物为人参（10次）,黄芪（6次）,丹参（8次）,三七（7次）。2.3不良反应及随访情况纳入的17篇文献中,有4篇明确报道无不良反应;有6篇明确报道出现不良反应,包括有头晕、恶心呕吐、心动过缓等;有7篇未描述是否发生不良反应。3.文献质量评价纳入文献总体质量一般,经改良jadad评分量表评分,有4篇文献2分,6篇文献3分,6篇文献4分,1篇文献6分。纳入的17篇文献均提及“随机”字样,其中13篇采用了正确的随机方法,17篇文献均未描述分配方案隐藏,有1篇文献采用了正确的盲法,2篇文献报告偏倚风险低,17篇文献结果数据均完整、没有其他偏倚来源。4.Meta分析结果Meta分析结果显示,益气活血中药联合常规西药组在临床疗效（RR=1.16,95%CI=[1.08,1.23],Z=4.33,P<0.00001）、中医证候疗效（RR=1.29,95%CI=[1.18,1.41],Z=4.33,P<0.00001）、房颤转复率（RR=1.23,95%CI=[1.04,1.46],Z=2.46,P=0.01）、窦性心律维持（RR=1.31,95%CI=[1.14,1.50],Z=3.80,P=0.0001）、房颤发作次数（SMD=-1.00,95%CI=[-1.73,-0.27],Z=2.67,P=0.008）和安全性评价（RR=0.43,95%CI=[0.28,0.66],Z=3.83,P=0.0001）方面优于常规西药组。结论以益气活血法为主的口服中药联合西药,在改善房颤临床疗效、中医证候疗效、房颤转复率、窦性心律维持及房颤发作次数方面有一定疗效,且安全性较好。但由于纳入的文献质量有限,本次Meta分析结果尚有待大样本、高质量的临床研究证实。第二部分基于ERK1/2与TGF-β1/Smad3通路研究参连复脉颗粒干预高血压心房重构及房颤易感性机制方法1.分组与给药将自发性高血压大鼠随机分为SHR空白组（SHR组）、SHR+氯沙坦钾组（LOS组）、SHR+参连复脉颗粒组（SLFM组）,同时以正常血压京都威斯特大鼠作为正常对照组（WKY组）,共4组。给予相应药物或生理盐水灌胃,共4周。2.检测方法各组大鼠干预4周后记录体重、血压、心率、死亡情况;利用小动物超声心动图检测左心房及左心室的结构和功能;利用心电图检测P波时限、PR间期;利用多导生理记录仪检测心房有效不应期,利用在体心房burst刺激检测房颤易感性;利用H&E染色、Masson染色及免疫组化检测心房心肌细胞肥大、心房间质纤维化情况;利用ELISA、Rt-qPCR及Western Blot技术检测ERK1/2与TGF-β1/Smad3通路相关基因及蛋白表达水平。结果1.模型评价:（1）与WKY组相比,SHR组体重较轻,收缩压和舒张压均明显升高（P<0.05）;（2）与WKY组相比,SHR组左室壁增厚、左室内径缩小、左心房扩大、左心房总射血分数降低、标化左心房重量及标化全心重量增加（P<0.05）;（3）与WKY组相比,SHR组P波时限、PR间期、房颤诱发持续时间增加（P<0.05）;（4）与WKY组相比,SHR组心房心肌细胞肥大、胶原蛋白I和胶原蛋白Ⅲ表达增高,胶原纤维容积分数升高（P<0.05）;（5）与WKY组相比,SHR组心肌纤维化相关因子表达异常,表现为 ERK1/2 通路相关因子 AngⅡ、AT1R、p-ERK1/2 显着升高（P<0.05）,而 TGF-β1/Smad3通路相关因子 Galectin-3、TGF-β1、p-Smad3、MMP-3 升高（P<0.05）,TIMP-3 降低（P<0.05）。2.参连复脉颗粒对心脏结构和功能的作用:SLFM组与SHR组相比,左心房内径、左心房最大容积显着缩小（P<0.05）,其余指标均无明显差异;LOS组与SHR组相比,舒张期左室前壁厚度、左房内径显着缩小（P<0.05）,左心房最大容积有缩小的趋势,但差异没有统计学意义,其余指标均无明显差异。3.参连复脉颗粒对心房电生理及房颤诱发率的作用:SLFM组与SHR组相比,P波时限、房颤诱发持续时间显着降低（P<0.05）,房颤诱发率有降低的趋势,但差异没有统计学意义,其余指标均无明显差异;LOS组与SHR组相比,P波时间、PR间期、房颤诱发持续时间显着降低（P<0.05）,房颤诱发率有降低的趋势,但差异没有统计学意义,其余指标均无明显差异。4.参连复脉颗粒对心房心肌细胞肥大及心房间质纤维化的作用:与SHR组相比,SLFM组与LOS组心房心肌细胞肥大有所抑制,胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ表达有所减少,纤维容积分数明显减少（P<0.05）。5.参连复脉颗粒对心房ERK1/2及TGF-β1/Smad3通路相关因子表达的作用:与SHR组相比,SLFM 组与 LOS 组心房 AT1R、p-ERK1/2/t-ERK1/2 显着降低（P<0.05）;SLFM组与 LOS 组心房 Galectin-3、TGF-β1、p-Smad3、t-Smad3、MMP-3、MMP-3/TIMP-3 显着降低（P<0.05）,TIMP-3 明显升高（P<0.05）。结论1.参连复脉颗粒能改善自发性高血压大鼠心房结构重构,对心房电重构及房颤易感性有一定抑制作用。2.参连复脉颗粒改善自发性高血压大鼠心房结构重构的机制可能和调控ERK1/2及TGF-β1/Smad3信号通路有关。
李鹤[2]（2021）在《基于IL-10/STAT3通路探讨益气温阳方对压力负荷心衰大鼠心脏功能的影响》文中提出目的:心力衰竭（heartfailure,HF）是一个全球性的健康问题,心脏重构是心力衰竭重要的病理生理改变。本研究旨在探讨益气温阳方对压力负荷诱导的心力衰竭大鼠心脏功能的影响,并从炎症、纤维化及细胞凋亡等方面探讨其改善心脏重构的可能机制。方法:我们选择30只雄性wistar大鼠,适应性饲养1周,随机选取5只雄性wistar大鼠作为假手术组（n=5）,手术时只分离动脉不造成动脉狭窄,术后给予普通饲料喂养;其余大鼠采用微创主动脉弓缩窄法（MTAC）制备压力负荷诱导的心力衰竭witar大鼠模型,4周后通过心脏超声检测相关参数,确认造模成功后将大鼠随机分为模型组（MTAC）（n=5）、益气温阳方低剂量组（n=5）、益气温阳方高剂量组（n=5）。益气温阳方中的药物经过浸泡、煮沸、煎煮,最后运用中药旋蒸仪进行浓缩而制备完成。益气温阳方低剂量组给予益气温阳方3.6g/Kg/d灌胃给药,益气温阳方高剂量组给予益气温阳方18g/Kg/d灌胃给药,各组均干预16周,16周后应用超声心动图测定左室射血分数（LVEF）和左室缩短率（LVFS）,以评价益气温阳方对心功能的影响。在第16周采取wistar大鼠腹主动脉血液后,处死大鼠并留取心肌组织。通过Masson染色、Sirius染色、免疫组化测定心肌组织Collagen I、TGF-β、CTGF 的表达,运用 Western blot 检测 Collagen I、TGF-β、CTGF 蛋白表达水平,以评价益气温阳方对心肌纤维化的影响。通过TUNEL染色、Western blot检测心肌组织Bax、Bcl-2、Caspase-3、PARP蛋白表达水平,以评价益气温阳对心肌细胞凋亡的影响。通过ELISA法测定血清及心肌组织中IL-10、TNF-α表达水平,以评价益气温阳方对炎症因子的影响。通过免疫组化检测心肌组织CD68表达、Western blot检测IL-10、TNF-α、STAT3（P-STAT3）、P65（P-P65）表达水平,以评价益气温阳方对相关信号通路的影响。结果:（1）经过MTAC制备压力负荷诱导的心力衰竭大鼠模型后,心脏超声检查发现,与造模前相比,造模后的wistar大鼠心肌收缩功能较造模前明显减弱,左室射血分数明显下降,差异有统计学差异（p<0.05）,提示造模成功。（2）与假手术组比较,MTAC组LVEF、LVFS显着下降,差异具有统计学意义（p<0.01）;益气温阳方干预16周后,与MTAC组比较,益气温阳方低剂量组和高剂组LVEF显着升高,差异具有统计学意义（P<0.01）;益气温阳方低剂量组LVFS明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）,益气温阳方高剂量组LVFS显着升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。（3）经过Masson染色和Sirius染色,与假手术组相比,MTAC组心肌纤维化占比显着增高,且差异具有统计学意义（P<0.01）。经益气温阳方干预后,益气温阳方低剂量组、高剂量组心肌纤维化面积占比明显减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。免疫组化检测心肌组织显示,与假手术组比较,MTAC组中Collagen I、TGF-β、CTGF表达增加,而经益气温阳方干预后,低剂量组和高剂量组中Collagen I、TGF-β、CTGF表达明显减少。Western blot检测心肌组织,MTAC组中Collagen I、TGF-β、CTGF的蛋白表达高于假手术组,而经益气温阳方干预后,低剂量组和高剂量组明显下调CollagenI、TGF-β、CTGF蛋白表达。（4）经TUNEL染色,MTAC组心肌细胞凋亡明显,而益气温阳方低剂量组、高剂量组均抑制心肌细胞凋亡。Western blot检测后,益气温阳方可降低MTAC大鼠心肌组织凋亡信号蛋白Bax、Caspase-3和PARP的表达,升高Bcl-2的表达。（5）ELISA法测定血清IL-10、TNF-α表达水平后,与假手术组比较,MTAC组中IL-10的水平显着下降,TNF-α显着升高,差异具有统计学意义（P<0.01）;与MTAC组比较,益气温阳方低剂量组TNF-α明显下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;与MTAC组比较,益气温阳方高剂量组IL-10水平显着增加,TNF-α显着下降,差异具有统计学意义（P<0.01）。心肌组织中IL-10、TNF-α的检测结果显示:与假手术组比较,MTAC组中IL-10表达水平显着下降,TNF-α水平显着升高,差异具有统计学意义（P<0.01）;与MTAC组比较,益气温阳方高剂量组IL-10表达水平显着上升,差异具有统计学意义（P<0.01）;TNF-α表达水平明显下降,差异具有统计学意义（P<0.05）。（6）心肌组织检测CD68表达,与假手术组比较,MTAC组心肌组织中CD68表达显着增加,与MTAC组比较,益气温阳方低剂量组和高剂量组CD68的表达明显减少。Western blot检测心肌组织相关炎症通路,与假手术组相比,MTAC组大鼠心肌组织中IL-10、STAT3蛋白表达明显降低,P65、TNF-α蛋白表达明显升高;与MTAC组相比,益气温阳方低剂量组、高剂量组IL-10、STAT3蛋白表达明显升高,P65、TNF-α蛋白表达明显降低。结论:益气温阳方能减轻压力负荷诱导的心力衰竭大鼠心肌炎症、纤维化、细胞凋亡,抑制心室重塑,保护心脏功能。其机制可能与激活IL-10/STAT3信号通路,改善心肌重塑有关。
崔如意[3]（2020）在《人参醇提物治疗慢性心力衰竭药效评价及作用机制研究》文中指出1 背景慢性心力衰竭是各种心脏病的终末和严重阶段,是当今世界常见的慢性心血管疾病,有资料显示心衰住院患者5年死亡率达到50%,对人类社会造成了极大的影响。人参是常见的补气药,可用于调整血压、恢复心脏功能及身体虚弱等。课题组前期运用整合药理学以及分子对接等技术,发现人参补气功效可能与干预人体能量代谢相关途径有关,而慢性心衰也与人体能量代谢过程有着密切的关系。基于以上思考,本研究从人参治疗慢性心衰的药效学评价以及分子机制入手进行研究,为人参的临床应用以及慢性心衰的分子机制研究提供了一定的理论基础和依据。2研究内容及结果2.1人参治疗慢性心衰药效学评价本部分内容使用了冠状动脉左前降支结扎心梗致心衰模型进行药效学评价。根据该模型的特点,冠状动脉左前降支结扎致心梗后发展为慢性心衰时间大约为4周,因此造模之后,对大鼠正常喂养4周,之后采用Vevo2100超高分辨率小动物彩色超声多普勒成像系统对大鼠心功能进行检测,依据大鼠左心室射血分数（EF%）选取成模大鼠进行后续实验。成模后对大鼠随机进行分组,分为人参组,阳性药（缬沙坦）组,假手术组,模型组以及生理盐水组共5组。每给药2周进行一次超声检测,主要考查左心室射血分数（EF%）,左心室短轴缩短率（FS%）,左心室后壁舒张末期厚度（LVPWd）,左心室后壁收缩末期厚度（LVPWs）,左心室舒张末期内径（LVIDd）,左心室收缩末期内径（LVIDs）,收缩期室间隔厚度（IVSs）和舒张期室间隔厚度（IVSd）等指标的变化来初步评价药效,随后又采用心室压力容积测定系统对大鼠的心功能进行进一步检测,之后采用酶联免疫方法（ELISA）对衡量心力衰竭常用指标脑钠肽（BNP）进行了检测,并结合病理切片HE的变化情况来评价药效。直至给药6周后,对大鼠进行取材。大鼠造模后4周,超声检测显示大鼠EF%显着下降。将动物随机分为模型组,人参组,缬沙坦组,假手术组以及生理盐水组。每给药2周进行一次超声检测,到给药6周时进行取材。人参组大鼠以及缬沙坦组大鼠左心室射血分数（EF%）,左心室短轴缩短率（FS%）,左心室后壁舒张末期厚度（LVPWd）,左心室后壁收缩末期厚度（LVPWs）,收缩期室间隔厚度（IVSs）和舒张期室间隔厚度（IVSd）与模型组大鼠相比明显升高;人参组大鼠以及缬沙坦组大鼠左心室舒张末期内径（LVIDd）,左心室收缩末期内径（LVIDs）与模型组大鼠相比明显降低;心室压力-容量检测显示在经过给药之后,大鼠的左心室射血分数（EF%）显着提高;对于衡量心力衰竭的常用指标脑钠肽（BNP）,给药之后呈一定的降低趋势;病理切片HE结果显示人参组以及缬沙坦组大鼠相比模型组大鼠心肌组织以及心功能均得到提升。提示人参可以在一定程度上保护心脏,缓解心衰。2.2人参治疗慢性心衰分子机制研究本部分根据前期实验及文献调研结果,选取人参组、模型组与假手术组样本中具有代表性的左心室样本对mRNA进行RNA-seq二代测序即转录组测序。筛选了 3组之间的差异表达基因,并对差异表达基因进行通路富集分析,并且对相关差异基因在左心室样本中的表达情况进行检测来初步探索人参治疗慢性心衰可能作用机制。本部分运用转录组学技术对造模后以及给药后差异表达基因进行了分析。根据差异基因筛选标准即 false discovery rate FDR<0.05,|Fold change|>1.5 筛选出差异基因后,对差异基因进行KEGG通路富集分析。给与人参提取液后,可以看到 Ndufa4、Atp5pd、Atp5mc3、Atp5fla、Sdhb、Cox10 等参与氧化磷酸化过程的基因;Echs1、Acs16、Acsl1、Acox1等参与脂肪酸代谢的基因;Acad1、Acs16、Acsl1、Acox1等参与PPAR signaling pathway的基因在给药之后出现一定程度的回调,说明人参可能通过干预能量代谢相关途径对心衰发挥干预作用。之后对筛选出的人参给药之后上调的400个差异基因所富集出的相关通路进行深入地分析,得到给药后上调基因共富集出30条KEGG通路。包括:三羧酸循环,氧化磷酸化,丙酸酯代谢,丙酮酸代谢,脂肪酸生物合成,碳代谢,脂肪酸降解,脂肪酸代谢,赖氨酸降解以及PPAR信号通路等通路,而人参给药之后下调的327个差异基因所富集出的相关通路进行深入地分析,得到给药后下调基因共富集出23条KEGG通路。包括:细胞因子-细胞因子受体,Ras信号通路,NF-κB信号通路,金黄色葡萄球菌感染,趋化因子信号通路等。本研究结果在一定程度说明,人参可以通过增强体内能量代谢相关过程,同时下调部分炎症相关因子对心衰发挥作用。对差异基因PPAR α及其下游因子Acox和Acsl1的检测结果也进一步说明人参可以增强体内能量代谢相关过程。本研究结果在一定程度说明,人参可能通过增强体内能量代谢相关过程对心衰发挥作用。2.3人参干预慢性心衰机制体外研究本部分根据转录组结果以及文献调研结果,对富集出的关键通路及通路之间的相互关系进行分析,结合文献调研结果筛选出关键转录因子进行体外实验研究。在人参中,已有多种皂苷被证明可以对慢性心衰发挥治疗作用,为了进一步确认人参中治疗慢性心衰的是否为人参皂苷部分,且人参醇提物中的主要成分也是人参皂苷,因此我们对人参提取液中的总皂苷进行提取。选用心肌H9c2细胞为研究对象,分别给与人参提取液、人参提取液中萃取得到的人参总皂苷之后,观察关键转录因子的变化情况。对人参干预心衰的作用,在动物实验基础上进一步进行体外实验研究。根据转录组结果以及文献调研结果,人参可能通过影响能量代谢过程发挥对心衰的治疗作用。富集到的能量代谢通路中,脂代谢通路为一些能量代谢通路的上游,而PPARα为脂代谢中PPAR通路的关键因子,因此我们选择了 PPARα作为关键转录因子进行研究,在细胞中加入人参提取液,人参总皂苷之后,检测PPARα的表达情况。结果表明,正常细胞加药给与人参提取液,人参总皂苷之后,随着给药时间的增加,PPAR α基因表达水平有不同程度升高。3结论本研究证明,人参可在一定程度上改善冠状动脉左前降支结扎心梗致慢性心衰的疾病以及发展过程,具有一定程度的改善心功能作用。运用转录组学技术,对3组之间差异表达的基因进行分析得到,人参给药后可能对PPAR信号通路,三羧酸循环,脂肪酸代谢起到一定的调控作用,在一定程度说明人参发挥对心衰的治疗作用可能的机制为干预人体的能量代谢相关过程来实现。结合转录组学以及文献调研结果,选取能量代谢通路关键转录因子PPARα进行细胞水平研究发现,给与正常培养H9c2心肌细胞人参提取液,人参总皂苷之后,可以使PPAR α基因表达情况出现一定程度上调,进一步证明,人参干预心衰可能与能量代谢过程相关,并且可能是通过干预PPAR通路实现对心衰的治疗作用。
金圣博[4]（2020）在《基于Toll样受体信号介导炎症反应探讨温针灸对自发性高血压大鼠的抗炎机制》文中指出目的:本实验以自发性高血压大鼠为动物模型,在“从脾论治”高血压病的理论指导下,探寻温针灸足三里穴对自发性高血压大鼠降压机制,同时通过Toll受体信号通路（TLR4/My D88/NF-κB）介导下游炎症反应,从而探讨温针灸对自发性高血压大鼠抗炎机制及内皮细胞保护作用机制,为高血压病中医药临床防治提供可靠的基础理论依据。材料与方法:将10只雄性京都种大鼠（WKY）纳入空白组,依照随机数字表格法将40只雄性自发性高血压大鼠（SHR）随机分至模型组、温针灸组、针刺组、艾灸组,每组10只。常规饲料适应性喂养一周,采用智能无创血压计测量各组大鼠尾动脉血压,测量3次取平均值。开始实验,予正常组和模型组大鼠单纯固定20min,日一次,不予针灸干预;予温针灸组大鼠温针灸双侧足三里穴20min;予针刺组大鼠针刺双侧足三里穴20min;予艾灸组大鼠艾灸双侧足三里穴20min,日一次,连续治疗15天,同时测量实验开始后的第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21天上午9点～11点的各组大鼠血压,连续测量3次取平均值,录入Excel并待统计。治疗结束,予各组大鼠水合氯醛（10%）腹腔麻醉,固定、脱毛、消毒,沿腹中线开腹,暴露腹主动脉并迅速采血,将血液离心后取上清液放入无菌EP管中冻存备用,采用ELISA法检测血清炎症因子IL-6、IFN-β、TNF-α含量;血清免疫指标Ig A、Ig M、Ig G含量;血管收缩因子Ang-Ⅱ、ET-1、VEGF含量。取一段完整的腹主动脉1cm,漂洗后用4%多聚甲醛溶液固定,HE染色法进行修块、包埋、制片,荧光显微镜下观察腹主动脉壁病理形态学变化。探查腹部,迅速取脾脏组织50mg放入EP管中冻存备用,HE染色法将固定好的大鼠脾脏组织修块、包埋、制片,荧光显微镜下观察脾脏组织病理学改变及炎性细胞浸润状态;采用Western Blot法,取脾脏组织50mg,研磨、离心,吸取上清液,提取脾脏组织蛋白质,使用BCA检测法测定蛋白质浓度,通过Image J软件计算灰带条图片灰度值,定量分析出各组TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达量及NF-κB p65蛋白磷酸化水平;取脾脏组织100mg,提取大鼠脾脏组织m RNA,采用q PCR法,通过逆转录反应、PCR扩增反应,导出q PCR数据并计算分析出TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA的表达水平。实验相关数据使用SPSS 22.0软件进行统计学分析。实验结果以均数±标准差（x±s）表示;组间数据差异比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）,以P<0.05表示具有统计学差异。结果:1.各组大鼠治疗前后血压变化:实验第2天温针灸组、针刺组血压开始逐渐下降,实验第7天血压开始显着下降,温针灸组下降幅度大于针刺组;实验第15天实验干预结束,血压降幅明显程度依次为温针灸组、针刺组、艾灸组;实验干预结束后继续测量血压至第21天发现,温针灸组与艾灸组血压较为平稳,无明显浮动,而针刺组、模型组、正常组血压均有不同程度上浮,其中针刺组血压上升幅度较为明显。2.各组大鼠脾脏动脉周围淋巴鞘及淋巴细胞分布情况:正常组与温针灸组白髓面积相对较大,动脉周围淋巴鞘组织较厚,可清晰观察到鞘内侧淋巴小结,鞘外侧分布大量且密集的淋巴细胞;而模型组、针刺组和艾灸组白髓和脾小结所占面积均有不同程度缩小,动脉周围淋巴鞘显着缩小,鞘周围淋巴细胞分布也较为稀少,其中以模型组缩小程度最为明显。3.各组大鼠血清炎症因子IL-6、IFN-β、TNF-α含量分析:与正常组比较,模型组、针刺组、艾灸组IL-6、TNF-α含量显着升高,IFN-β含量显着降低;温针灸组TNF-α含量显着升高,IFN-β含量显着降低。与模型组比较,温针灸组IL-6、TNF-α含量显着降低、IFN-β含量显着升高;针刺组TNF-α含量显着降低,艾灸组IFN-β含量显着升高。与温针灸组比较,针刺组与艾灸组IL-6、TNF-α含量显着升高,IFN-β含量显着降低。与针刺组比较,艾灸组TNF-α含量显着升高。以上差异皆具有统计学意义（P<0.05）。4.血压异常与免疫炎症状态之间存在密切关联且相互影响:大鼠收缩压、舒张压与IL-6、TNF-α含量之间呈正相关,与IFN-β含量之间呈负相关,说明随着大鼠血压值的升高,血清内IL-6、TNF-α含量也随之增加,加快血清炎症因子的表达,而IFN-β含量随之降低。5.Toll样受体信号通路（TLR4/My D88/NF-κB）中的各信号分子蛋白表达及NF-κB p65磷酸化水平:与正常组比较,模型组、针刺组TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高,温针灸组只有TLR4蛋白表达和NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高,而艾灸组TLR4、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高;与模型组相比,温针灸组TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着降低;与温针灸组比较,针刺组TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高,而艾灸组TLR4、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高。以上差异皆具有统计学意义（P<0.05）。6.Toll样受体信号通路（TLR4/My D88/NF-κB）中的各信号分子基因表达情况:与正常组比较,模型组、针刺组、艾灸组大鼠脾脏组织TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA表达水平显着升高,温针灸组TLR4、My D88表达水平显着升高;与模型组比较,温针灸组大鼠脾脏组织TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA表达水平显着降低,针刺组TLR4表达水平有所降低,而艾灸组TLR4、My D88 m RNA表达水平下降;与温针灸组比较,针刺组和艾灸组大鼠脾脏组织TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA表达水平显着升高。以上差异皆具有统计学意义（P<0.05）。7.各组腹主动脉壁HE染色结果分析:正常组主动脉壁内膜光滑完整,各层细胞排列有序,内皮细胞未见脱落、增生,中膜平滑肌细胞及弹性纤维紧密排列有序;模型组腹主动脉壁内膜明显增生、增厚、凸起,内皮细胞存在脱落情况,中膜平滑肌层排列混乱,有增生、肥大,部分区域出现变形、萎缩,弹性纤维间隔参差不齐,偶有断裂、皱褶现象,外膜细胞欠平整,偶有脱落情况;温针灸组腹主动脉壁内膜略粗糙,少许内皮细胞脱落,中膜平滑肌细胞排列偶有弯曲、褶皱,弹性纤维间隙大致均匀,部分出现缩小现象;针刺组大鼠腹主动脉壁内膜粗糙、欠平整,内皮细胞存在脱落现象,中膜平滑肌细胞增生、肥大、排列紊乱,弹性纤维出现褶皱、变形,间隙欠均匀,部分外膜出现突起、变形及细胞脱落现象;艾灸组大鼠腹主动脉壁内膜褶皱、变形,内皮细胞有脱落现象,中膜平滑肌细胞部分萎缩、减少,排列欠整齐,弹性纤维间隙不均匀,外膜欠光滑,偶有增生现象。8.各组血清免疫学指标比较:与正常组比较,模型组和艾灸组血清Ig A、Ig G含量显着降低,血清Ig M含量显着升高,而针刺组血清Ig A含量显着降低;与模型组比较,温针灸组血清Ig A、Ig G含量显着升高,艾灸组血清Ig G含量显着降低;与温针灸组比较,针刺组血清Ig A含量显着降低,艾灸组血清Ig A、Ig G含量显着降低;与针刺组比较,艾灸组血清Ig G含量显着降低。以上差异皆具有统计学意义（P<0.05）。9.各组血清AngⅡ、ET-1、VEGF含量比较:与正常组比较,模型组、艾灸组血清AngⅡ、ET-1、VEGF含量显着升高,温针灸组血清ET-1含量显着升高,针刺组血清AngⅡ、ET-1含量显着升高;与模型组比较,温针灸组AngⅡ、ET-1、VEGF含量显着降低,针刺组ET-1、VEGF含量显着降低,艾灸组ET-1含量显着降低;与温针灸组比较,针刺组ET-1含量显着增高,艾灸组AngⅡ、ET-1、VEGF含量显着增高,以上差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:1温针灸足三里可显着降低自发性高血压大鼠血压,疗效平稳、持久。2血压异常与免疫炎症状态之间存在密切关联且相互影响;温针灸足三里穴可显着改善自发性高血压大鼠体内存在的炎症状态。3温针灸足三里穴可通过抑制大鼠脾组织Toll样受体信号通路中TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白及m RNA表达调控信号传导。4温针灸足三里穴可通过调控TLR4/My D88/NF-κB信号通路,减轻血清炎症状态,提高血清抗炎能力,良性调控血管舒缩功能,从而降低炎性损伤程度,发挥对内皮细胞的保护作用。
周桢[5]（2019）在《强心方治疗舒张性心力衰竭患者的临床疗效观察及乙酰化去甲乌药碱干预心肌纤维化与心肌肥厚的实验研究》文中研究表明第一部分临床研究目的:评价强心方对于舒张性心衰（心肾阳虚证）患者的临床疗效和安全性。方法:纳入上海市中医医院心病科住院部2017年7月1日至2018年11月1日收治的符合中医辨证分型“心肾阳虚”证,且西医诊断为舒张性心力衰竭（心功能Ⅱ-Ⅲ级）的患者,随机分入对照组或治疗组。对照组予培哚普利片4mg,口服,每天一次+琥珀酸美托洛尔缓释片47.5mg,口服,每天一次,若患者出现明显水钠储溜症状时,则加用呋塞米片20mg,每天一次,口服+螺内酯片20mg,每天一次,口服;治疗组在对照组的治疗基础上,加用强心方（附子6g、肉桂6g、桂枝12g、补骨脂30g、丹参30g、桃仁15g、红花6g、白芍12g、灵芝30g、玉竹18g、泽泻30g、大腹皮30g）,每日400ml,分两次早晚餐后温服,疗程为4周。在第0、2、4周对两组患者的疗效相关数据进行记录,包括心功能分级、LEE氏心衰体征评分、中医症状体征量化积分、NT-proBNP、超声心动图、心率血压、心率变异性等,并每天观察有无安全性事件发生。数据采用SPSS 21.0整理并分析。结果:两组共纳入142例患者,对照组脱落8例,治疗组脱落4例,共计脱落12例,最后完成研究130例。两组患者基线数据具有可比性。心功能分级方面,治疗4周后对照组有心功能Ⅰ级22例（35.9%）,心功能Ⅱ级28例（44.4%）,心功能Ⅲ级13例（20.6%）,心功能Ⅳ级0例（0%）;治疗组有心功能Ⅰ级32（47.8%）,心功能Ⅱ级26例（38.8%）,心功能Ⅲ级9例（13.4%）,心功能Ⅳ级0例（0%）,两组在治疗4周后的心功能分级分布情况无统计学差异（P>0.05）。疗效上,对照组有效35例（55.6%）,无效28例（44.4%）,加重0例（0%）;治疗组有效36例（53.7%）,无效31例（46.3%）,加重0例（0%）,两组治疗4周后的心功能疗效无统计学差异（P>0.05）。LEE氏心衰体征评分方面,在治疗4周时,治疗组相比对照组较低（P<0.05）,组内时间点比较上,对照组在治疗4周后比治疗前下降（P<0.05）;治疗组在治疗2周后比治疗前显着下降（P<0.001）。疗效上,对照组显效6例（9.5%）,有效26例（41.3%）,无效31例（49.2%）,加重0例（0%）;治疗组显效6例（9.0%）,有效45例（67.2%）,无效16例（23.9%）,加重0例（0%）,两组治疗4周后的LEE氏心衰体征疗效在分布上具有统计学差异（P<0.05）。中医症状体征分级量化积分方面,治疗4周时,两组中医症状体征分级量化积分总分的比较具有显着统计学差异（P<0.001）,差值为6.190（95%置信区间:3.602-8.779）,组内时间点比较上,对照组与治疗组中医症状体征分级量化积分均随着疗程的推移而逐步明显下降（P<0.001）。各症状体征中,治疗组在“心悸”、“腹胀”、“气短”、“畏寒”、“胸闷”的评分低于对照组（P<0.05）。疗效评价上,对照组显效1例（1.6%）,有效37例（58.7%）,无效17例（27.0%）,加重7例（11.1%）;治疗组显效15例（22.4%）,有效31例（46.3%）,16例（23.9%）,6例（9.0%）,两组治疗4周后的中医症状体征疗效在分布上具有统计学差异（P<0.05）。NT-proBNP方面,两组间没有统计学差异（P>0.05）,但两组组内NT-proBNP都随着疗程的推进而逐渐有所下降（P<0.05）。超声心动图方面,LVEDD、LVESD、LAD、LVEF、E/A在治疗过程中的两组组间都没有统计学差异（P>0.05）,其中两组组内LVEDD、E/A在治疗4周后均有下降（P<0.05）。组织多普勒成像中,治疗4周时,两组e’的比较具有显着统计学差异（P<0.001）,治疗组相比对照组较高,且治疗组组内e’随着疗程的推进而逐渐显着下降（P<0.001）。两组组间E/e’存在统计学差异（P<0.05）。自主神经功能相关指标方面,首先在治疗2周与治疗4周时,两组心率的比较均有显着统计学差异（P<0.001）。而在血压上,两组组间收缩压和舒张压在治疗过程中均无统计学差异（P>0.05）,组内血压均随着疗程推移而显着下降（P<0.001）。其次在心率变异性指标中,治疗2周与治疗4周时,两组SDNN的比较具统计学差异（P<0.05）,且两组SDNN均随疗程的推移而显着上调（P<0.001）。治疗2周与治疗4周时,两组SDANN的比较具有统计学差异（P<0.05）,治疗组相比对照组升高,且两组组内在治疗4周时SDANN均较治疗前上升（P<0.05）。两组组间rMSSD的比较有显着统计学差异（P<0.001）。治疗4周时,两组pNN50的比较具有显着统计学差异（P<0.001）,治疗组高于对照组,且两组组内pNN50随着疗程的推移逐渐上升（P<0.001）。两组TP在组间及时间点上均无统计学差异（P>0.05）。安全性评价方面,对照组出现不良反应5例,不良反应率7.0%,其中下肢出现水肿2例,自觉胸闷1例和血压偏低2例;治疗组出现不良反应3例,不良反应率4.2%,3例均为腹泻,两组患者不良反应病症均属轻微。另外,两组在治疗前后的血常规、肝肾功能电解质等指标上的变化均在正常值范围内,未见明显异常改变。结论:1、强心方可以改善舒张性心衰患者的心衰体征。2、强心方可以改善舒张性心衰患者的中医临床症状体征。3、强心方可以改善舒张性心衰患者的左室舒张功能。4、强心方可以增加舒张性心衰患者的副交感神经功能活动。5、强心方可能会引起部分患者的轻微腹泻反应,整体安全性较高。第二部分实验研究目的:评价乙酰化去甲乌药碱（Acetyl-Higenamine,AH）对于心肌纤维化和心肌肥厚的干预作用及其相关机制。方法:实验一:乙酰化去甲乌药碱（AH）对心肌纤维化及心肌肥厚的影响作用的体外研究。先取原代乳鼠心肌成纤维细胞,用TGF-β（10ng/ml）诱导其纤维化反应激活,通过检测成纤维细胞纤维化的标志性表型变化蛋白α-SMA及其基因来评价乙酰化去甲乌药碱对于心肌纤维化的影响作用,并且将AH分为0.1、0.3、1、3uM等浓度梯度探索其适宜的工作浓度,再通过检测其他纤维化相关蛋白基因及划痕实验来进一步证实AH对于心肌纤维化的作用。接着取原代乳鼠心肌细胞,用苯肾上腺素（100uM）诱导其肥大,通过免疫染色来观察AH对于心肌肥大的影响作用。实验二:不同剂量乙酰化去甲乌药碱（AH）对异丙肾上腺素（isoprenaline,iso）诱导的小鼠心肌纤维化与病理性肥厚影响作用的体内研究。60只SPF级8周龄雌性c57BL/6小鼠,随机平均分为空白组、iso模型对照组、iso+AH低剂量组、iso+AH中剂量组、iso+AH高剂量组和iso+去甲乌药碱阳性药物对照（Hige）组。除空白组外,其余每组都接受iso诱导的心肌肥厚造模（皮下注射30mg/kg/d/只）,iso建模同时,AH加载组根据剂量低中高分别进行AH腹腔注射1、3、10mg/kg/d/只的处理,Hige加载组作为阳性药物对照组,予腹腔注射10mg/kg/d/只,连续21天。第22天检测心超后取材,进行病理染色及心肌肥厚、纤维化相关蛋白基因检测。实验三:经口服的乙酰化去甲乌药碱（AH）对iso诱导的小鼠心肌纤维化与病理性肥厚影响作用的体内研究。40只SPF级8周龄雌性c57BL/6小鼠,随机平均分为空白组、AH组、iso模型对照组和iso+AH组。除空白组外,其余每组都接受iso诱导的心肌肥厚造模（皮下注射30mg/kg/d/只）,iso建模同时,AH加载组予灌胃20mg/kg/d/只,连续35天后取材,进行病理染色及心肌肥厚、纤维化相关蛋白基因检测。实验四:乙酰化去甲乌药碱对TGF-β诱导的原代心肌细胞纤维化影响的作用机制的体外研究。取原代乳鼠心肌成纤维细胞,用TGF-β（10ng/ml）诱导成纤维细胞纤维化,检测TGF-β的经典Smad信号通路相关磷酸化或非磷酸化蛋白和基因表达,探索AH对于Smad经典信号通路的影响作用,然后通过使用β受体抑制剂来探索AH是否具有与去甲乌药碱相类似的上游信号靶点。结果:实验一:当AH加载组浓度大于1uM时,经TGF-β诱导的原代成纤维细胞中纤维化反应的标志性表型蛋白α-SMA及其基因的表达较TGF-β模型对照组下降（P<0.05）。并测算得出AH的半数抑制α-SMA的工作浓度大约为2uM。其他纤维化相关基因检测中,AH也可以抑制原代成纤维细胞中由TGF-β诱导的胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、纤连蛋白、转胶蛋白、骨桥蛋白、肌球蛋白、肌钙蛋白的基因的升高（P<0.05）。划痕实验中,AH可以减缓原代成纤维细胞经TGF-β诱导的细胞迁移加快（P<0.05）。另外,AH还可以抑制PE诱导的原代心肌细胞肥大（P<0.05）。实验二:各组小鼠心超结果显示,AH高剂量加载组及Hige 阳性药物对照组LVEDV 相比iso组有所下降（P<0.05）,分别为 0.13±0.02、0.16±0.02（ml）,平均差值分别为 0.072±0.016（ml）（95%置信区间:0.040-0.103）与 0.045±0.013（ml）（95%置信区间:0.018-0.072）;AH高剂量加载组LVESV相比iso组有所下降（P<0.05）,平均值为 0.07±0.01（ml）,平均差值 0.027±0.012（ml）（95%置信区间:0.002-0.052）;AH高剂量加载组LVIDd相比iso组显着下降（P<0.001）,平均值为 3.76±0.22（mm）,平均差值0.635±0.141（mm）（95%置信区间:0.344-0.926）,Hige 阳性药物对照组相比iso组有所下降（P<0.05）,为4.03±0.31（mm）,平均差值 0.373±0.121（mm）（95%置信区间:0.125-0.620）。在心超波形图中,随着AH加载组的药物剂量上升,心脏的收缩及舒张功能逐渐上升,相比阳性药物Hige组,AH高剂量加载组的波形间隔距离变化得更为明显。心超瞬时图像中,iso组小鼠心脏因心肌肥大探及不到左室乳头肌,而AH高剂量加载组和阳性药物Hige组可以探及。生存率方面,iso组小鼠在实验的第7和第9天分别死亡一只,AH低剂量加载组在实验的第9及第13天分别死亡一只,AH中剂量加载组在实验的第14天死亡一只,但各组生存时间之间无统计学差异（P>0.05）。在心脏取材方面,AH加载组为高剂量（10mg/kg）时,HW/BW相较iso组出现统计学差异的下降（P<0.05）,而HW/TL出现显着统计学差异的下降（P<0.001）,这与Hige 阳性药物组的结果相同,并且AH中剂量加载组HW/TL也比iso组有所下降（P<0.05）。胚胎蛋白表达方面,AH中、高剂量加载组以及Hige 阳性药物组Nppa均相比iso组较低（P<0.05）,各药物干预组Nppb仅AH高剂量组较iso组降低（P<0.05）,AH高剂量加载组和Hige 阳性药物组β-MHC均相比iso组较低（P<0.05）。纤维染色方面,在masson染色中,AH中、高剂量加载组的纤维染色面积相比iso组均显着减小（P<0.001）,Hige 阳性药物组比iso组均则有所降低（P<0.05）;在天狼猩红染色中,AH中、高剂量加载组以及Hige 阳性药物的纤维染色面积相比iso组均有所降低（P<0.05）。纤维化相关基因表达检测中,AH中剂量加载组在col-1的表达水平相比iso组有所降低（P<0.05）,AH高剂量加载组在col-1和col-3的表达水平上相比iso组则均显着下降（P<0.001）。实验三:各组小鼠生存情况方面,在35天的实验过程中,iso组小鼠在实验的第12和第13天分别死亡一只,其余各组均未发生死亡,但各组生存时间之间无统计学差异（P>0.05）。各组小鼠心脏取材数据方面,AH加载组HW/BW及HW/TL相比iso组有统计学意义的下降（P<0.05）。HE染色中,AH加载组可以减轻iso诱导的心肌细胞核的排列紊乱。胚胎蛋白表达检测方面,AH加载组ANP、BNP和β-MHC的相应基因表达均较iso组有所降低（P<0.05）。纤维染色方面,AH加载组的masson及天狼猩红纤维染色面积相比iso组均出现有统计学意义的下降（P<0.05）,Hige组却没有相较于iso组的明显改变（P>0.05）。实验四:TGF-β可以激活原代成纤维细胞Smad2/3的磷酸化,在大约30min时达到高峰。而TGF-β+AH可以较TGF-β组p-Smad2/3的表达水平下降（P<0.05）,并且AH可以抑制Smad4蛋白及其基因的表达（P<0.05）,上调Smad7蛋白及其基因的表达（P<0.05）。在β-AR抑制剂实验方面,TGF β+AH组、TGF β+AH+CGP-20712A及TGFβ+AH+ICI-118551组相比TGFβ组α-SMA均下降（P<0.05）,组间没有差异（P>0.05）。结论:1、AH可以在体外通过抑制TGF-β诱导的原代成纤维细胞表型向肌成纤维细胞转化来干预纤维化反应,且半数抑制浓度为2uM,以及可以在体外抑制PE诱导的原代心肌细胞的肥大反应。2、腹腔注射AH（10mg/kg）及口服给药AH（20mg/kg）都可以在体内抑制c57BL/6小鼠经iso诱导的心肌肥厚及心肌纤维化损害。3、乙酰化结构改造加强了去甲乌药碱在体内对iso诱导的小鼠心肌纤维化反应的干预作用。4、AH可以在体外抑制原代成纤维细胞由TGF-β激活的TGF-β/Smad信号通路,但其上游与β-AR无关。
邵帅[6]（2019）在《If通道抑制剂对心力衰竭心肌纤维化的作用及机制研究》文中认为背景及目的:心力衰竭（Heart failure,HF）一直以来都是心血管病医生在临床中治疗的难题,具有发病率高、再入院高以及死亡率高的特点,严重影响患者的生活质量。近年来,射血分数保留性心力衰竭（Heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF）逐渐得到人们的关注,如能在HFpEF阶段将HF加以控制,则能够延缓向射血分数下降性心力衰竭（Heart failure with reduced ejection fraction,HFrEF）发展的进程。HF的发病机制尚不明确,多认为与心室重构和心肌纤维化有关。依伐布雷定（Ivabradine,IVA）是一种窦房结If电流选择性特异性抑制剂,有研究提出IVA能够抑制HF动物模型心肌纤维化,具有逆转心室重构的作用,但其机制鲜有报道。本研究拟通过建立主动脉弓结扎术（Transverse aortic constriction,TAC）模型,模拟HF由HFpEF向HFrEF发展的过程,阐明IVA对压力超负荷导致的心肌纤维化及心室收缩及舒张功能障碍的影响,探讨IVA调控心室成纤维细胞（Ventricular fibroblasts,vFBs）增殖及转分化的分子机制,探讨其对miR-133a及TGF-β/Smad信号通路的作用,为HF心肌纤维化的防治提供新的理论基础。方法:1、将20只8周龄C57BL/6J雄性小鼠,随机分为假手术组（Sham组,n=10）和TAC模型组（TAC组,n=10）。记录术前及术后两组小鼠的体重、心率和鼠尾动脉压力变化。应用超声心动图与血流动力学检查分析术后4周、8周、12周、17周两组小鼠心脏结构和功能变化,应用H-E、Masson染色、天狼星红染色和免疫荧光染色观察心脏结构和心肌纤维化程度,应用实时荧光定量PCR（Real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR）和免疫蛋白质印迹（Western Blotting）检测miR-133a及TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的表达。应用ELISA检测血浆NT-proBNP水平。2、将TAC术后4周小鼠随机分为TAC-EFp模型组（n=8）、IVA-L组（10mg/kg/d,n=8）、IVA-H组（20mg/kg/d,n=8）,TAC术后9周小鼠随机分为TAC-EFr模型组（n=8）、IVA-L组（10mg/kg/d,n=8）、IVA-H组（20mg/kg/d,n=8）,给药8周。应用超声心动图与血流动力学检查分析不同组间小鼠心脏结构和功能变化。应用H-E、Masson染色、天狼星红染色和免疫荧光染色观察心脏结构和心肌纤维化程度。应用qRT-PCR和Western Blotting方法检测miR-133a及TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的表达。应用ELISA检测血浆NT-proBNP水平。应用Mapping lab和Langendorff心脏离体灌流技术检测心室电传导速度、传导方向、传导异质性和室性心动过速（Ventricular tachycardia,VT）诱发率。3、提取和培养新生SD大鼠vFBs,运用AngⅡ建立vFBs转分化模型,并分别给予IVA低剂量和高剂量干预,应用qPCR、Western Blotting和CCK-8法测定TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的表达和细胞增值率。4、通过脂质体转染方法在vFBs中分别过表达和沉默miR-133a,运用qRT-PCR方法检测miR-133a的表达水平,运用qRT-PCR和Western blotting方法观察CTGF、Collagen Ⅰ、CollagenⅢ表达,运用CCK-8方法检测vFBs增殖率。5、通过脂质体转染方法在vFBs中分别过表达和/或沉默miR-133a后,运用AngⅡ建立vFBs转分化模型,再分别给予IVA低剂量和高剂量干预,运用qRT-PCR和Western blotting方法观察CTGF、Collagen Ⅰ、CollagenⅢ表达。结果:1、TAC组小鼠术后4周DBP、IVSTd、LVPWd、IVRT、EDT、LVEDP和Tau明显升高,LVIDs、E/A及-dp/dtmax显着降低（p<0.05）;8周HR、SBP明显升高（p<0.05）,LVIDs显着性差异消失（p>0.05）,LVEF、LVFS、+dp/dtmax无差异性改变（p>0.05）;9周LVIDs、LVIDd开始增大（p<0.05）,LVEF、LVFS、+dp/dtmax开始降低（p<0.05）,NT-proBNP显着升高（p<0.05）,与术后时间呈正相关。病理学结果显示TAC组小鼠CVF显着增加（p<0.05）,与术后时间呈正相关。随着TAC术后时间的推移,miR-133a表达显着下调,其靶基因CTGF及TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达上调（p<0.05）。2、给药8周后,与TAC-EFp组比较,IVA-L组和IVA-H组HR减慢（p<0.05）,BP无变化;IVA-H组IVSTd、LVPWd、IVRT、EDT、LVEDP显着降低（p<0.05）,EF、FS、-dp/dtmax和+dp/dtmax升高（p<0.05）,而IVA-L组差异不明显（p>0.05）IVA-H组和IVA-L组NT-pro BNP、CVF显着降低（p<0.05）,miR-133a表达上调,其靶基因CTGF及TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达下调（p<0.05）。IVA-H组与IVA-L组间差异不明显（p>0.05）。3、给药8周后,与TAC-EFr组比较,IVA-L组和IVA-H组HR减慢（p<0.05）,NT-pro BNP、CVF降低（p<0.05）,miR-133a表达上调,其靶基因CTGF及TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达下调（p<0.05）,BP、IVSTd、LVPWd、LVIDd、LVIDs、EF和FS无变化（p>0.05）,IVA-H组IVRT、EDT、E/A、LVEDP和Tau降低（p<0.05）,-dp/dtmax和+dp/dtmax加快（p<0.05）。IVA-H组较IVA-L组IVRT、EDT、CVF降低（p<0.05）。电生理结果显示,TAC-EFr组LV传导模式紊乱,传导异质性增加,VT诱发率增高（p<0.05）,IVA-H组LV传导模式趋向正常,传导异质性降低,VT诱发率降低（p<0.05）;RV传导方向组间差异不明显（p>0.05）。4、Ang Ⅱ组vFBs增殖率升高,miR-133a下调,TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达上调,IVA干预后增殖率下降,miR-133a上调,蛋白表达下调（p<0.05）。5、过表达miR-133a后,vFBs增殖率降低,CTGF、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ表达下调（p<0.05）;过表达miR-133a并给予Ang Ⅱ刺激,CTGF、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ较Ang Ⅱ组表达下调,较Ad-miR-133a组上调（p<0.05）;沉默miR-133a后,细胞增殖率升高,CTGF、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ表达上调（p<0.05）;沉默miR-133a并给予Ang Ⅱ刺激,CTGF、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ表达进一步上调（p<0.05）。6、沉默miR-133a并给予Ang Ⅱ刺激和IVA干预,Si-miR-133a+Ang Ⅱ+IVA组较Si-NC+Ang Ⅱ+IVA组CTGF、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ表达显着上调（p<0.05）,较Si-miR-133a+Ang Ⅱ组显着下调（p<0.05）,与Si-NC+Ang Ⅱ组比较差异不明显（p>0.05）。结论:TAC术后4周小鼠心脏表现为左室肥厚、左室舒张功能障碍以及心肌纤维化,可模拟HFp EF心肌纤维化的病理过程;TAC术后9周小鼠心脏表现为左室肥厚、左室扩大、左室舒张及收缩功能均减退以及心肌纤维化,可模拟HFr EF心肌纤维化的病理过程。If通道抑制剂可通过调控miR-133a和TGF-β/Smad通路发挥抑制心肌纤维化作用,从而改善心室重构,降低VT发生率。对于心功能的改善作用在TAC-EFp组中的治疗效果较TAC-EFr组显着,提示早期干预HF的重要性。
季佳文[7]（2018）在《紫草煎剂对大鼠心房颤动拮抗作用的实验研究》文中研究表明目的:本文采用心电图检测紫草对心房颤动模型大鼠的心房颤动诱发机率和房颤持续时间的影响,超声心动图评价紫草对房颤模型大鼠心脏功能和重构水平的干预,免疫组化观察紫草对房颤大鼠心房纤维化程度的逆转。分析和比较以上结果,综合评估紫草对心房颤动模型大鼠的保护效应。方法:将SD大鼠随机分成四组:正常对照组、紫草治疗组、阳性对照组和房颤模型组。紫草治疗组、阳性对照组和房颤模型组首先采用尾静脉注射乙酰胆碱-氯化钙溶液的方式构建心房颤动大鼠模型。造模7天后予行肢体导联心电图检测,统计心房颤动的诱发几率和持续时间评估造模成功与否。随后,紫草治疗组以紫草溶液灌胃1周、阳性对照组以胺碘酮溶液灌胃1周、房颤模型组以生理盐水灌胃1周。后统计心房颤动的诱发时间、持续时间,同时,采用超声心动图测算左房内径（leftatrial diameter,LAD）、左房面积（left atrial area,LA area）、左心室舒张末期内径（left ventricular end diastolic dimension,LVDD）、左心室收缩末期内径（left ventricular end systolic dimension,LVDS）和射血分数（Ejection fraction,EF）;最后,取出各组大鼠心脏组织进行masson染色,以评估心房纤维化的程度。结果:1.紫草缩短了心房颤动的持续时间并降低了房颤发生率;2.紫草抑制了心房颤动模型大鼠的心房和心室扩大;3.紫草改善心房颤动模型大鼠的心房肌细胞纤维化。结论:1.紫草对心房颤动大鼠模型具有一定的抗心房颤动作用;2.紫草对心房颤动模型大鼠的心房、心室扩大具有抑制作用;3.紫草对心房颤动模型大鼠的心房扩大的保护作用可能与其能够抑制心房肌细胞纤维化用有关。
李洁白[8]（2018）在《补阳还五汤对舒张性心力衰竭大鼠心肌钙转运蛋白干预作用的研究》文中指出一、研究背景心力衰竭是很多心血管疾病的最终转归,随着全球中老年人口比例的增高和医疗事业的发展,心力衰竭的患病率也随之逐步上升,这种情况不仅存在于发达国家,发展中国家也面临此问题。在心力衰竭患者中一半以上为舒张性心力衰竭（diastolic heart failure,DHF）,且患病率还在以每年1%的速度递增。DHF的预后与收缩性心力衰竭（Systolic heart failure,SHF）没有明显的不同,但目前还没有明确有效的治疗方法和药物,主要采用的是经验性和对症性治疗。因此,找寻针对DHF有效的治疗方法和药物是临床上需要攻克的重点和难点,也有着重大的科学意义和实用价值。很多研究表明DHF时钙的转运和调节存在异常。钙在心肌收缩和舒张过程中细胞中是循环流动的,包括钙摄入和钙释放和钙储存三个部分,钙的正常转运对维持心脏的生理功能具有重要作用,因此如果其中任何一个环节出现异常转运,心肌细胞就会遭到破坏,心肌的舒缩功能也会受到影响。同时,心肌舒张过程中的钙转运,如肌浆网对Ca2+的摄取、受磷蛋白磷酸化等都需要消耗能量。中医认为,“气”的概念与现代生物学中的“能量”在理论上有一定的相通性,心肌能量代谢紊乱导致能量生成障碍很可能是气虚证的本质之一。另有研究表明,益气及活血药物对心肌舒缩功能的改善可能与调节和维持心肌细胞正常的钙转运有关。因此,本课题在前期研究基础及长期临床总结的基础上,创新性提出运用益气活血法及其代表方剂——补阳还五汤治疗DHF的假说,并认为Ca2+转运调节蛋白有可能是其潜在的药物作用靶点。二、研究目的运用补阳还五汤对DHF模型大鼠进行干预,观察补阳还五汤对DHF大鼠左心室舒张功能的影响,检测钙转运蛋白的表达量和其mRNA的表达水平,初步探寻补阳还五汤治疗DHF的药物干预靶点。三、研究方法运用随机抽样的方法,将大鼠分为假手术组与造模组,其中假手术组15只,造模组45只,造模组用腹主动脉缩窄法建立DHF大鼠模型,手术后10周后将经超声心动图检测诊断为DHF的大鼠分为造模组（n=11）、西药组（n=11）和中药组（n=11）。给药干预8周,其中中药组:补阳还五汤12.72g/（kg.d）灌胃,西药组:酒石酸美托洛尔0.0045g/（kg·d）灌胃,假手术组、造模组给予等量的去离子水灌胃,各组均每日灌胃1次。药物干预结束后,运用超声心动图测量大鼠左房室瓣口舒张早期E波的峰值流速（E）、舒张晚期A波的峰值流速（A）,并计算E/A比值;二尖瓣环舒张早期运动速度（e’）、二尖瓣环舒张晚期运动速度（a’）,并计算e’/a’、E/e’比值;运用蛋白免疫印迹法（Wstern blot）技术检测肌浆网上的钙泵（SERCA2a）和受磷蛋白（phospholamban,PLB）的蛋白表达;运用聚合酶链式反应法（PCR）检测SERCA2a、PLB、兰碱尼受体（Ryanodine receptor2,RyR2）和 L 型钙通道的 mRNA 转录。四、研究结果1、超声心动图检测结果:与假手术组大鼠相比,造模组大鼠的E/A、e’/a’值降低（p<0.05）,E/e’升高（p<0.05）。中药组e’/a’高于造模组（p<0.05）,中药组与西药组检测结果无统计学差异。2、Western blot检测结果:造模组大鼠心肌中SERCA2a与PLB的蛋白表达量与假手术组相比均有下降（p<0.05）,而西药组和中药组大鼠心肌中SERCA2a与PLB的蛋白表达量较造模组则升高（p<0.05）,且中药组和西药组在这两个蛋白的表达上无统计学差异（p>0.05）。3、PCR检测结果:L型钙通道各组mRNA转录均没有差异（p>0.05）;RyR2的mRNA中药组与造模组相比的转录和假手术组相比有所降低（p<0.05）,而西药组RyR2的mRNA转录与假手术组没有明显差异（p>0.05）,西药组和中药组的转录量与造模组均没有明显差异（p>0.05）;SERCA2a和PLB的mRNA转录造模组、中药组、西药组与假手术组相比均有降低（p<0.05）,治疗组中的西药组、中药组与造模组相比SERCA2a和PLB的mRNA转录量升高（p<0.05）,以上结果中药组与西药组无显着性差异（p>0.05）。五、结论1、DHF大鼠SERCA2a和PLB钙转运蛋白表达和mRNA的表达水平下降。2、益气活血法的代表方——补阳还五汤可以在一定程度上改善DHF大鼠左室舒张功能。3、补阳还五汤可能是通过提高SERCA2a和PLB的蛋白表达和mRNA转录来调节DHF大鼠左室的舒张功能的。
徐娟[9]（2017）在《miR-30c对心房纤维化及TGF-β1诱导心脏成纤维细胞纤维化的作用及机制研究》文中认为研究目的microRNA30c（miR-30c）在心室、肝脏、肾脏纤维化中发挥重要作用,但是,miR-30c在心房纤维化中是否发挥作用尚不清楚。本研究旨在探究miR-30c在心房纤维化中的作用及其具体分子机制。研究方法本课题以心房纤维化动物模型及心脏成纤维细胞（Cardiac fibroblasts,CFs）为研究对象,分为三部分:第一部分:建立腹主动脉缩窄（Abdominal aortic coarctation,AAC）致心房纤维化模型,分为模型组（7只）与假手术组（6只）。Masson染色检测左心房胶原分布情况,荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组织化学等方法检测左心房组织中miR-30c、Transforming Growth Factor receptor II（TGFβRII）的表达。心房快速起搏刺激,观察心房颤动诱发情况。第二部分:转化生长因子（Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1）刺激CFs、过表达/低表达miR-30c等方法,采用CCK-8、荧光定量PCR、蛋白免疫印迹、Transwell等技术观察细胞增殖、细胞分化、细胞迁移和胶原合成的变化。RNAhybrid和miRanda生物信息预测软件显示miR-30c能够与TGFβRII的3’UTR结合。双荧光素酶报告基因等方法验证TGFβRII是miR-30c的靶基因。第三部分:将30只成年雄性大鼠随机分成四组:假手术组（6只）、AAC模型组（8只）、AAC+miR-30c组（8只）和AAC+Control组（8只）。8周后,心房快速起搏刺激,观察心房颤动诱发情况。Masson染色检测胶原分布情况,荧光定量PCR、蛋白免疫印迹等方法检测两组左心房组织中miR-30c、TGFβRII、α-SMA、Col I和Col3α1的表达。研究结果1.与Sham组比较,AAC组左心房组织中miR-30c的表达下调,TGFβRII表达增加;Masson染色结果显示AAC组左心房组织中胶原含量较高;AAC组,心电图显示P波时限、PR间期明显延长,两组均未诱发出房颤。2.与对照组相比,TGF-β1干预CFs后,TGFβRII基因水平显着升高,miR-30c的表达下调;TGF-β1诱导的CFs转染miR-30c类似物/阴性对照后,抑制心脏成纤维细胞增殖,减少肌成纤维细胞分化及细胞迁移,同时Col I和Col3α1表达水平下降;然而,转染miR-30c抑制剂后表现出促纤维化的效应。双荧光素酶报告基因结果表明,过表达miR-30c后TGFβRII-WT-3’UTR的荧光素酶活性降低;相对TGFβRII-WT-3’UTR,TGFβRII-mu-3’UTR的荧光素酶活性增加;过表达miR-30c抑制TGFβRII基因和蛋白水平的表达,而低表达miR-30c则增加TGFβRII的表达。这说明TGFβRII是miR-30c的一个新的靶基因。3.过表达miR-30c能够抑制α-SMA、胶原蛋白Col I和Col3α1的表达,减轻左心房的纤维化程度,AAC+miR-30c组P波和PR间期明显缩短。结论miR-30c能够减轻腹主动脉缩窄致左心房纤维化,可能的作用机制为miR-30c通过靶基因TGFβRII,抑制心脏成纤维细胞增殖、肌成纤维细胞分化、细胞迁移以及胶原蛋白的合成,可能是心房纤维化和心房颤动潜在的治疗靶点。
李为真[10]（2016）在《L-精氨酸通过调节TGF-β/Smad信号减轻大鼠压力超负荷心肌肥厚的实验研究》文中指出目的:观察L-精氨酸（L-Arginine,L-Arg）对大鼠压力超负荷性心肌肥厚的影响,并探讨其是否能通过调节转化生长因子（Transforming Growth Factor,TGF）-β/Smad信号来减轻心肌肥厚。材料和方法:本实验采用部分结扎造成腹主动脉缩窄的方式来建立大鼠压力超负荷心肌肥厚的动物模型。首先,比较传统术式和改良术式、不同腹主动脉缩窄程度之间的差别,根据存活率以及观察心肌肥厚相关参数来选择后续实验所用动物模型的制备方式。其次,将实验动物根据有无腹主动脉缩窄手术以及不同干预药物分为4组:（1）假手术组:只分离出腹主动脉而不做缩窄处理;（2）手术组:按上述手术方式对大鼠施行腹主动脉缩窄术;（3）手术+L-Arg组:对大鼠施行腹主动脉缩窄术,术毕即开始对大鼠进行灌饲L-Arg 600mg/kg/day;（4）手术+L-Arg+L-硝基精氨酸甲酯（N-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME）组:对大鼠施行腹主动脉缩窄术,术毕即开始对大鼠进行灌饲L-Arg 600mg/kg/day,L-NAME 50mg/kg/day。在假手术组及手术组,均以等量生理盐水灌饲作为对照。6周后测定各组大鼠平均动脉压（Mean Artery Blood Pressure,MABP）、左心室重量指数（Left Ventricule Mass Index,LVMI）、左心室室壁厚度（Left Ventricular Wall Thickness,LVWT）、心肌细胞直径（Diameter of Cardiomyocyte,DCM）等形态学指标;然后,取各组大鼠心肌组织行HE和Masson染色进行组织学评估观察心肌细胞大体形态以及胶原分布情况;酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA）检测各组大鼠心肌组织心房利钠肽（Atrial Natriuretic Peptide,ANP）、脑型钠尿肽（brain natriuretic peptide,BNP）,Real-time聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测各组α-肌球蛋白重链（Myosin Heavy Chain,MHC）、β-MHC及Ι、Ⅲ型胶原mRNA表达;免疫蛋白印迹法（Western blotting）检测心肌组织α、β-MHC、TGF-β1及Ι、Ⅲ型胶原;另外,取各组大鼠心脏通过Langerndorf方式离体灌流分离出心肌细胞,进行原代培养,对于各组大鼠心肌细胞爬片行免疫荧光染色观察Smad2、3的表达。结果:以改良术式行腹主动脉缩窄建立的大鼠心肌肥厚模型较传统术式组存活率高,同时将大鼠腹主动脉直径缩窄至1.0mm较其他直径在诱导出心肌肥厚的同时,也能保证较高的存活率。与假手术组相比,手术组的MABP、LVMI、LVWT及DCM均显着增高（p<0.05）;HE染色发现手术组、手术+L-Arg+L-NAME组较假手术组、手术+L-Arg组心肌细胞横径以及细胞核明显增大,核染色明显深染;Masson染色可见手术组、手术+L-NAME+L-Arg组较假手术组、手术+L-Arg组心肌细胞排列明显紊乱,间质中胶原纤维明显增加。通过ELISA法检测各组心肌组织的ANP、BNP含量,结果显示与假手术组比,手术组ANP、BNP含量均显着升高（P<0.05）;与手术组比较,手术+L-Arg组ANP、BNP含量均显着降低（P<0.05）。手术+L-Arg+L-NAME组与手术+L-Arg组相比,ANP含量有升高趋势,但结果无显着差异（P>0.05）。Western blotting和Real-time PCR检测发现各组心肌组织β-MHC表达时发现:无论在mRNA水平还是蛋白水平,手术组、手术+L-Arg+L-NAME组的β-MHC表达较另外两组明显增强（P<0.05）;各组Ι型胶原在mRNA和蛋白水平并无明显差异（p>0.05）,而Ⅲ型胶原在mRNA和蛋白水平的表达有显着差异。测定心肌胶原Ι/Ⅲ比值,我们发现与假手术组相比,手术组两者比值显着降低（p<0.05）,与手术组比较,手术+L-Arg组两者比值显着升高;而手术+L-Arg+L-NAME组与手术组比较,两组胶原Ι/Ⅲ比值并无显着差异（p>0.05）。Western blotting检测结果显示:与假手术组比较,手术组心肌组织TGF-β1含量明显升高;而L-精氨酸干预后,TGF-β1含量较手术组（未行L-精氨酸干预）明显降低;当一氧化氮合酶（Nitric Oxide Synthase,NOS）抑制剂L-NAME干扰L-精氨酸作用后,其TGF-β1含量较L-Arg组有所增加,但仍低于手术组。免疫荧光染色发现在手术组、手术+L-Arg+L+NAME组出现Smad2/3核聚集现象,而其他2组则无此现象。结论:本实验通过改良术式成功建立大鼠压力超负荷心肌肥厚模型,观察到心肌组织存在明显的胶原沉积,ANP、BNP和β-MHC含量均增加,TGF-β1表达增强,同时伴有Smad2/3复合物核转位;给予L-Arg能减轻或抑制上述作用,而一氧化氮合酶抑制剂L-NAME能部分抑制或抵消上述L-Arg的抗心肌肥厚、抗纤维沉积作用。L-精氨酸抗心肌肥厚、抗纤维沉积作用部分是通过调控TGF-β1/Smad信号,但具体作用机制仍需今后进一步研究。
二、干预肾素血管紧张素系统对腹主动脉结扎大鼠心房颤动诱发率的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、干预肾素血管紧张素系统对腹主动脉结扎大鼠心房颤动诱发率的影响（论文提纲范文）
（1）基于ERK1/2与TGF-β1/Smad3通路研究参连复脉颗粒干预高血压心房重构及房颤易感性机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 心房颤动的中医研究进展 |
| 1. 病名沿革 |
| 2. 心房颤动的脉象 |
| 3. 房颤的中医病因 |
| 4. 房颤的中医病机 |
| 5. 房颤的辨证分型 |
| 6. 中医对房颤的治疗 |
| 7. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 高血压房颤的发生机制与药物防治靶点 |
| 1. 高血压与房颤的患病情况 |
| 2. 高血压对房颤的影响因素 |
| 3. 高血压房颤的病理生理学机制 |
| 4. 心房纤维化是导致心律失常的心房结构重构的重要特点 |
| 5. 高血压房颤心房纤维化的机制 |
| 6. 高血压房颤的药物干预靶点 |
| 7. 中药可能的防治靶点 |
| 8. 小结 |
| 参考文献 |
| 第一部分 临床文献研究 |
| 前言 |
| 益气活血法治疗房颤的Meta分析 |
| 目的 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）基于IL-10/STAT3通路探讨益气温阳方对压力负荷心衰大鼠心脏功能的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1. 心力衰竭的现代医学研究进展 |
| 1.1 心力衰竭的流行病学研究 |
| 1.2 心力衰竭的机制研究 |
| 1.3 西医治疗 |
| 2. 心力衰竭的中医药研究进展 |
| 2.1 从中医病名的沿革认识心力衰竭 |
| 2.2 中医辨证论治心力衰竭 |
| 2.3 中医名家论治心力衰竭 |
| 2.4 中医药治疗心力衰竭的现代研究 |
| 3. 益气温阳方前期研究结果 |
| 3.1 益气温阳方LC-MS/MS分析 |
| 3.2 基础研究 |
| 3.3 临床研究 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验1: 制备压力负荷诱导的wistar大鼠心力衰竭模型 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 实验2: 益气温阳方对压力负荷诱导的心衰大鼠心功能的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 实验3: 益气温阳方对压力负荷诱导的心衰大鼠心肌纤维化的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 实验4: 益气温阳方对压力负荷诱导的心衰大鼠心肌细胞凋亡的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 实验5: 益气温阳方对压力负荷诱导的心衰大鼠IL-10、TNF-α的影响 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 实验6: 益气温阳方对压力负荷诱导的心衰大鼠IL-10/STAT3信号通路的影响 |
| 6.1 实验材料 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.3 结果 |
| 6.4 讨论 |
| 7 总结 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
| 攻读博士学位期间申请的课题和成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）人参醇提物治疗慢性心力衰竭药效评价及作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词 |
| 文献综述一 慢性心衰的中医药认识及现代研究进展 |
| 1 慢性心力衰竭的中医药认识 |
| 2 慢性心力衰竭的现代研究进展 |
| 3 慢性心力衰竭的现代防治手段 |
| 文献综述二:人参及其防治慢性心衰研究进展 |
| 1 中医治疗慢性心衰进展 |
| 2 人参治疗慢性心衰相关研究 |
| 前言 |
| 第一章: 人参干预慢性心衰药效学研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂与耗材 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 人参提取物的制备以及阳性药配制 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 一般观察 |
| 2.4 实验分组及给药 |
| 2.5 超声心动检测大鼠心功能 |
| 2.6 心室压力-容量测定仪检测大鼠心功能 |
| 2.7 实验动物取材 |
| 2.8 HE染色观察大鼠心肌病理组织改变 |
| 2.9 ELISA法检测大鼠血清中脑钠肽(BNP)含量改变 |
| 3 统计分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 大鼠死亡情况以及一般状况 |
| 4.2 大鼠成模情况 |
| 4.3 超声心动检测大鼠心功能结果 |
| 4.4 心室压力-容量测定仪检测大鼠心功能结果 |
| 4.5 HE染色观察大鼠心肌病理组织结果 |
| 4.6 人参提取液对大鼠血清中BNP含量影响 |
| 5 小结 |
| 第二章: 人参干预慢性心衰作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂以及耗材 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 人参提取液制备 |
| 2.2 实验分组及给药 |
| 2.3 模型制备 |
| 2.4 取材 |
| 2.5 样品总RNA提取 |
| 2.6 RNA质量检测与cDNA文库构建 |
| 2.7 RNA测序 |
| 2.8 差异表达基因筛选 |
| 2.9 差异表达基因检测 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 RNA质检结果 |
| 3.2 差异表达基因筛选 |
| 3.3 差异表达基因功能分析 |
| 3.4 差异表达基因检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 正常心脏的能量代谢 |
| 4.2 心衰时能量代谢 |
| 4.3 基于能量代谢的思考 |
| 5 小结 |
| 第三章: 人参干预慢性心衰机制关键靶标研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物及细胞 |
| 1.2 主要试剂及药品 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 溶液配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 人参提取液中总皂苷部分的制备 |
| 2.2 H9c2心肌细胞培养 |
| 2.3 实验分组与加药 |
| 2.4 提取总RNA |
| 2.5 反转录 |
| 2.6 qRT-PCR |
| 2.7 计算方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 人参提取液中总皂苷的制备 |
| 3.2 RNA提取结果 |
| 3.3 PPARα表达情况 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）基于Toll样受体信号介导炎症反应探讨温针灸对自发性高血压大鼠的抗炎机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 温针灸对自发性高血压大鼠血压及炎症状态的调控作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 温针灸对自发性高血压大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路调控机制研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 温针灸通过调控炎症反应发挥对自发性高血压大鼠内皮细胞保护作用的机制 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 附图1 Toll样受体家族及其信号传导通路 |
| 附图2 Toll受体信号通路影响血压机制 |
| 附图3 动物实验技术路线图 |
| 附图4 qPCR实验过程中部分扩增曲线 |
| 附图 5qPCR实验过程中部分熔解曲线 |
| 综述 |
| 综述一 TLRs通路各层级在高血压病及免疫功能调节中的作用机理分析 |
| 综述二 针灸调节血压及免疫功能机制的研究进展 |
| 综述三 高血压病与炎症因子之间的相关性分析 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（5）强心方治疗舒张性心力衰竭患者的临床疗效观察及乙酰化去甲乌药碱干预心肌纤维化与心肌肥厚的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 临床研究 强心方治疗舒张性心力衰竭患者的临床疗效观察 |
| 1 研究资料与方法 |
| 1.1 研究类型 |
| 1.2 研究对象 |
| 1.3 诊断标准 |
| 1.4 病例筛选标准 |
| 1.5 分组方法 |
| 1.6 治疗方案 |
| 1.7 研究流程 |
| 1.8 观察内容 |
| 1.9 统计学资料 |
| 1.10 技术路线图 |
| 2 研究结果 |
| 2.1 一般资料及基线分布情况 |
| 2.2 疗效评价指标分析 |
| 2.3 NT-proBNP指标分析 |
| 2.4 超声影像学相关指标分析 |
| 2.5 自主神经功能相关指标分析 |
| 2.6 安全性评价分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 舒张性心衰概论 |
| 3.2 舒张性心衰的诊断 |
| 3.3 舒张性心衰的西医治疗研究进展 |
| 3.4 舒张性心衰与自主神经系统功能 |
| 3.5 舒张性心衰的中医病因病机 |
| 3.6 舒张性心衰的中医药治疗研究进展 |
| 3.7 董师中医临证思路 |
| 3.8 临床研究部分结果分析 |
| 第二部分 实验研究 乙酰化去甲乌药碱(AH)对心肌纤维化及心肌肥厚的作用及其机制探讨的实验研究 |
| 实验一 乙酰化去甲乌药碱对TGF-β诱导的原代心肌成纤维细胞纤维化及苯肾上腺素诱导的原代心肌细胞病理性肥大的影响作用的体外研究 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 试剂配制 |
| 1.4 结果及统计学分析 |
| 1.5 实验结果 |
| 实验二 不同剂量乙酰化去甲乌药碱对异丙肾上腺素诱导(iso)的小鼠心肌纤维化与病理性肥厚影响作用的体内研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 试剂配制 |
| 2.4 结果及统计学分析 |
| 2.5 实验结果 |
| 实验三 经口服的乙酰化去甲乌药碱对iso诱导的小鼠心肌纤维化与病理性肥厚影响作用的体内研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 试剂配制 |
| 3.4 结果及统计学分析 |
| 3.5 实验结果 |
| 实验四 乙酰化去甲乌药碱对TGF-β诱导的原代心肌细胞纤维化影响的作用机制的体外研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 试剂配制 |
| 4.4 结果及统计学分析 |
| 4.5 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 5.1 心肌纤维化概述 |
| 5.2 心肌纤维化的现代医学研究进展 |
| 5.3 心肌纤维化的中医药研究进展 |
| 5.4 实验研究部分结果分析 |
| 创新点 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
（6）If通道抑制剂对心力衰竭心肌纤维化的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、压力超负荷致心肌纤维化模型的建立与评价 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验对象及实验方法 |
| 1.1.2 实验试剂及实验仪器 |
| 1.1.3 实验方法 |
| 1.1.4 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 TAC模型小鼠各时间点心率(Heart rate,HR)的变化 |
| 1.2.2 TAC模型小鼠各时间点血压(Blood pressure,BP)的变化 |
| 1.2.3 TAC模型小鼠心脏结构及功能指标的改变 |
| 1.2.4 TAC模型小鼠血流动力学指标的变化 |
| 1.2.5 TAC模型小鼠血清中NT-proBNP水平变化 |
| 1.2.6 组织病理学检查 |
| 1.2.7 TAC模型小鼠心肌组织中miR-133a及其靶基因在mRNA水平变化 |
| 1.2.8 TAC模型小鼠心肌组织中心肌纤维化标志物在蛋白质水平变化 |
| 1.2.9 TAC模型小鼠心肌组织中TGF-β/Smad通路蛋白在蛋白质水平变化 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 心肌纤维化模型的建立与改良 |
| 1.3.2 联合利用超声心动图和血流动力学评价TAC模型 |
| 1.3.3 利用组织病理学及分子生物学评价TAC模型 |
| 1.4 小结 |
| 二、If通道抑制剂对TAC模型小鼠心肌纤维化的作用 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验对象、实验分组及干预方式 |
| 2.1.2 实验试剂及实验仪器 |
| 2.1.3 实验方法 |
| 2.1.4 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 依伐布雷定对舒张功能下降心肌纤维化模型的影响 |
| 2.2.2 依伐布雷定对收缩功能下降心肌纤维化模型的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 依伐布雷定对压力超负荷致HF小鼠心脏收缩和舒张功能的影响 |
| 2.3.2 依伐布雷定对压力超负荷致HF小鼠心肌纤维化的影响 |
| 2.3.3 依伐布雷定对压力超负荷致HF小鼠电重构的影响 |
| 2.4 小结 |
| 三、If通道抑制剂干预由AngⅡ诱导的成纤维细胞转分化模型的机制研究 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验对象 |
| 3.1.2 实验材料及实验仪器 |
| 3.1.3 实验方法 |
| 3.1.4 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 AngⅡ诱导SD乳鼠vFBs转分化模型的建立 |
| 3.2.2 依伐布雷定对vFBs转分化和增殖的作用 |
| 3.2.3 依伐布雷定在vFBs转分化模型中对miR-133a的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 心肌纤维化的作用及机制 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）紫草煎剂对大鼠心房颤动拮抗作用的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1. 紫草的药理学研究进展 |
| 1.1 紫草的化学成分 |
| 1.2 紫草的药理作用 |
| 1.3 小结 |
| 参考文献 |
| 2. 中医对心房颤动的认识 |
| 2.1 心房颤动的中医病因病机 |
| 2.2 心房颤动的中医药治疗 |
| 2.3 小结 |
| 参考文献 |
| 3. 心房颤动的研究进展 |
| 3.1 流行病学 |
| 3.2 病因及危险因素 |
| 3.3 发病机制 |
| 3.4 展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验用药物及试剂 |
| 1.3 实验仪器和设备 |
| 1.4 实验方法 |
| 2. 实验数据采集 |
| 2.1 心电图 |
| 2.2 超声心动图 |
| 2.3 形态学观察 |
| 3. 实验数据分析 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 紫草缩短了心房颤动的持续时间并降低了发生率 |
| 4.2 紫草改善心房颤动模型大鼠的心房和心室扩大 |
| 4.3 紫草改善心房颤动模型大鼠的心肌细胞纤维化 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 心房颤动动物模型的制备 |
| 5.2 紫草对心房颤动模型大鼠的抗心房颤动作用 |
| 5.3 紫草对心房颤动大鼠的作用机制的探讨 |
| 6. 总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（8）补阳还五汤对舒张性心力衰竭大鼠心肌钙转运蛋白干预作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文词汇缩略表 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一、舒张性心力衰竭研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二、心肌钙调控蛋白与舒张性心力衰竭 |
| 参考文献 |
| 第二章 实验研究 |
| 前言 |
| 一、材料 |
| 1. 实验动物及饲养 |
| 2. 实验仪器 |
| 3. 实验试剂 |
| 二、方法 |
| 1. 动物分组及造模 |
| 2. 实验药物 |
| 3. 药物制备 |
| 4. 给药方法 |
| 5. 超声心动图检测 |
| 6. Western blot检测 |
| 7. PCR检测 |
| 8. 统计学分析 |
| 三、结果 |
| 1. 一般情况 |
| 2. 超声心动图结果 |
| 3. 各组对钙转运蛋白表达的影响 |
| 4. 各组对钙转运蛋白mRNA表达的影响 |
| 四、讨论 |
| 1. DHF的流行病学特点 |
| 2. 超声心动图对DHF诊断的意义 |
| 3. 心肌正常的钙转运机制 |
| 4. DHF的钙转运异常 |
| 5. 目前DHF针对钙转运的治疗 |
| 6. 中医对DHF的认识 |
| 7. 本实验结果 |
| 8. 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（9）miR-30c对心房纤维化及TGF-β1诱导心脏成纤维细胞纤维化的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写一览表 |
| 绪论 |
| 第一部分 大鼠腹主动脉缩窄致心房纤维化模型的建立 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1. 实验动物和实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 统计学分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 miR-30c减轻TGF-β1诱导的心脏成纤维细胞纤维化的机制研究 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1. 实验动物和实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 体内实验验证过表达miR-30c对腹主动脉缩窄致心房纤维化的影响 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1. 实验动物和实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 统计学分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
（10）L-精氨酸通过调节TGF-β/Smad信号减轻大鼠压力超负荷心肌肥厚的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词 |
| 绪论 |
| 第一部分 建立大鼠压力超负荷型心肌肥厚模型 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 方法 |
| 1.4 结果 |
| 1.5 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 L-精氨酸减轻压力超负荷型大鼠心肌肥厚的研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三部分 L-精氨酸通过抑制TGF-β/Smad信号通路减轻心肌肥厚的研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述:病理性心肌肥厚信号通路研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读期间发表或撰写的学术论文 |
四、干预肾素血管紧张素系统对腹主动脉结扎大鼠心房颤动诱发率的影响（论文参考文献）
- [1]基于ERK1/2与TGF-β1/Smad3通路研究参连复脉颗粒干预高血压心房重构及房颤易感性机制[D]. 马征. 北京中医药大学, 2021(01)
- [2]基于IL-10/STAT3通路探讨益气温阳方对压力负荷心衰大鼠心脏功能的影响[D]. 李鹤. 南京中医药大学, 2021(01)
- [3]人参醇提物治疗慢性心力衰竭药效评价及作用机制研究[D]. 崔如意. 中国中医科学院, 2020(01)
- [4]基于Toll样受体信号介导炎症反应探讨温针灸对自发性高血压大鼠的抗炎机制[D]. 金圣博. 辽宁中医药大学, 2020(01)
- [5]强心方治疗舒张性心力衰竭患者的临床疗效观察及乙酰化去甲乌药碱干预心肌纤维化与心肌肥厚的实验研究[D]. 周桢. 上海中医药大学, 2019(03)
- [6]If通道抑制剂对心力衰竭心肌纤维化的作用及机制研究[D]. 邵帅. 天津医科大学, 2019(02)
- [7]紫草煎剂对大鼠心房颤动拮抗作用的实验研究[D]. 季佳文. 南京中医药大学, 2018(09)
- [8]补阳还五汤对舒张性心力衰竭大鼠心肌钙转运蛋白干预作用的研究[D]. 李洁白. 北京中医药大学, 2018(01)
- [9]miR-30c对心房纤维化及TGF-β1诱导心脏成纤维细胞纤维化的作用及机制研究[D]. 徐娟. 上海交通大学, 2017(01)
- [10]L-精氨酸通过调节TGF-β/Smad信号减轻大鼠压力超负荷心肌肥厚的实验研究[D]. 李为真. 上海交通大学, 2016(03)